顺式高尔基体蛋白GM130影响小鼠卵母细胞纺锤体组装

目的 确定顺式高尔基体蛋白GM130对小鼠卵母细胞纺锤体组装的影响. 方法 免疫荧光法检测GM130在小鼠卵母细胞发育不同时期的亚细胞定位,并用免疫印迹法半定量检测其表达水乎;接着用微管解聚药物诺考达唑处理小鼠MⅠ卵母细胞,明确GM130与微管动力的关系.免疫印迹检测注射GM130特定的寡聚核苷酸(morpholino,MO)后卵母细胞中GM130的表达水平,免疫荧光法检测纺锤体的形态变化及中心体相关蛋白γ-tubulin和Plk1的定位. 结果 M130在卵母细胞减数分裂成熟的不同阶段有不同的特异性定位,主要集中分布在生发泡周围、纺锤体的两极和中体及分散于胞浆.GM130在MⅠ和MⅡ期与中心体相关蛋白p-MEK1/2共定位并与纺锤体的组装密切相关.免疫印迹试验表明GM130在卵母细胞发育的各个时期均有表达.降调GM130的表达后,纺锤体组装异常比例升高,且大多数为拉长的纺锤体;第一极体排出率下降,在排出的极体中,大极体的比率升高,并影响γ-tubulin和Plk1的正确定位. 结论 GM130可能作为一种微管组织中心相关蛋白调节纺锤体的组装.

高尔基体基质蛋白GM130的研究现状与分析

GM130蛋白参与高尔基体结构的维持,并在有丝分裂过程中主导高尔基体装置的拆卸和组装.当GM130减少的细胞进入有丝分裂后,形成多极纺锤体,在中期停止并死亡.GM130还参与糖基化的控制,细胞周期变化,细胞极化和细胞定向迁移.它还参与细胞自噬与凋亡.GM130与肿瘤的发生有关.它的减少显著降低CVB3病毒的复制.GM130失活可以引起雄性模型小鼠的不育.可见,它是一种显著影响动物多种生命活动的重要蛋白.

The cerebral ischemia-reperfusion model was established using the suture occlusion method, and rats were intraperitoneal y given 8 mL/kg Danhong injection once a day prior to model establishment. Rat brain tissues were harvested at 6, 24, 48, 72 hours after reperfusion. Immunohistochemical staining showed that transforming growth factor-β1 expression increased, while Golgi matrix protein GM130 expression decreased after cerebral ischemia-reperfusion. Danhong injection was shown to significantly up-regulate the expression of transforming growth factor-β1 and GM130, and expres-sion levels peaked at 7 days after reperfusion. At 7 days after cerebral ischemia-reperfusion, Golgi morphology was damaged in untreated rats, while Golgi morphology breakage was not observed after intervention with Danhong injection. These experimental findings indicate that Danhong injec-tion can up-regulate the expression of transforming growth factor-β1 and GM130, and maintain Golgi stability, thus playing a neuroprotective role in rats after cerebral ischemia-reperfusion.

GM130通过调控snail表达调节胃癌上皮间质化过程

目的 胃癌是常见的消化道肿瘤之一.尽管手术和放化疗发展迅速,但胃癌的潜在作用机制仍知之甚少,相关的基因及分子治疗值得继续探索.近些年,越来越多的研究显示上皮细胞间质化(EMT)是胃癌侵袭转移的一个重要环节,其作用机制尚不清楚.GM130是顺式高尔基体的基质蛋白,在细胞周期和蛋白质的运输、分泌过程中扮演着重要的角色.方法 免疫组化检测GM130在胃癌组织中的表达情况,在胃癌细胞中采用siRNA技术沉默其表达,观察生物学功能的变化.结果 在本研究中,我们发现GM130的表达与胃癌的肿瘤分化和TNM分期有关.GM130的高表达预示着较差的预后.运用RNA干扰技术敲低GM130表达后,我们发现上皮标志物E-cadherin表达增加,间质标记物N-cadherin和vimentin表达减少,肿瘤的发生发展被抑制.减少(N-cadherin和波形蛋白)表达锡安在胃癌细胞,抑制细胞入侵和肿瘤的形成.此外,我们还发现GM130通过上调EMT的关键分子Snail (SNAI1)参与胃癌EMT及侵袭转移的过程.结论 本研究显示GM130可能是胃癌治疗中的一个新的靶点.

HT22细胞氧糖剥夺再灌注及 Grasp65过表达干预后高尔基体的形态变化及其可能机制研究

目的：探讨HT22细胞氧糖剥夺再灌注及Grasp65过表达干预后高尔基体的形态变化及其可能机制。方法利用小鼠海马神经元细胞系HT22为研究对象，HT22细胞经氧糖剥夺再灌注损伤及Grasp65过表达干预后，采用MTT法检测细胞存活率；Hoechest33258荧光染色法评估细胞凋亡；并应用细胞免疫荧光技术观察高尔基体的形态；应用Western blot技术检测GM130和GAAP蛋白的表达。结果氧糖剥夺再灌注可导致HT22细胞的活性显著降低（P＜0．05），凋亡率显著增高（P＜0．05）；并可导致高尔基体形态的异常，随着再灌注时间的延长，高尔基体逐渐发生碎裂，尤其以再灌注12 h和24 h为明显；GM130、GAAP的表达水平在氧糖剥夺再灌注后出现下降，特别是在再灌注12 h、24 h后出现了显著下降（P＜0．05）。过表达Grasp65后，HT22细胞在氧糖剥夺再灌注所致高尔基体碎裂出现减少（P＜0．05），碎裂程度减轻，同时GM130和GAAP的表达均显著增加（P＜0．05），HT22细胞的存活率大大提高（P＜0．05），凋亡率显著降低（P＜0．05）。结论缺血再灌注损伤的细胞模型中，同样发生了高尔基体的碎裂；过表达Grasp65可以减轻氧糖剥夺再灌注损伤所致的高尔基体碎裂，并可以减少HT22细胞的凋亡，其机制可能与上调GM130和GAAP的表达有关。

