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EphrinB2对妊娠中期小鼠子宫血管内皮生长因子表达的影响
目的 通过观察EphrinB2对小鼠妊娠中期子宫血管内皮生长因子(VEGF)表达及孕体生长情况的影响来探讨EphrinB2促血管发育的机制. 方法 C57BL/6小鼠分为4组,分别为1组(对照组)、2组(低浓度组,EphrinB2-Fc10 μg/kg,ip)、3组(中浓度组,EphrinB2-Fc 50 μg/kg,ip)和4组(高浓度组,EphrinB2-Fc 250 μg/kg浓度组,ip),2、3、4组在检查到阴栓当天腹腔注射EphrinB2-Fc PBS溶液,对照组注射等量PBS,连续注射7d,妊娠10.5d处死小鼠,称量孕体重量,应用实时聚合酶链反应(Realtime PCR)及免疫组化法检测子宫VEGFmRNA和蛋白的表达. 结果 (1)小鼠孕体重量在EphrinB2高浓度组明显增高；(2) EphrinB2促进小鼠子宫VEGFmRNA及蛋白表达. 结论 EphrinB2调控妊娠血管发育的作用可能与其促子宫VEGF表达增加有关,EphrinB2亦可促进孕中期孕体生长加速.
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血府逐瘀胶囊调控EphB4/EphrinB2促血管适度生长的实验研究
目的 研究血府逐瘀胶囊适度促血管新生的作用及其对EphB4/EphrinB2表达的影响.方法 通过检测血府逐瘀胶囊含药血清对人微血管内皮细胞(human microvascular endothelial cell line 1,HMEC-1)活性、细胞周期、迁移、黏附和体外成血管的影响,明确药物具有适度促血管新生的作用,并运用实时定量PCR、Western blot技术检测药物对EphB4/EphrinB2表达的影响.结果 血府逐瘀含药血清对内皮细胞活性及S期细胞比例均无影响.细胞迁移方面,1.25％含药血清作用24、48、72 h均显著增加细胞迁移能力;但2.50％含药血清在初24 h抑制细胞迁移,随后显著促进迁移,与5.00％含药血清的影响趋势正好相反.细胞黏附方面,1.25％含药血清作用72 h时显著减少黏附细胞数;2.50％药物血清在前两个时间段增加细胞黏附数,随后在72 h抑制细胞黏附;5％含药血清在24 h表现出抑制作用,而在48 h转为促进,随后作用消失.成血管方面,仅2.50％含药血清表现出促进作用,而5.00％含药血清作用48 h和72h均出现抑制现象.2.50％含药血清组的实时定量PCR和Western blot结果显示,药物作用12h上调EphB4的表达,作用24 h下调EphB4表达的同时上调EphrinB2的表达.结论 仅2.50％含药血清作用48 h对HMEC-1的迁移、黏附和体外成血管均有促进作用,为佳促血管生长条件,提示血府逐瘀胶囊促血管新生作用具有一定的条件限制,而药物调控EphB4/EphrinB2的表达是其重要因素之一.
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缺血性脑卒中大鼠大脑皮层EphrinB2信号表达变化的研究
目的：观察大鼠缺血性脑卒中后皮层中磷酸化EphrinB2的表达。方法将成年雄性Sprague-Dawley大鼠随机分为假手术组和模型组，每组12只。采用线栓法制作大鼠大脑中动脉阻塞(MCAO)缺血再灌注模型。利用Western blotting和免疫组化SP法检测两组大鼠脑皮层中磷酸化EphrinB2的表达。结果模型组大鼠大脑皮层的磷酸化EphrinB2表达量和阳性细胞数目均高于假手术组(P<0.05)，并且血管内皮有磷酸化EphrinB2的表达。结论大鼠缺血性脑卒中后EphrinB2信号通路被激活。
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结直肠癌组织EphrinB2的表达与血管生成的关系
目的 检测EphrinB2蛋白和微血管密度(MVD)在结直肠癌组织中的表达情况及其与结直肠癌生物学特性的关系.方法 选取手术切除并经病理证实的结直肠癌标本63例、正常结直肠组织25例.应用免疫组织化学法检测EphrinB2蛋白的表达及MVD水平.结果 EphrinB2蛋门在结直肠癌组织中的阳性率为81.0%(51/63),正常组织中则为32.0%(8/25),组间比较差异有统计学意义(P<0.05);EphrinB2蛋白阳性表达的结直肠癌组织中MVD为39.39±8.97,阴性表达组为33.00±10.19,EphrinB2蛋白阳性表达组MVD水平高于阴性表达组(P<0.05).结直肠癌组织中EphrinB2蛋白的表达与肿瘤分化程度、浸润深度、淋巴转移及Duke分期密切相关(P<0.05),而与年龄、性别、肿瘤大小及部位无明显相关性(P>0.05).结论 EphrinB2蛋白是反映结直肠癌进展程度的重要指标,促进了肿瘤的生长及转移.
