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NFAT2在非小细胞肺癌中的表达及预后关联研究
目的:研究NFAT2在非小细胞肺癌(NSCLC)中的表达情况及与患者生存预后的关系.方法:收集原发性NSCLC肿瘤组织315例及其配对的正常组织164例,免疫组织化学染色检测NFAT2蛋白表达情况,同时进行临床关联及预后分析.结果:NFAT2在NSCLC中高表达(P<0.001).在女性及非吸烟早期NSCLC中,NFAT2表达上调与生存期缩短相关,差异具有统计学意义(P=0.003、P=0.001).结论:NFAT2是NSCLC发生的危险因子,NFAT2高表达可能预示着不良预后结局.
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不同程度炎性血管内皮细胞损伤时线粒体功能及过氧化物酶体增殖物活化受体γ共激活因子-1α、活化T细胞核因子的变化
目的 观察肿瘤坏死因子(TNF-α)诱导的离体血管内皮细胞损伤后线粒体功能、过氧化物酶体增殖物活化受体γ共激活因子-1α(PGC-1α)、活化T细胞核因子1(NFAT1)、活化T细胞核因子2(NFAT2)的变化.方法 (1)不同浓度的TNF-α(10、20、40、80 ng/mL)刺激人脐静脉内皮细胞(HUVECs)12、24、36 h制备不同程度的血管内皮细胞损伤模型,CCK-8法检测细胞活性、AnnexinⅤ-FITC/PI双染法检测细胞凋亡,倒置光学显微镜下观察细胞形态,以此确定模型是否建立成功.(2)采用Jc-1免疫荧光染色结合荧光显微镜检测线粒体膜电位,MitoSOX?Red染色结合荧光显微镜检测线粒体活性氧(mtROS).(3)采用RT-qPCR、Western blot方法分别检测PGC-1α、NFAT1、NFAT2 mRNA及蛋白水平.结果 (1)随着TNF-α刺激浓度及作用时间的增加,HUVECs活性逐渐下降,在浓度为40 ng/mL,刺激时间为24 h,细胞活性下降约49％,接近TNF-α诱导HUVECs损伤的IC50,差异有统计学意义(P<0.05).20、40、80 ng/mL TNF-α刺激HUVECs 24 h后,细胞凋亡率逐渐升高,差异具有统计学意义(P<0.05).(2)随着血管内皮细胞损伤程度的增加,线粒体膜电位逐渐下降,mtROS逐渐升高(均P<0.05).(3)PGC-1αmRNA及蛋白表达水平逐渐下降,核转录因子NFAT1、NFAT2 mRNA及蛋白表达水平逐渐升高(均P<0.05).结论 随着血管内皮细胞损伤程度的增加,线粒体功能障碍逐渐加剧,NFAT表达量逐渐增加.
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补肾填精方对快速老化模型小鼠活化的T细胞转录核因子蛋白表达的影响
目的 观察补肾填精方左归丸对快速老化模型小鼠骨组织破骨细胞功能的影响,探讨其作用机制是否与干预活化的T细胞转录核因子蛋白表达有关.方法 取SAMR1同源对照组小鼠8只为对照组(SAMR1),取SAMP6衰老模型小鼠16只,随机分为模型组(SAMP6)、左归丸组(ZGP),每组8只.灌胃给药12周后收集各组小鼠股骨组织,采用HE染色法观察股骨组织形态,采用TRAP染色法观察股骨组织破骨细胞数,采用Western-blot法检测股骨组织NFAT2蛋白表达水平.结果 与SAMR1比较,SAMP6股骨组织形态明显改变、破骨细胞数增多、NFAT2蛋白表达显著升高;与SAMP6比较,补肾填精方能够部分改善模型小鼠的股骨组织形态、减少破骨细胞数、下调NFAT2蛋白表达.结论 补肾填精方左归丸对快速老化模型小鼠骨质疏松具有一定的防治作用,其作用机制可能与其通过干预NFAT2蛋白表达调节破骨细胞功能有关.
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NFAT2参与高糖诱导的大鼠足细胞凋亡
目的 探讨高糖在体外培养足细胞中是否激活NFAT2并导致足细胞凋亡,并探讨其发生机制.方法 大鼠足细胞分别在不同的培养液中(葡萄糖5.3、10、20、30和40 mmol/L,葡萄糖5.3 mmol/L+Mannitol 14.7 mmol/L,葡萄糖20 mmol/L+11R-vivit 100 nmol/L,葡萄糖20 mmol/L+CsA 500 nmol/L)培养不同的时间(0.5、1、2、4、12、24和48 h);分别用免疫荧光、Western blot检测NFAT 2的活化;流式细胞术检测足细胞的凋亡,实时定量PCR和Western blot检测Bax表达;用激光共聚焦动态观察足细胞内Ca2+水平的变化.结果 不同葡萄糖浓度培养的足细胞,足细胞核中NFAT2/Histone3的比值分别为0.999±0.001;1.652±0.188;2.405±0.281;1.850±0.397及2.000±0.381,葡萄糖20 mmol/L(HG)分别作用足细胞0.5、1、2和4 h,Western blot显示NFAT2/Histone 3结果分别为:1.253±0.332、1.656±0.464、2.080±0.319及1.601±0.431,培养2 h时NFAT2的活化达到高峰;经过CsA或者11R-VIVIT预处理后可见完全阻断NFAT2的核积累,也阻断细胞凋亡;同时,我们发现高糖可增加体外培养足细胞的钙离子内流,导致NFAT2的核积累和Bax表达.结论 高糖可能通过CaN/NFAT2/Bax信号通路介导足细胞的凋亡,阻断CaN/NFAT2/Bax信号通路可以减少高糖诱导的足细胞凋亡.
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Calcineurin,NFAT2,COX-2和VEGF-A在体外培养正常黑素细胞和不同黑素瘤细胞系中的表达
目的 检测Calcineurin/NFAT信号途径中Calcineurin,NFAT2,COX-2和VEGF-A分子在正常人黑素细胞和不同黑素瘤细胞系中的表达,初步探讨它们与黑素瘤发生、发展的关系.方法 选取正常人原代黑素细胞(MC)及来源于原位(WM793B)、侵袭性(LIBR)及转移性(SK-MEL-5)的黑素瘤细胞系,采用RT-PCR,Western blot检测四种细胞中Calcineurin,NFAT2,COX-2和VEGF-A的表达情况.结果 与正常人黑素细胞相比,在不同黑素瘤细胞系中Calcineurin,NFAT2,COX-2和VEGF-A 4个分子明显高表达.结论 Calcineurin/NFAT信号途径可能与黑素瘤的发生有关.
