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促排卵周期卵泡发育与胰岛素样生长因子Ⅰ及其受体mRNA关系的研究
目的探讨促排卵周期卵泡发育和体内胰岛素样生长因子Ⅰ(IGF-Ⅰ)及IGF-Ⅰ受体(IGF-ⅠR)mRNA的关系.方法用ELISA法检测促排卵周期血清及卵泡液IGF-Ⅰ水平,并分析血清或卵泡液IGF-Ⅰ浓度与卵泡发育数关系.用RT-PCR法检测颗粒细胞IGF-Ⅰ mRNA表达量.结果促排卵前、后血清及卵泡液IGF-Ⅰ浓度差异无显著性;低反应组(卵泡数≤3个)颗粒细胞IGF-Ⅰ mRNA明显低于中、高反应组(卵泡数分别为4～13个和≥14个).结论血清IGF-Ⅰ水平不能反映卵泡发育数,颗粒细胞IGF-Ⅰ mRNA的量可能影响促排卵周期卵巢对促排卵药物的反应.
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体外受精技术在大鼠胚胎冷冻保种中的应用
目的 探讨大鼠体外受精(IVF)技术在大鼠胚胎冷冻应用的可行性.方法 选用IVF-20溶液作为大鼠精子获能和受精培养液,改良大鼠1-细胞胚胎培养液(mR1ECM)作为受精卵培养液,对SD大鼠进行IVF,以输卵管灌流获得的2-细胞胚胎作为对照,并对发育良好的2-细胞胚胎实施胚胎冷冻,1周后复苏并对存活胚胎采用输卵管移植.结果 采用灌流和IVF的方式分别获得胚胎463枚和588枚,2-细胞胚胎301枚(65.01％)和376枚(63.94％),二者受精率相比无显著性差异(P＞0.05);采用两种方式获得的胚胎各冻存150枚,复苏后形态正常胚胎分别为132枚(88.00％)和130枚(86.66％),二者复苏率比较无显著性差异(P＞0.05);对存活的胚胎各移植5只受体,分别产仔45只和22只,二者的产仔率(32.14％ vs 16.92％)有显著性差异(P＜0.05).结论 SD大鼠体外IVF技术在胚胎冷冻保种中应用是可行的,将为以后基因工程SD大鼠的胚胎冷冻保种提供技术支持.
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SD大鼠超排卯及胚胎冷冻方法比较
目的 优化超排卵效果及建立大鼠胚胎冷冻方法.方法 腹腔注射三种不同剂量PMSGHCG(15 IU/只、20 IU/只、25 IU/只)超排5周龄SD大鼠,当日与正常雄鼠1:1合笼交配,比较三种激素剂量的超排卵效果.应用输卵管吹卵法收集2-细胞胚胎,采用小鼠胚胎冷冻方法对大鼠胚胎进行冷冻,通过胚胎复苏率比较不同冷冻时间(方法Ⅰ:5min,方法Ⅱ:1 min)的冷冻效果.结果 采用三种剂量进行超排分别获得13±12.7、31±14.2、41±25.4枚胚胎,其中激素剂量25 IU/只超排效果好;方法Ⅱ在操作简便性上明显优于方法Ⅰ,但冷冻效果无显著性差异(平均复苏率88.3%与85.0%).采用方法Ⅱ冻存大鼠胚胎总计152枚,复苏后形态正常胚胎共计139枚(91.44%),培养20min后,对存活胚胎共计105枚(75.53%)进行胚胎移植,产仔39只(37.14%).结论 成功优化大鼠超排及建立大鼠胚胎冷冻方法.
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辅助生殖技术中超促排卵反应性预测指标的探讨
目的探讨辅助生殖技术中超促排卵周期卵巢反应性的预测指标.方法回顾性分析不同原因不孕行控制性超促排卵的348个周期的临床资料.结果卵巢体积,窦卵泡数随年龄增长逐渐减少(P<0.05),促性腺激素用量随年龄增长而增加,E2峰值和获卵数随年龄增长而降低(P<0.05).随bFSH增长,E2峰值、获卵数均降低(P<0.05).获卵数随E2峰值升高而增加.卵巢体积、窦卵泡数与促性腺激素用量成负相关,与获卵数成正相关.结论年龄与卵巢储备、卵巢反应性的关系更为紧密; bFSH只是反映卵巢储备功能的指标之一,其预测卵巢反应性的能力有限;总窦卵泡数与卵巢体积是反映卵巢反应性直接的指标.