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鼻咽癌中EphB4、EphrinB2的表达及临床意义
目的 研究促红细胞生成素诱导的肝细胞受体EphB4及其配体EphrinB2在鼻咽癌组织中的表达情况及其与各临床病理因素之间的关系.方法 应用免疫组化SP法检测136例鼻咽癌组织标本及20例鼻咽黏膜慢性炎症组织中EphB4和EphrinB2的表达情况.结果 136例鼻咽癌组织中EphB4、EphrinB2的阳性表达率分别为65.4％和63.2％,二者的阳性表达均明显高于鼻咽黏膜慢性炎组织,EphB4和EphrinB2蛋白的阳性表达分别与淋巴结转移、颅神经麻痹、颅底侵犯、临床分期相关,而与性别、年龄、病理类型、茎突前、后间隙侵犯均无显著相关性;EphB4与EphrinB2蛋白的表达显著相关.结论 EphB4、EphrinB2可能在鼻咽癌的浸润、转移和血管生成中起着重要作用,它们有望成为判断鼻咽癌发生、发展、预后及指导治疗的新的生物学指标.
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浅谈EphrinB2/ephB4在骨重建中的作用
在颌骨骨重建研究中，破骨细胞骨与成骨细胞之间的相互作用中常伴有多种信号传导机制，近，越来越多的学者发现Eph-Ephrin双向信号传导系统在骨重建中发挥重要作用。破骨细胞上存在EphrinB2配体，成骨细胞前体上存在EphB4受体，以细胞直接接触的方式，在成骨细胞内产生正向信号同时在破骨细胞内产生反向信号，从而起到抑制骨吸收促进骨形成的作用。本文就EphrinB2/ephB4在骨重建中的作用等研究进展作一综述。
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EphB4受体及其配体EphrinB2 mRNA在子宫内膜癌组织中的表达及意义
目的:探讨红细胞生成素诱导的肝细胞受体EphB4及其配体EphrinB2 mRNA在子宫内膜癌组织中的表达及意义.方法:采用逆转录PCR(RT-PCR)法检测33例子宫内膜癌和10例正常子宫内膜组织中EphB4、EphrinB2 mRNA的表达率及相对含量,并分析二者与子宫内膜癌临床病理特征的关系.结果:(1)EphB4 mRNA在子宫内膜癌组的表达率和相对含量均高于正常子宫内膜组(P<0.05,P<0.05).EphrinB2 mRNA在子宫内膜癌组的表达率和相对含量也均高于正常子宫内膜组(P<0.05,P<0.01).(2)EphB4、EphrinB2mRNA的表达与子宫内膜癌手术病理分期、组织学分级有密切关系(P<0.05).二者表达与子宫内膜癌不同组织学类型,肌层浸润程度以及有无淋巴结转移无关(P0.05).结论:EphB4和EphrinB2的异常表达与子宫内膜癌发生、进展以及恶性程度有关,二者表达趋势呈现一致性,检测EphB4/EphrinB2有助于判断子宫内膜癌预后.
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EphB4/EphrinB2对血管生成的影响及中医药作用研究进展
血管相关性疾病已经成为危害人类健康的重大疾病之一,促血管新生和抗血管新生机制的研究也已成为中医药研究领域的热点问题.EphB4和EphrinB2均属于膜结合型蛋白,相对于其他酪氨酸激酶受体,EphB4和EphrinB2在自身活化和信号转导方面表现出独特的方式,在信号转导过程中二者均可被对方激活,产生"正向信号"和"反向信号".已有研究发现,EphB4/EphrinB2独特的双向信号在血管生成过程中起着重要的双向调节作用,并且有可能成为中医药影响血管生长的新的研究方向.
