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Calcineurin和心肌细胞肥大
近年发现Calcineurin是启动心肌细胞肥大和心力衰竭的重要信号分子,免疫抑制药物环胞素A(CsA)、FK506以及三种不同的Calcineurin蛋白抑制剂AKAP79,cabin-1/cain和MCIP1能阻断底物与Calcineurin催化亚单位结合,有可能阻止Calcineurin信号下传,从而预防和治疗心肌肥大和心力衰竭.本文就这方面的进展加以综述.
关键词： Calcineurin 心肌肥大 -
人Calcineurin B基因克隆、表达和纯化
目的:构建人Calcineurin B(CnB)基因表达载体,在大肠杆菌中高效表达并纯化Calcineurin B蛋白.方法:用RT-PCR方法从人胎脑总RNA中反转录扩增Calcineurin B,将其插入克隆载体pGEM-T-easy中,测序鉴定阳性克隆,并将鉴定正确的Calcineurin B亚克隆至表达载体pET-32b(+),构建重组表达载体pET-CnB.结果:阳性重组子在大肠杆菌BL21(DE3)和BL21(DE3)pLysS中,经IPTG诱导可高效表达Calcineurin B,经15%SDS-PAGE分析可观察到分子量与理论值相符(39kD)的诱导表达条带,并发现Calcineurin B主要以可溶性形式表达.Western blot结果证实,39kD的表达条带可与抗硫氧还蛋白的单克隆抗体起特异反应.用His-bind亲和层析纯化得到了纯度较高的calcineurin B融合蛋白.结论:用基因工程技术在大肠杆菌中高效表达人calcineurin B,并得到了纯度较高的calcineurin B融合蛋白,为进一步研究其生物学功能及研制calcineurin B单克隆抗体奠定了基础.
关键词： Calcineurin 基因克隆 表达 纯化 -
Calcineurin 在大鼠心脏缺血预处理中的作用
为观察环孢霉素(syclosporin A)对缺血预处理心脏保护作用的影响,探讨Calcineurin信号通路在心脏缺血预处理中的作用,制备离体大鼠心肌缺血/再灌注模型,测定心功能和心肌Calcineurin活性.结果发现,缺血预处理明显减轻缺血/再灌注的心功能抑制,与单纯缺血/再灌注比较,冠状动脉灌流量、收缩期左室内压大变化速率和舒张期左室内压大变化速率分别减少39%(P<0.05)、33%(P<0.01)和52%(P<0.05),心肌钙含量下降21%(P<0.01).Calcineurin 抑制剂环孢霉素A可抵消缺血预处理的心肌保护作用.此外,缺血45 min /再灌15 min 使心肌Calcineurin 活性升高,与对照组相比较,Calcineurin活性增加1.9倍(P<0.01).单纯缺血预处理组心肌Calcineurin的活性较对照组增加2.3倍(P<0.01).环孢霉素A预先处理心脏则完全阻断了缺血预处理诱导的Calcineurin激活,与缺血预处理组相比较,其活性下降75%(P<0.01).以上提示Calcineurin途径介导了缺血预处理的心脏保护作用.
关键词： 缺血 Calcineurin 环孢霉素A 再灌注损伤 大鼠 -
Calcineurin,NFAT2,COX-2和VEGF-A在体外培养正常黑素细胞和不同黑素瘤细胞系中的表达
目的 检测Calcineurin/NFAT信号途径中Calcineurin,NFAT2,COX-2和VEGF-A分子在正常人黑素细胞和不同黑素瘤细胞系中的表达,初步探讨它们与黑素瘤发生、发展的关系.方法 选取正常人原代黑素细胞(MC)及来源于原位(WM793B)、侵袭性(LIBR)及转移性(SK-MEL-5)的黑素瘤细胞系,采用RT-PCR,Western blot检测四种细胞中Calcineurin,NFAT2,COX-2和VEGF-A的表达情况.结果 与正常人黑素细胞相比,在不同黑素瘤细胞系中Calcineurin,NFAT2,COX-2和VEGF-A 4个分子明显高表达.结论 Calcineurin/NFAT信号途径可能与黑素瘤的发生有关.
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调控Wnt5a/Ca2+/Calcineurin/NFAT通路对黑素瘤细胞增殖、侵袭能力的影响
目的 探讨调控Wnt5 a/Ca2+/Calcineurin/NFAT通路对黑素瘤细胞增殖、侵袭能力的影响.方法 体外培养慢病毒转染的黑素瘤稳转细胞系;Western blot法检测稳转细胞系中Wnt5a,NFAT,Calcineurin和VEGF蛋白的表达;CCK-8法检测稳转细胞系的增殖能力;Transwell小室实验检测稳转细胞系的侵袭能力.结果 Wnt5a蛋白的表达与Calcineurin,NFAT,VEGF蛋白的表达具有正相关性;上调Wnt5a的表达可使黑素瘤细胞增殖、侵袭能力增强,而下调Wnt5a的表达则可降低黑素瘤细胞的增殖和侵袭能力.结论 调控Wnt5 a/Ca2 +/Calcineurin/NFAT通路可影响黑素瘤细胞的增殖与侵袭,该信号通路可能参与了黑素瘤的发生、发展过程.
关键词： 黑素瘤 Wnt5a Ca2+ Calcineurin NFAT -
钙调神经磷酸酶在肿瘤骨转移中的作用研究进展
引起骨转移的常见肿瘤有乳腺癌(65% ～75%) 、前列腺癌( 65% ～75% ) 、甲状腺癌(60% ) 、膀胱癌(40% ) 、肺癌(30%～40%) 、肾癌(20%～25%)和恶性黑色素瘤(14%～45% )等[1],其主要症状包括逐渐加重的局部疼痛、椎体转移导致的脊髓和神经压迫、高钙血症、部分伴发的病理性骨折等.近期研究发现钙调神经磷酸酶(Calcineurin, CaN)在恶性肿瘤骨转移的发生过程中起了重要作用,现就钙调神经磷酸酶的功能及其在肿瘤骨转移中的作用相关研究进展做一简要综述.
