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胚胎植入前遗传学诊断与临床取材
胚胎植入前遗传学诊断(PGD)是随着辅助生殖技术及分子生物学迅速发展而产生的一项新技术.PGD作为一种可行的产前诊断,是提高人口素质和优生优育的根本措施之一.临床取材与PGD诊断准确性及胚胎远期发育密切相关.目前, 极体及胚胎组织分析是PGD临床取材主要方式.
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荧光定量聚合酶链式反应种植前胚胎β-地中海贫血基因诊断
目的用荧光定量聚合酶链式反应(PCR)方法进行种植前β-地中海贫血一种中国人常见突变类型CD41/42(-TCTT)的基因诊断. 方法来源于β-地中海贫血病人或携带者的289个淋巴细胞和人体外受精-胚胎移植志愿者剩余的胚胎分离137个单细胞用荧光定量PCR方法进行分析. 结果用单个淋巴细胞诊断β-地中海贫血扩增效率达96 %,准确率达99 %~100 %,等位基因丢失(ADO)率仅0~5 %.单个胚胎细胞扩增效率86 %. 结论荧光定量PCR技术是一种敏感、快速、可靠和准确的技术,适合包括β-地中海贫血在内的单基因疾病的种植前诊断.
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特发性男性不育的分子遗传学诊断与生育指导
特发性男性不育是指男性不育症患者除有精子异常外,其余情况均正常,而患者出现精子异常的原因不明.研究证明,Yq11中无精子因子(azoospermia factor,AZF)的缺失,可引起不同程度的生精障碍[1],但随着辅助生殖技术的发展,AZF缺失患者依然可以生育后代,并且不同缺失类型辅助治疗对策各异.因此,有必要对特发性男性不育患者进行Y染色体AZF区域微缺失研究,从而对该类患者的诊断和生育指导提供依据.
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植入前遗传学诊断的方法及应用
植入前遗传学诊断(preimplantation genetic diagnosis,PGD)是指对体外受精胚胎的遗传物质进行分析,诊断胚胎是否有某些遗传异常,确定该胚胎是否适合移植,选择不致造成遗传学疾患的胚胎植入宫腔,从而获得正常胎儿的诊断方法.PGD的步骤包括激素诱导超促排卵,获得卵母细胞,用常规体外受精(in vitro fertilization,IVF)或卵母细胞单精子显微注射(intracytoplasmic sperm injection,ICSI)受精,体外培养至6~8个细胞期或囊胚期,在此期间通过显微操作对胚胎或卵母细胞进行活检,取得单个或多个细胞进行遗传学检测,再将2~3个经分析正常的胚胎移植入子宫腔内.PGD是一种更早期的产前诊断方法,避免了选择性流产和多次流产可能造成的危害以及伦理道德观念的冲突.
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我国先天性心脏病筛查和干预战线前移
进入21世纪以后,我国先天性心脏病(先心病)防治工作进入快速发展期,发展的重点先从临床开始,然后逐步发展到先心病早期筛查诊断和干预,先心痛防治战线正在前移.首先发展起来的是先心病临床诊疗技术,包括术前影像学、分子遗传学诊断;复杂先心病外科技术及相关的麻醉、体外循环技术;简单先心痛介入治疗技术和内外科结合的镶嵌治疗技术.由于这些技术的普及和提高,使我国先心痛临床水平与西方先进国家的差距明显缩小.在我国一些大的医学中心,复杂的大动脉调转术、房室双调转术、Fontan手术已成为常规[1],手术死亡率已从过去的20%~30%下降到目前的5%左右,接近国际先进水平.复杂先心病手术趋向低龄化低体重化[2],有些单位新生儿手术比例从1%提高到6%.在手术的总量上也有了大幅提高.《中国心血管病报告2011》数据显示[3]:2010年我国心脏手术总数已达170 491例,比2003年的76 319例增长了223.2%,平均每年增长15.42%,其中先心病手术约占55%~60%,每年完成已超10万例,居心脏手术首位.
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单基因疾病的植入前遗传学诊断研究进展
植入前遗传学诊断(preimplantation genetic diagnosis,PGD),作为一种比普通产前诊断更早的方式,在胚胎着床之前即对配子或胚胎进行遗传物质分析,选择没有遗传物质异常的胚胎移植.自1990年诞生了世界第1例经植入前遗传学诊断的健康女婴以来[1],全世界进行了7 000多个PGD周期,已经有超过1000个经PGD诊断的正常孩子出生[2].
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专家点评
经查阅相关文献和指南,这篇文章介绍的临床途径是正确的!
本文总结了54例产前超声检查提示为马蹄内翻足(TE)胎儿的产前遗传学诊断的结果,并对其意义进行了讨论,对临床有一定的指导意义。约3%的妊娠存在产前超声发现的胎儿结构异常,这是由于染色体异常或单个基因突变所致,因此,产前发现胎儿结构异常是明确的产前遗传学诊断的指征。产前染色体核型分析和染色体微阵列分析(CMA)是对其进行遗传学诊断的主要手段。 -
应用多重巢式及荧光聚合酶链反应技术对β地中海贫血进行植入前遗传学诊断
目前,国外对β地中海贫血的植入前遗传学诊断,主要应用巢式PCR结合突变检测技术[1,2].但由于β地中海贫血基因的高度异质性,我国β地中海贫血突变基因类型与国外报道的不同.本研究根据我国常见的β地中海贫血突变基因类型,应用多重巢式PCR及荧光PCR技术,于2003年对4例β地中海贫血患者进行了临床植入前遗传学诊断,获得1例临床妊娠.现将结果报道如下.
