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细胞免疫荧光法在视神经脊髓炎患者血清及脑脊液中水通道蛋白-4抗体检测中的运用价值
目的 探讨细胞免疫荧光法在视神经脊髓炎患者血清及脑脊液中水通道蛋白-4抗体(APQ-4Ab)检测中的运用价值.方法 选择在2013年6月至2017年4月在某院诊断为视神经脊髓炎患者58例(NMO组)和49例多发性硬化患者(MS组),以及体检健康者45例作为研究对象,收集相关人群的血清和脑脊液.分别采用细胞免疫荧光法(CBA)、乳胶免疫增强比浊法(PETIA)和酶联免疫法(ELISA)检测APQ-4Ab,并分析相关指标.结果 3种方法分别在3组人群的血清和脑脊液中APQ-4Ab检测中差异均有统计学意义(P＜0.05).但是在NMO组的脑脊液和血清中,CBA法对于APQ-4Ab检测的阳性率均高于PETIA和ELISA(P＜0.05),而在MS组,3者差异不大.CBA法的敏感性为83.1％,高于PETIA的62.4％和ELISA的57.6％(P＜ 0.05),3种检测方法的特异性都可达到90％以上,但差异无统计学意义(P＞0.05).结论 细胞免疫荧光法在视神经脊髓炎患者血清及脑脊液中APQ-4Ab检测中具有较高的准确性,且敏感性和特异性俱佳.
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通过hiPS细胞诱导生成类肝细胞建立肝毒性检测模型及其初步评价
目的探讨通过人诱导多能干细胞(human induced pluripotent stem cells,hiPS cells)诱导生成类肝细胞,建立肝毒性检测模型并用于中药毒性体外评价的可行性.方法采用细胞因子4步诱导分化方法,通过加入激活素A(Activin A)、骨形态发生蛋白-4(BMP-4)、成纤维细胞生长因子-2(FGF-2)、肝细胞生长因子(HGF)、制瘤素M(Oncostatin M)等细胞因子,连续培养23 d,将hiPS细胞诱导分化成类肝细胞.采用细胞免疫荧光法检测hiPS细胞向类肝细胞分化过程不同阶段的特异性标记:叉头框转录因子A2(FOXA2)、 性别决定区Y框蛋白17(SOX17)、 甲胎蛋白(AFP)、 白蛋白(ALB)、 肝细胞色素P4503A4酶(CYP3A4)和α1-抗胰蛋白酶(AAT)等蛋白的表达;采用qPCR法检测类肝细胞特异性基因:甲胎蛋白(AFP)、白蛋白(ALB)、细胞角蛋白8(CK8)、 细胞角蛋白18(CK18)和细胞角蛋白19(CK19)的基因表达;采用吲哚青绿(ICG)摄取实验检测类肝细胞排泌功能.采用雷公藤冻干粉(1,2,4,8 mg·mL-1)对类肝细胞进行肝毒性实验,作用24 h后检测谷草转氨酶(AST)、谷丙转氨酶(ALT)、 丙二醛(MDA)、 谷胱甘肽(GSH)、 超氧化物歧化酶(SOD)的含量或活性.结果检测到FOXA2、SOX17蛋白在内胚层诱导阶段有表达,AFP、ALB在肝细胞分化与扩增阶段有表达,CYP3A4、AAT在肝细胞成熟阶段有表达;肝细胞特异性基因AFP、CK19、ALB、CK8、CK18在类肝细胞中均有表达,诱导前后比较差异有统计学意义(P<0.05);ICG摄取实验显示类肝细胞具有肝细胞的特异性ICG摄取功能.与对照组比较,雷公藤各剂量组的ALT及AST活性显著升高、MDA浓度显著升高、GSH及SOD活性显著降低,差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01).结论通过hiPS细胞诱导生成类肝细胞的方法具有可行性,诱导得到的类肝细胞具有人正常肝细胞的功能,可以作为中药肝毒性筛选的模型细胞.
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万古霉素对人肾小管上皮细胞中肾损伤分子-1表达的影响研究
目的:探讨万古霉素对人肾小管上皮细胞(HK-2细胞)中肾损伤分子-1(KIM-1)表达的影响及其可能机制.方法:体外培养HK-2细胞,按万古霉素作用浓度和时间分为不同浓度(0、10、20、30、40、50、60 μg·mL-1)和不同时间(0、3、6、12、24、48 h)组.显微镜观察HK-2细胞形态学变化,反转录-聚合酶链反应检测KIM-1 mRNA表达,细胞免疫荧光法和免疫印迹法检测K1M-1蛋白表达,硫代巴比妥酸法检测HK-2细胞上清液中丙二醇(MDA)的含量.结果:镜下显示,0 μg·mL-1组贴壁细胞生长良好,20、40μg·mL-1组部分贴壁细胞脱落和坏死,60μg·mL-1组大部分细胞脱落和坏死；与0 μg·mL-1组比较,各浓度组KIM-1 mRNA的表达均明显增强(P＜0.05或P＜0.01),10、20 μg·mL-1组KIM-1蛋白表达明显增强(P＜0.01),30、40、50、60 μg·mL-1组MDA含量明显增强(P＜0.01)；与0h组比较,24、48 h组KIM-1 mRNA和蛋白表达、MDA含量均显著增强(P＜0.05或P＜0.01).结论:万古霉素刺激可促进HK-2细胞KIM-1 mRNA和蛋白的表达,其机制可能与万古霉素致HK-2细胞氧化应激有关.
