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线性扩增介导的PCR方法用于检测慢病毒载体在白血病细胞基因组中插入位点的可行性
目前,病毒载体基因转导技术是基因治疗中为成熟的生物学方法,其中逆转录病毒载体,因其具有可直接整合于宿主细胞基因组并能够长期稳定表达的特点而成为临床基因治疗的核心技术,分析病毒载体在宿主染色体中插入位点的常用方法包括Southern blot、RT-PCR等,这些方法均需要足量含高拷贝数已整合有病毒载体的样本DNA以获取有用的序列信息,且受到靶序列的大小、位置及构象的限制,故其灵敏度较差.目前可用于同时检测低拷贝数、多处未知DNA插入位点旁序列的精确灵敏的方法是线性扩增介导的PCR(linear amplification-mediated PCR,LAM-PCR)法[1,2],我们探讨了该技术用于分析检测慢病毒载体(lentiviral vector)在人白血病细胞基因组中插入位点旁序列的可行性.
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全基因组扩增法应用于低拷贝数DNA检测
目的建立基于多重置换扩增(MDA)技术的全基因组扩增(WGA)方法,实现对低拷贝数(LCN)DNA样品进行分析.方法采用REPLI-g试剂盒对样本进行等温全基因组扩增,扩增产物采用ProfilerPlus试剂盒确定样本的十个STR基因座的等位基因型.结果10pg DNA模板经全基因组扩增后,能够进行DNA分型.结论全基因组扩增可以用于LCN的DNA分析,帮助提高微量物证的检出成功率.
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低拷贝模板DNA分型及其在法医学中的应用
近年来,低拷贝模板类生物物证在法庭科学领域中的应用越来越广泛.然而由于其自身存在的一些限制性因素,始终是法庭科学工作者关注的一个焦点.本文从低拷贝模板DNA的定义及其在法庭科学应用中的有效性、应用范围、分型策略、质量控制、重复性原则、随机阈值等方面对低拷贝数分型及其在法庭科学应用中的新研究进展进行了综述.