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香烟烟雾及其水溶物对小鼠生殖功能的影响
目的探索香烟烟雾对小鼠生殖功能的影响.方法采用小鼠体内生殖实验和超数排卵的方法,研究被动吸烟和主动吸烟对小鼠生殖功能的影响.结果被动吸烟和主动吸烟均可以显著降低小鼠的妊娠率和胚胎成活率,降低小鼠的超排卵数,影响卵巢的脏器系数;停止被动吸烟和主动吸烟后,小鼠的生殖能力又能基本恢复.结论无论是被动吸烟还是主动吸烟,都可以降低小鼠的生殖能力,但这种毒性作用可能是短暂的、可逆的.
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多囊卵巢综合征患者血清中脑源性神经营养因子水平与体外受精-胚胎移植结局相关性研究
目的 探讨多囊卵巢综合征(PCOS)患者脑源性神经营养因子(BDNF)与卵母细胞成熟之间的相关性.方法 采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测60例PCOS患者和45例排卵正常不孕患者中的血清BDNF水平,分析血清BDNF水平与获卵数、成熟卵数、卵母细胞成熟率、卵裂率和优质胚胎率之间的相关性.结果 ①PCOS组血清BDNF水平高于对照组(P＜0.01)；②PCOS组在获卵数和成熟卵数方面显著高于对照组(P＜0.01),而受精率、优质胚胎率和卵母细胞成熟率显著低于对照组(P＜0.01)；③BDNF水平与获卵数、成熟卵数和卵母细胞成熟率成呈正相关(P＜0.05).结论 PCOS患者血清中BDNF水平升高,高水平BDNF能促进卵母细胞成熟和早期胚胎的发育.
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超排卵后黄体期血雌孕激素水平对胚胎着床的影响
目的测定控制下超排卵周期黄体期血雌二醇(E2)和孕酮(P)水平,探讨黄体期甾体激素对体外受精-胚胎移植(IVF-ET)结局的影响.方法选择在本院辅助生育技术病房进行IVF-ET助孕治疗的因输卵管因素不孕的64例患者,用GnRHa(达必佳)/FSH/hMG/hCG超排卵治疗,在注hCG日及取卵后7天采集静脉血5ml,用双抗放射免疫法(RIA)测定血清雌二醇(E2)和孕酮(P).结果未妊娠组高反应组与正常反应组获卵数存在显著差异(P＜0.05),年龄、获卵数、移植胚胎数两组无显著差异(P＞0.05).继续妊娠组与流产组E2峰、黄体中期E2、P水平及P/E2比均无显著差异(P＞0.05),继续妊娠组E2从峰值下降至黄体中期水平与流产组相比,存在显著差异(P＜0.05),继续妊娠组E2下降幅度大;未孕高反应组E2峰、黄体中期E2、P水平与继续妊娠组相比均显著增高(P＜0.05),但P/E2比无显著差异,未孕正常反应组各激素水平及比与继续妊娠组相比无显著差异(P＞0.05).结论超排卵治疗后黄体期雌孕激素对妊娠的影响与卵巢反应有关,高反应组黄体中期过高的雌孕激素不利于妊娠,正常反应组黄体中期雌孕激素水平与妊娠无关.E2从峰值至黄体中期水平下降幅度与妊娠有关,E2缺乏下降也许对妊娠不利.
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输卵管切除术对体外受精-胚胎移植中卵巢超排卵的影响
目的:探讨输卵管切除术对体外受精-胚胎移植(IVF-ET)超促排卵中卵巢反应性及结局的影响.方法:选择2006年2月至2007年6月在本中心行常规IVF-ET治疗的179例不孕患者为研究对象,共分为A、B、C、D四组,A组为48例单侧输卵管切除患者,B组为41例双侧输卵管切除患者,对照C组为50例双侧输卵管阻塞(不伴积水)患者,对照D组为40例单侧或双侧输卵管积水患者,比较4组患者在IVF-ET周期中卵巢对控制性超排卵的反应及其结局的差异.结果:4组患者的基础FSH水平、窦卵泡数、使用促性腺激素(Gn)的时间、注射hCG日的E2水平、冷冻胚胎数及受精率等指标均无明显差异(P＞0.05);B组Gn的用量高于其他三组,其中与C组间的差异有显著性(P＜0.05);A、B两组注射hCG日的卵泡数及获卵数少于C、D两组,差异均有显著性(P＜0.05);D组临床妊娠率为28.2%,低于B、C组,差异有显著性(P＜0.05).输卵管切除侧卵巢与对侧卵巢相比,窦卵泡数、注射hCG日卵泡数及终获卵数要明显少于对侧(P＜0.05).输卵管双侧切除患者中输卵管切除时间≥2.5年侧的注射hCG日卵泡数及终获卵数要明显少于切除时间≤1年侧(P＜0.05).结论:输卵管切除术可改善输卵管积水患者的临床妊娠率,但增加IVF-ET周期中的Gn用量,减少获卵数,降低了超促排卵中卵巢的反应性,并且将随着术后时间的延长进一步降低.