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应用Karyomap基因芯片进行单基因疾病的植入前遗传学诊断及筛查二例分析
目前,单基因疾病的植入前遗传学诊断(preimplantation genetic diagnosis, PGD)有多种方式,较多采用植入前单体型分析(preimplantation genetic haplotyping, PGH),即对致病基因位点上下游的遗传学标记进行连锁分析,例如致病位点相关的短串联重复序列(short tandem repeats,STR)或单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism,SNP)位点。如果应用STR关联分析,针对每一种单基因疾病必须进行个体化的STR设计,并通过家系验证后才可用于PGD,该过程需要3~4个月并且费用高,而且局限于特定的实验室才能完成。Karyomap基因芯片是针对全基因组的SNP位点设计的芯片,可同时分析近30万个SNP位点,可针对某致病位点进行基因内部或相邻位点的SNP关联分析,不需要个体化STR位点的设计,从而能减少等待时间,加速了实验进程。而且,全基因组SNP分析可进行基因分型,能满足非整倍体筛查的需要。这使得Karyomap基因芯片在PGD方面具有明显优势。如果1对夫妻有遗传性疾病家族史,例如先天性肾上腺皮质增生症(congenital adrenal hyperplasia, CAH)或常染色体显性遗传性多囊肾(autosomal dominant adult polycystic kidney disease,ADPKD),或者其他的可造成严重出生缺陷的单基因遗传病,都可以考虑应用Karyomap基因芯片进行PGD,并且同时进行非整倍体的植入前遗传学筛查(preimplantation genetic screening,PGS)。本研究的目的是探讨应用Karyomap基因芯片进行PGD及PGS的有效性。
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人植入前胚胎基因表达的调控
以往对人植入前胚胎的筛选主要基于形态学指标,随着分子生物学技术在植入前遗传学诊断(PGD)中的应用,可以在染色体水平、基因水平上对某些遗传病进行胚胎植入前筛查,但应用仅限于遗传病高危人群,而体外受精-胚胎移植(IVF-ET)中的绝大部分胚胎未得到发育潜能的评估.具有发育潜能的胚胎,首先应该是基因表达调控正常的胚胎.研究人植入前胚胎基因表达的调控,不仅对于筛选表达活性正常的胚胎,进一步提高IVF-ET妊娠率具有重要意义,同时有助于揭示不孕与不育、早期流产、出生缺陷以及某些疾病早期变化的机理,探讨胚胎期遗传病的基因治疗方法.据分析,要维持植入前和早期胚胎正常发育,大约需要1万个基因表达.目前,在人植入前胚胎中仅50余种基因表达被检测出来(表1),现综述如下.
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孕妇血浆中游离胎儿DNA测定在产前诊断中的应用
传统的羊膜腔穿刺和绒毛吸取是目前许多医院较为常用的产前诊断技术,因其操作易导致流产、胎儿损伤或死亡、宫内感染、羊膜破裂等,使其在临床上的推广和应用受到了限制.利用孕妇外周血中的胎儿细胞进行遗传学诊断一直是无创性产前诊断的重要探索途径[1].但由于孕妇外周血中的胎儿细胞数量少,而且存在个体差异,目前很难从外周血中分离出完整的胎儿细胞,这无疑限制了这种方法在临床上的应用[2].1997年,有学者研究发现,孕妇血液循环中存在较丰富的游离胎儿DNA,这一发现为无创性产前诊断和筛查开辟了新领域[2,3].
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分子核型分析与产前诊断
产前遗传学诊断无论从技术还是认识方面,近年都得到了快速发展:从细胞遗传学的染色体水平到分子遗传的单碱基位点,不同分辨率的遗传结构变异检查方法的进步;对出生缺陷复杂性认识的提升,使人们更清楚地认识到,由于个体遗传背景和环境因素的影响,目标基因的相似改变可能引起个体表型的较大差异.
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未足月胎膜早破的羊膜腔封闭疗法
未足月胎膜早破(preterm premature rupture of the membranes,PPROM)是指胎膜于妊娠20~37周间发生破裂,约占妊娠总数的2%~3%,在早产的原因中,30%~40%是由PPROM发展而来.由于PPROM的围产儿死亡率、新生儿发病率及孕妇感染率较高,目前无有效的治疗方法,故PPROM是产科的棘手问题之一.按照有无羊膜腔手术史将PPROM分为自发性和医源性胎膜早破(继发于各种羊膜腔手术、操作后).由于我国目前产前遗传学诊断和胎儿外科技术尚未广泛开展,PPROM多为自发性.PPROM造成的羊膜腔开放状态和持续羊水渗漏以及早产是导致孕妇绒毛膜羊膜炎和围产儿死亡率增加的直接原因.少数自发性PPROM患者胎膜破损处可自然闭合,有人认为可达11%~13%[1,2],由于病例数较少,尚需大样本研究.