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EphrinB2在大鼠短暂性前脑缺血再灌注后对海马神经元的保护作用
目的 大鼠前脑短暂缺血再灌注后海马CA1区椎体神经元出现选择性迟发性死亡.目前的研究一致认为在脑缺血再灌注发生后,NMDA受体的过度激活是导致神经元损伤的主要原因.然而,NMDA受体过度激活的潜在机制尚不清楚.本课题旨在研究大鼠前脑缺血再灌注后海马CA1区神经元凋亡的机制.方法 改进的四血管夹闭法制作大鼠前脑缺血(15 min)再灌注模型,取缺血再灌注后不同时间(6 h、24 h、48 h)的海马CA1区脑组织,用ELISA检测Caspase-3活性变化.同时运用免疫印记方法检测p-ERK、ephrinB2、NMDA受体NR2A及NR2B亚基磷酸化水平的变化.结果 与对照组相比,在脑缺血再灌注后24 h,48 h,p-ERK、ephrinB2、p-NMDA受体表达明显增加,而在ERK1/2抑制剂U0126组表达受到了抑制.结论 本文提供了ephrinB2在脑缺血再灌注后对海马CA1区神经元的保护作用.Eph-ephrin系统可能是脑缺血再灌注后神经元损伤的一个潜在治疗靶点.
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缺氧缺血致脑白质损伤的新生大鼠脑中ephrinB2和EphB4表达的研究
目的 评估缺氧缺血诱导的脑白质损伤大鼠模型脑组织中的微血管密度和ephrinB2及其受体EphB4表达的水平.方法 将新生3日龄Wistar大鼠60只随机分为实验组和假手术组各30只.实验组行右侧颈总动脉永久性结扎后给予氮氧混合气体(94％ N2+6％ O2)4 h;假手术组只分离右侧颈总动脉但不结扎并常规给氧.4d后分别测定第7日龄大鼠脑组织中微血管密度以及ephrinB2和EphB4表达的水平.结果 实验组大鼠脑组织中的微血管密度、ephrinB2和EphB4的水平高于假手术组;假手术组大鼠脑组织中表达的ephrinB2和EphB4的百分比相近,实验组大鼠脑组织中ephrinB2的表达高于EphB4.结论 缺氧缺血诱导的脑白质损伤后有新生血管生成,并且动脉多于静脉.
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视网膜母细胞瘤中EphB4和EphrinB2的表达及意义
目的 探讨EphB4和EphrinB2的蛋白在视网膜母细胞瘤中的表达及其意义.方法 应用免疫组织化学SP法测定10例正常视网膜组织和40例视网膜母细胞瘤标本中EphB4和EphrinB2的表达水平,分析其与性别、临床分期、分化程度和视神经浸润的关系.结果(1)EphB4和EphrinB2蛋白表达的阳性率,在正常视网膜组织中分别为5％和2.5％,40例视网膜母细胞瘤标本中分别为77.5％和67.5％.EphB4和EphrinB2在视网膜母细胞瘤组织中的阳性率与显著高于正常视网膜组织中的阳性率(P＜0.05).(2)EphB4和EphrinB2的蛋白在视网膜母细胞瘤的阳性表达率与肿瘤组织的临床分期、分化程度及视神经浸润显著相关(P＜0.05).(3)EphB4和EphrinB2的蛋白在视网膜母细胞瘤组织中的阳性表达显著相关(P＜0.05).结论 EphB4和EphrinB2可能在视网膜母细胞瘤的发生和发展过程中起重要作用,可作为评价视网膜母细胞瘤的浸润及预后的标志物.