CVB3损伤HeLa细胞高尔基体结构的机制研究

目的 研究CVB3损伤HeLa细胞高尔基体结构的机制,为进一步探讨CVB3的致病机制奠定基础.方法 采用MOI为5的CVB3感染HeLa细胞,免疫荧光双标法检测病毒感染后不同时间点VP1和GM130在细胞中的定位情况,观察细胞高尔基带的变化;同时,选择CVB3感染后不同时间点收集细胞,Bradford法蛋白定量后.Western blot测定VP1、GM130和GRASP65蛋白的表达变化.结果 正常HeLa细胞中GM130和GRASP65免疫荧光呈带状分布,高尔基体结构正常;而CVB3病毒感染HeLa细胞3h后,GM130的荧光呈现散点状分布,高尔基体结构损伤.与此同时,GM130和GRASP65蛋白表达量逐渐下降;而VP1蛋白表达量持续上升,且6h后一直维持在较高水平.结论 CVB3感染引起HeLa细胞蛋白GM130和GRASP65表达量下调,导致GM130和GRASP65荧光带弥散,高尔基带断裂,这可能是CVB3感染导致宿主细胞高尔基体结构损伤的机制之一.

高尔基体基质蛋白GM130的研究现状

GM130蛋白参与高尔基体结构的维持,并在有丝分裂过程中主导高尔基体装置的拆卸和组装.当GM130减少的细胞进入有丝分裂后,形成多极纺锤体,在中期停止并死亡.GM130参与糖基化的控制,细胞周期变化,细胞极化和细胞定向迁移,还参与细胞自噬与凋亡.GM130与肿瘤的发生有关,它的减少显著降低CVB3病毒的复制.GM130失活可以引起雄性模型小鼠的不育.可见,它是一种显著影响动物多种生命活动的重要蛋白.

高尔基体基质蛋白130通过诱导上皮间充质转化促进甲状腺乳头状癌细胞TPC-1的侵袭和迁移

目的 探究高尔基体基质蛋白130(Golgi Matrix Protein 130,GM130)对甲状腺乳头状癌细胞侵袭和迁移能力的作用及机制.方法 RT-PCR检测人甲状腺细胞Nthy-ori 3-1及甲状腺乳头状癌细胞BCPAP、K1、TPC-1中的GM130 mRNA水平.将细胞分为Control、scramble siRNA (si-scramble)、GM130 siRNA(si-GM130)3组.CCK8检测各组细胞增殖,划痕实验检测细胞迁移,Transwell检测细胞侵袭,Western Blot检测GM130、Ki67、增殖细胞核抗原(Proliferating cell nuclear antigen,PCNA)、基质金属蛋白酶-4(Matrix metalloproteinase-4,MMP-4)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、钙依赖性粘附蛋白E(Calcium-dependent adhesion proteinE,E-cadherin)、Snail、钙依赖性粘附蛋白N(N-cadherin)及波形蛋白Vinmentin的表达,同时利用免疫荧光检测Vimentin的表达.结果 GM130在TPC-1细胞中的mRNA水平高,故利用TPC-1细胞进行后续实验.与Control组比较,si-GM130组中GM130表达显著下调,细胞增殖速率及Ki67、PCNA表达显著降低,细胞划痕闭合率显著下降,侵袭细胞数及MMP-4、MMP-9表达显著减少.此外,与Control组比较,si-GM130组中E-cadherin表达显著升高,Snail、N-cadherin及Vimentin表达显著降低.同时Vimentin荧光值在si-GM130组中显著降低.结论 GM130可通过诱导上皮间充质转化促进甲状腺乳头状癌细胞TPC-1的侵袭和迁移.

抑制GM130表达对胃癌细胞增殖、侵袭及迁移能力的影响

目的 分析GM130在不同分化人胃癌细胞系的差异表达,利用小干扰RNA技术来沉默GM130基因,研究其对胃癌细胞生物学行为的影响.方法 体外培养3株不同分化程度胃癌细胞系(高分化MKN-28、中分化SGC-7901、低分化MKN-45),Western blot和RT-PCR筛选出高表达的GM130细胞株MKN-45、SGC-7901,设计并化学合成、转染、筛选出针对GM130的小干扰RNA片段.通过MTF、Transwell、Matrigel侵袭实验,观测下调GM130后对胃癌细胞株的生物学行为影响,Western blot检测细胞中MMP-2、MMP-9蛋白的变化.结果 Western blot和RT-PCR检测结果显示,在MKN-45、SGC-7901细胞中GM130蛋白和mRNA水平呈现高表达水平.Westem blot和qRT-PCR结果显示在低分化胃癌MKN-45细胞中,GM130-siRNA-519转染组GM130基因的表达水平显著抑制(P＜0.05).与对照组相比,抑制转染组细胞的增殖、迁移能力明显下降,穿膜细胞数明显减少,MMP-2、MMP-9的蛋白表达水平显著降低(P＜0.05).结论 抑制GM130基因的表达下调可显著降低胃癌细胞的增殖和体外侵袭转移能力.