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Xp21邻近基因缺失综合征一例及其分子遗传学诊断
患儿男,68 d.因反复气促、喉鸣、喂养困难、反应低下50 d入院.患儿在当地医院诊断为"支气管肺炎",曾予"氯化钠、抗生素静脉滴注"治疗后有好转.回家停止输液即出现精神反应差,30 d前患儿出现纳奶减少、前囟饱满、哭闹,在外院诊断为"颅内感染?",予抗感染、输液治疗后病情改善.出院后间断在诊所输注"氯化钠、抗生素"治疗,病情反复,为求进一步诊治入我院.出生史、家族史正常.
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B超引导下经腹壁羊膜腔穿刺术的护理
目的 探讨B超引导下经腹壁羊膜腔穿刺术的护理方法.方法对本院符合羊膜腔穿刺术指征的328例孕妇行羊膜腔穿刺术,并进行有效的护理,总结护理体会.结果 328例孕妇均穿刺成功,无一例发生流产、宫内感染等并发症,7例确诊胎儿染色体核型异常孕妇均平静接受引产术.结论对羊膜腔穿刺术患者实施积极有效的术前、术中、术后护理,是羊膜腔穿刺术顺利进行的重要保证.
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拉布拉多犬髋关节发育不良相关基因的SNP位点的检测
目的 检测拉布拉多犬基因组DNA中与髋关节发育不良密切相关的5个基因中的6个SNP位点,以期为拉布拉多犬的选育提供有效的遗传学诊断方法.方法 经影像学诊断,筛选出典型的6只髋关节发育不良和11只正常拉布拉多犬作为实验对象,采取静脉血,提取血细胞的基因组DNA样本,采用PCR/测序方法对17个样本的5个基因中的6个SNP位点:LAMA2(CFA1:70997779),LRR1(CFA8:29247021),SCR(CFA24:28944481),COL6A3(CFA25:51031100,51040259)和FN1(CFA37:25095511)进行变异型检测,并统计分析SNP位点的变异型与髋关节发育不良犬关联度.结果 LAMA2(CFA1:70997779),LRR1(CFA8:29247021),SCR(CFA24:28944481),COL6A3(CFA25:51031100)和FN1(CFA37:25095511)SNP位点的变异型与拉布拉多犬的髋关节发育不良没有显著相关性(P>0.05).COL6A3(CFA25:51040259) SNP位点的A/A型与拉布拉多犬的髋关节发育不良存在极显著相关性(P=0.007).结论 COL6A3(CFA25:51040259) SNP位点的A/A型可能成为拉布拉多犬髋关节发育不良的实用性遗传学诊断指标,但尚需大样本确认.
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植入前遗传病的诊断
植入前遗传学诊断(preimplantation genentic diagnosis,PGD)又称着床前产前诊断.从狭义上讲是指对体外受精(in vitro fertilization)的胚胎在其被移植入子宫之前,利用一些先进的技术对带有的已知致病因素进行筛查,从而将正常胚胎移植入子宫内的一种方法.从广义上讲,还应包括对精子和卵子的选择,将形态和功能正常的配子受精,以利优生优育.近10年来,随着诊断技术的发展和辅助生育技术的进步,PGD不但成为一种可能,而且成为一种必要的检测手段,现将此方面的一些进展,综述如下.
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早期产前筛查和诊断的现状及进展
分子生物学技术的快速发展使得对大量的遗传病、基因突变进行产前筛查和产前诊断成为可能,早期行产前遗传学诊断是当今国内外产科领域的一个热点课题,分子遗传时代的到来产生了许多新的伦理社会问题,现在急需发展一种新的遗传病筛查及诊断模式.
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应用引物延伸预扩增方法对地中海贫血进行植入前遗传学诊断的初步研究
植入前遗传学诊断(PGD)由于可检测的材料仅1~2个卵裂球细胞,很难进行一个基因的多种突变或多位点基因改变的基因分析.引物延伸预扩增(PEP)是随机扩增单细胞全基因组的有效方法,有望解决这个问题.我们在本研究中探讨PEP在地中海贫血(珠蛋白生成障碍性贫血,地贫)PGD中的应用.
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显微操作分离ε-血红蛋白阳性的胎儿细胞用于产前诊断
近年来高龄妊娠妇女呈增长趋势.高龄妊娠妇女胎儿染色体畸变的可能性较大,需要做产前遗传学诊断.羊膜腔穿刺、绒毛活检和脐静脉穿刺是传统的创伤性产前诊断方法,许多妇女不愿意接受.现在的非创伤性检查方法包括超声检查和血清学筛查,对发现胎儿非整倍体特异性低,因此从母体外周血中分离胎儿细胞作为非创伤性产前诊断方法就引起了关注.母体外周血中存在各种胎儿细胞,包括胎儿有核红细胞(NRBC)、胎儿滋养细胞和胎儿白细胞等,NRBC被认为是用于研究的佳靶细胞.