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人参皂苷Rg1对帕金森病小鼠黑质EphB1、ephrinB2表达的影响
目的：探讨人参皂苷Rg1对帕金森病（PD）小鼠黑质中EphB1、ephrinB2表达的影响及其意义。方法将27只 C57BL／6小鼠随机分为对照组、模型组和人参皂苷Rg1组。小鼠腹腔注射人参皂苷 Rg1预防给药，腹腔注射1－甲基－4－苯基－1，2，3，6－四氢吡啶（MPTP）构建 PD模型。观察小鼠游泳情况并评分。2 w后采用免疫组化方法检测小鼠黑质酪氨酸羟化酶（ TH）的表达，采用 RT－PCR法检测黑质 EphB1、ephrinB2 mRNA的表达，采用Western 印迹法检测黑质EphB1、ephrinB2蛋白的表达。结果模型组小鼠不同时间点游泳实验分值均显著低于对照组和人参皂苷 Rg1组（P＜0．05）；免疫组化结果显示模型组和人参皂苷Rg1组TH蛋白表达水平显著低于对照组（P＜0．05）；RT－PCR结果显示模型组 EphB1、ephrinB2 mRNA表达水平显著高于对照组和人参皂苷Rg1组（P＜0．01）；Western 印迹显示模型组 ephrinB2蛋白表达水平显著高于对照组和人参皂苷 Rg1组（P＜0．05）。结论人参皂苷Rg1可能通过降低EphB1、ephrinB2的表达而改善PD症状。
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慢病毒介导的EphrinB2基因转染大鼠骨髓间充质干细胞表达的实验研究
目的 将携带EphrinB2基因慢病毒转染至骨髓间充质干细胞(BMSCs),检测其过表达水平及细胞形态学变化,并探讨EphB4/EphrinB2是否具有促进大鼠BMSCs体外迁移活性的作用.方法 单纯贴壁法分离大鼠BMSCs,倒置显微镜观察细胞生长形态.携带EphrinB2慢病毒以感染复数3和10感染BMSCs分为低浓度转染组(MOI=3)和高浓度转染组(MOI=10),对照组采用未转染组、阴性转染组,利用qPCR检测EphrinB2基因表达及Western blot检测EphrinB2蛋白水平.观察EphrinB2基因转染后BMSCs形态学变化.15 d后通过免疫荧光检测MAP2表达了解细胞分化.进一步Transwell实验检测细胞迁移能力来了解EphB4/EphrinB2在调节干细胞迁移的作用.结果 培养BMSCs为多角形或棱形呈漩涡状排列生长.EphrinB2-BMSCs经qPCR和Western blot检测证实有外源性EphrinB2表达.EphrinB2基因转染后BMSCs 24 h,BMSCs胞体开始收缩细胞有突起伸出,72 h后可见典型的神经样细胞形态改变.15 d后,BMSCs分化成为MAP2神经元,与阴性转染组相比,低浓度转染组和高浓度转染组MAP2表达率上升(P< 0.05).Transwell实验结果显示:低浓度转染组与高浓度转染组较未转染组及阴性转染组穿膜细胞数量明显增加(P<0.05).结论 慢病毒介导EphrinB2能高效感染BMSCs,并随着时间延长分化成神经样细胞,同时EphB4/EphrinB2在调节BMSCs迁移具有重要作用.
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EphrinB2/EphB4在血管生长中的作用及中医药研究展望
近年来,有关ephrin及其Eph受体的作用研究已从神经系统方面逐步向血管生长扩展.已有研究表明ephrinB2/EphB4及其独特的双向信号转导几乎参与血管生长的每个方面,涉及血管发育过程中的动静脉分化、胚胎后血管新生包括内皮细胞增殖、迁移、粘附和分化等过程,且与VEGF、Notch等血管新生调控因子关系密切.另外,实验表明活血化瘀名方血府逐瘀汤显著的促血管新生作用与ephrinB2/EphB4相关,说明中医药促血管新生中ephrinB2/EphB4具有重要作用.本文部分总结了ephrinB2/EDhB4在血管生长中的作用,并提出中医药在这方面的展望.
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EphB4-EphrinB2通路的研究进展及应用
近年来,EphB4-EphrinB2通路引起了各学科的广泛关注.研究表明EphB4-EphrinB2通路在血管分化、重塑和新生中发挥着关键作用,与肿瘤的进展和预后密切相关,在眼科中有可能成为未来抗视网膜病的药物作用靶点,并且维持着骨质平衡和参与调节骨质改建.该文阐述了该通路的基本特征及其在基础研究和应用研究中的新进展.
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急性髓系白血病骨髓单个核细胞EphrinB2基因表达及其临床意义
目的:探讨急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)患者骨髓EphrinB2基因的表达情况并分析其临床意义.方法:应用实时定量PCR(real-time quantitative PCR,RQ-PCR)技术检测91例AML患者(观察组)及32例非恶性血液病患者(对照组)骨髓单个核细胞标本的EphrinB2表达水平.结果:AML患者中EphrinB2表达水平比对照组明显下调(P＜0.01).EphrinB2表达水平与AML患者的性别、外周血白细胞计数、血小板计数、血红蛋白含量、FAB分型及核型分组之间均无相关性(P＞0.05),但低表达患者的年龄明显低于高表达患者(P=0.011).接收者操作特征曲线(receiver operating characteristic curve,ROC)分析表明,ROC曲线下面积0.812(95％ CI:0.726 ～0.898;P＜0.01)及0.776(95％CI:0.670～0.883;P＜0.01)可分别用于区分AML患者与对照组及细胞遗传学正常的AML患者与对照组.EphrinB2低表达组患者与高表达组患者的化疗后完全缓解率及总生存时间差异均无统计学意义(P＞0.05).结论:EphrinB2表达下调是AML患者中的一个常见分子事件,但对患者预后并无明显影响.