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不同超促排卵方案对子宫内膜性激素受体和白血病抑制因子表达的影响
目的:探讨促性腺激素释放激素激动剂(GnRHa) 长方案和单纯促性腺激素(PMSG) 超促排卵对分泌期子宫内膜雌、孕激素受体和白血病抑制因子(LIF)表达的影响.方法:以小鼠为超促排卵动物模型,采用GnRHa+PMSG长方案促排卵,以单用PMSG促排卵和自然周期为对照,在排卵后取子宫内膜,免疫组化定量测定腺上皮细胞雌、孕激素受体表达水平;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)半定量检测内膜LIF mRNA表达.结果:免疫组化显示:GnRHa+PMSG组在注hCG后内膜腺上皮细胞ER、PR免疫组化阳性细胞百分率为(88.46±2.51)%、(84.71±2.21)%,染色强度为(0.415±0.048)AU、( 0.454±0.046)AU,均低于自然周期组同期值,分别为(92.36±2.33)%、(87.82±1.22)%和(0.602±0.051)AU、(0.542±0.055)AU(P<0.01),但两者均低于自然周期组(1.959±0.778,P<0.01).结论:GnRHa长方案辅助超促排卵可影响子宫内膜性激素受体和LIF的表达水平,可能对内膜容受性有一定影响,但优于单纯促性腺激素方案.
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超排卵周期卵巢低反应患者卵泡液骨形成蛋白-15水平升高
目的:研究卵泡液中骨形成蛋白-15(BMP-15)的水平及其与超排卵周期卵巢低反应之间的关系.方法:对70例因输卵管性或男性因素不孕而行体外受精-胚胎移植(IVF-ET)的患者,采用本中心常规促超排卵方案,用Western印迹方法测定取卵时各组卵泡液中BMP-15的水平.按取卵时卵泡发育数目不同,将卵巢对超排卵药物的反应分为低反应型(卵泡数≤3)和正常反应型(卵泡数4～13个).结果:卵泡液中BMP-15的相对光密度(ROD),低反应组高于正常反应组(1.01±0.34 vs 0.77±0.24,P＜0.01),差异有显著性.结论:卵泡液中高BMP-15水平与促排卵周期卵巢低反应的发生有关.
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超排卵时卵巢对促性腺激素的反应与颗粒细胞促卵泡激素受体的表达
目的:探讨促排卵周期卵巢对促性腺激素反应性与颗粒细胞促卵泡激素受体(FSHR)表达的关系.方法:根据取卵时卵泡发育数不同,将卵巢对促排卵药物的反应分为低反应型(卵泡数≤3个)、中反应型(卵泡数4～13个)和高反应型(卵泡数≥14个),分别为11例、15例和13例.采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)测定3种反应类型的卵泡颗粒细胞FSHR mRNA的表达量.结果:低反应型FSHR mRNA表达量显著低于中、高反应型(相对积分值分别为0.54±0.07、0.90±0.17和1.20±0.45,P<0.05).结论:卵巢对促性腺激素的反应与颗粒细胞FSHR mRNA的表达量高低有关.
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瘦素在超排卵周期的变化及对体外受精-胚胎移植结局的影响
目的:探讨超排卵对瘦素水平的影响以及瘦素水平对体外受精-胚胎移植(IVF-ET)结局的影响.方法:应用酶联免疫吸附法和放射免疫法分别测定39例IVF-ET患者在注FSH、HCG前和取卵前的血清瘦素及排卵前卵泡的卵泡液瘦素、E2水平.结果:血清瘦素水平在注HCG前(26.1±2.3)μg/L明显高于注FSH前(9.3±1.0)μg/L和取卵前(15.8±2.3)μg/L,P均<0.001;卵泡液(18.5±2.2)μg/L和同期血清(15.8±2.3)μg/L的瘦素水平比较,经t检验无显著性差异;妊娠组的卵泡液和同期血清瘦素水平(11.7±1.8)μg/L和(8.7±1.5)μg/L明显低于非妊娠组的卵泡液和同期血清瘦素水平(20.8±2.7)μg/L和(18.3±2.9)μg/L,P<0.05.结论:超排卵后瘦素浓度过高可能不利于卵泡的生长和发育.
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促性腺激素释放激素拮抗剂方案在有卵巢低反应风险患者中的应用价值
目的:评估促性腺激素释放激素拮抗剂(GnRH-ant)方案在体外受精-胚胎移植(IVF-ET)的超促排卵过程中存在卵巢低反应风险患者中的应用价值.方法:回顾性分析48例存在卵巢低反应风险的IVF-ET周期,其中24例周期使用GnRH-ant方案,24例周期使用促性腺激素释放激素激动剂(GnRH-a)长方案.比较两组的降调节天数、促排卵的时间和剂量,分析两组hCG日E2峰值、获卵数、受精率、获得胚胎数、优质胚胎数、移植新鲜胚胎数、冷冻胚胎数、新鲜胚胎移植周期胚胎着床率、新鲜胚胎移植周期临床妊娠率、胚胎复苏率、冷冻胚胎移植周期临床妊娠率、累计临床妊娠率.结果:GnRH-ant方案组所需降调节天数、促排卵天数、Gn用量均少于GnRH-a长方案组(P<0.001、<0.05、<0.05),hCG日E2峰值、获卵数低于GnRH-a长方案组(均P<0.05),但获得的胚胎数、优质胚胎数、移植新鲜胚胎数、冷冻胚胎数、新鲜胚胎移植周期胚胎着床率、新鲜胚胎移植周期临床妊娠率、胚胎复苏率、冷冻胚胎移植周期临床妊娠率、累计临床妊娠率两组无统计学差异.结论:与GnRH-a长方案相比,GnRH-ant方案用于存在卵巢低反应风险的患者可减少促排卵天数及Gn用量,虽然hCG日E2峰值及获卵数降低,但并不影响胚胎着床率和临床妊娠率.
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体外受精-胚胎移植后输卵管残端妊娠一例
患者,28岁,G3P0.6年前曾两次人工流产、一次左侧输卵管妊娠行左侧输卵管切除术,至今未孕.本次因右侧输卵管积水、左侧输卵管已切除而行体外受精-胚胎移植助孕.采用GnRHa-FSH-HCG长方案超排卵,共获卵7只,均受精,经体外培养3天,选择4个胚胎(其中4细胞期1个,6细胞期2个,8细胞期1个),在B超引导下移入宫腔内,术后平卧2小时.
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小剂量长效、短效促性腺素释放激素激动剂在超排卵中的应用分析
目的 比较小剂量长效、短效两种曲普瑞林长方案在体外受精-胚胎移植(IVF-ET)中的应用效果.方法 回顾性分析接受体外受精-胚胎移植治疗的长方案306例患者的306个周期资料,根据降调用药分为两组.短效组每天皮下注射0.05 mg短效曲普瑞林136个周期,长效组1次性肌内注射0.8 mg长效曲普瑞林170个周期,比较两组患者的治疗效果.结果 两组促性腺激素(Gn)用量[(23.1±5.3)支与(23.4±5.4)支],获卵数[(10.2±5.3)与(9.8±4.9)]、优质胚胎率(58.7％与57.9％)]、临床妊娠率(46.3％与45.9％)、种植率(29.8％与30.1％)、流产率(9.5％与10.2％)均差异无统计学意义(P＞0.05),两组均无内源性促黄体生成素(LH)峰出现.结论 0.05 mg短效曲普瑞林长方案和0.8 mg长效曲普瑞林长方案均可应用于超排卵中的降调节,并可获得满意的妊娠结局.短效制剂体内血药浓度稳定,可灵活调整剂量,而长效制剂方法简单,减少了患者的痛苦.
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试管婴儿技术
试管婴儿技术(IVF-ET)是指不能自然受孕妊娠的妇女通过体外受精,再移植胚胎至宫内妊娠的方法喜得后代的技术."试管婴儿"的"更新换代"速度非常之快,在生殖医学领域有了很多突破,到目前为止,出现了三代"试管婴儿."
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超排卵对围着床期小鼠子宫内膜白血病抑制因子LIF表达的影响
目的 通过研究比较超排卵和生理水平时围着床期小鼠子宫内膜白血病抑制因子(leukemia inhibitory fac-tor,LIF)表达的情况,探讨超排卵是否影响子宫内膜容受性.方法 将实验动物随机分为超排卵妊娠组(超排卵组)和自然妊娠组(对照组)2组,每组30只,分别选取动情周期当天、合笼后发现阴道栓第2、4、6、8天共5个时间点取小鼠子宫内膜,用免疫组化和原位杂交法测定小鼠子宫内膜LIF的蛋白表达和LIF mRNA的表达.结果 超排卵组和对照组LIF在围着床期子宫内膜上的表达上有相似的规律:即随着妊娠天数的增加,LIF蛋白和LIFmRNA在小鼠围着床期子宫内膜的表达增加,继之呈下降趋势,但其峰值在时间上有所不同,超排卵使LIF在围着床期子宫内膜上表达峰值提前.结论 超排卵对围着床期子宫内膜LIF表达有影响,使其表达峰值提前,而白血病抑制因子是参与子宫内膜容受性形成的一个重要的细胞因子,从而可以推测超排卵对子宫内膜容受性有负面影响,导致种植后妊娠率的下降.
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补佳乐补充治疗在IVF-ET中的临床研究
目的 探讨补佳乐补充治疗对IVF-ET结局的影响.方法 选择2003年2月～2006年12月在我中心接受IVF-ET或ICSI治疗,在COH中大卵泡直径为1.5cm时、子宫内膜≤7mm的患者共141个周期,141个周期患者中接受补佳乐补充治疗的为75周期,设为研究组;未口服补佳乐的66个周期设为对照组.结果 两组在不孕原因、不孕时间等无统计学差异性(P＞0.05);两组在补充补佳乐前子宫内膜厚度、平均获卵数、平均受精数亦无统计学差异性(P＞.0.05),补佳乐治疗后研究组在停Gn日和移植日EM均高于对照组,研究组妊娠率和种植率高于对照组(P＜0.05).结论 补佳乐补充治疗后可以改善子宫内膜的容受性,提高IVF-ET患者的妊娠率和种植率.
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卵巢低反应预处理后对IVF-ET结局的影响
目的 探讨在超排卵前补佳乐人工周期处理3个周期后对卵巢反应不良患者IVF-ET结局的影响.方法 选择2005年1月～2006年12月在我中心接受IVF-ET或ICSI治疗中预测将出现卵巢低反应的患者,21例设为研究组,在超排卵前给予补佳乐行人工周期3个周期;22例作为对照组,分析两组超排卵前不孕原因、不孕时间、基础内分泌以及超排卵时所用Gn天数、Gn支数、获卵数、受精数、优质胚胎数、妊娠率、早期流产率.结果 两组在不孕原因、不孕时间、基础内分泌无统计学差异性(P＞0.05);两组Gn天数、Gn支数、获卵数、受精数和优胚数亦无统计学差异性(P＞0.05),研究组妊娠率高于对照组,早期流产率低于对照组(P＜0.05).结论 补佳乐预处理后,可以提高卵巢反应不良患者的妊娠率,降低流产率.
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卵母细胞体外成熟预防卵巢过度刺激综合征的应用
目的:探讨卵母细胞体外成熟预防卵巢过度刺激综合征(ovarian hyperstimulation syndrome,OHSS)的效果.方法:51例IVF长方案超排卵过程中出现OHSS早期征象时,按患者意愿分成两组,实验组于当天注射人绒毛膜促性腺激素(hCG)36 h后取卵,经体外培养成熟行体外受精、胚胎移植;对照组则继续按常规用药方案及受精方案行胚胎移植.测定两组出现OHSS早期征象当日的E2、统计FSH用药天数、用药量、受精率及临床妊娠率.结果:实验组与对照组在出现OHSS早期征象当日的血E2水平、受精率、优质胚胎率、临床妊娠率无统计学差异;但实验组的FSH总用量、FSH用药天数、获卵数方面显著低于对照组(P＜0.05).实验组1例发生中度OHSS,对照组则发生3例重度OHSS和2例中度OHSS,重度OHSS发生率差异极显著(P＜0.01).结论:超排卵过程中,出现OHSS早期征象时改行卵母细胞体外成熟培养技术可有效地降低OHSS的发生率.