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骨髓间充质干细胞与骨髓瘤细胞共培养时EphB4/ephrinB2表达异常
目的:研究正常骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cell,MSC)在与骨髓瘤细胞株U266、RPMI8226共培养过程中,骨髓瘤细胞对MSC EphB4/ephrinB2表达的影响.方法:应用Transwell培养体系,将正常骨髓MSC分别与骨髓瘤细胞株U266、RPMI8226细胞共培养7、12 d后分别应用实时定量RT-PCR和细胞免疫化学方法检测骨髓MSC的EphB4/ephrinB2mRNA和蛋白表达水平.结果:骨髓MSC与U266、RPMI8226共培养后,与对照组MSC相比,生长和形态未见明显改变,应用实时定量RT-PCR方法检测骨髓MSC EphB4/ephrinB2的mRNA水平较对照组均降低,在共培养7d的时间点上除EphB4在RPMI8226共培养组与对照组差异无统计学意义,其余组间差异均有统计学意义(P＜0.05),在12 d上差异无统计学意义(P＞0.05).细胞免疫化学结果显示共培养组MSC胞膜胞浆EphB4/ephrinB2表达下降.结论:骨髓瘤细胞株U266、RPMI8226在与正常骨髓MSC共培养后,诱导骨髓MSC EphB4/ephrinB2表达的下调,可能通过MSC成骨-破骨活动的脱耦合,参与骨髓瘤骨病的发生.
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靶向 EphB4的慢病毒干扰载体对结肠癌细胞中 EphB4及 EphrinB2表达的影响
目的：有研究显示EphB4在肿瘤发生发展中的作用与其配体EphrinB2密切相关。文中主要通过慢病毒介导的RNA干扰技术干扰结肠癌细胞中EphB4基因的表达，观察EphB4基因表达改变对其配体EphrinB2表达的影响。方法根据EphB4基因序列设计并合成3对miRNA的oligo DNA，退火形成双链后与pcDNA6．2-GW/EmGFP-miRNA载体相连并瞬时转染HEK293细胞，通过荧光显微镜、qPCR筛选出干扰效率高的质粒，将其与中间载体pDONR221和慢病毒载体pLenti6/V5-DEST连接构建慢病毒表达载体pLenti6/V5-DEST-EphB4。用脂质体将慢病毒载体以及包装质粒（ pLP1、pLP2和pLP/VSVG）共转染293 FT细胞，收集上清Lenti-miR-EphB4感染HEK293细胞株进行滴度鉴定。将获得的病毒液感染人结肠癌细胞株，通过荧光显微镜和qPCR检测结肠癌细胞中EphB4及其配体EphrinB2的表达变化。结果测序结果表明3对干扰载体SR1、SR2、SR3序列与参考序列一致，成功转染HEK293细胞后，各转染组细胞荧光显微镜下均可见到绿色荧光蛋白表达；qPCR显示载体 SR-3的沉默效率高；构建出来的慢病毒载体pLenti6．3/V5-DEST-miR-EphB4在293FT细胞中包装成功，所得慢病毒滴度为7×108 TU/mL；Lenti-miR-EphB4浸染后，SW480和Caco-2中EphB4 mRNA相对表达量（0．49±0．02、0．62±0．04）均较原始SW480（1．00±0．00）和Caco-2降低（1．00±0．00），差异有统计学意义（P＝0．000）；SW480中EphrinB2 mRNA表达量F （2．11±0．04）较原始SW480（1．00±0．00）明显升高（P＝0．000）；而Caco-2细胞中EphrinB2 mRNA表达无明显改变（1．01±0．02），差异无统计学意义（P＝0．315）。结论靶向EphB4的慢病毒干扰载体能够有效降低SW480及 Caco-2细胞中EphB4 mRNA表达水平。 EphB4与其配体EphrinB2之间的相互作用可能受到多种因素调控，有待后续深入研究。
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EphB4受体及其配体ephrinB2与妇科肿瘤关系的研究进展
EphB4受体及其配体ephrinB2是目前已知酪氨酸蛋白激酶受体家族中大的亚家族Eph/ephrin家族成员之一,是血管形成过程中动静脉分化的标志,在很多肿瘤组织中都显示高表达,与肿瘤发展及其血管生长的关系非常密切.它对肿瘤的影响具有双重性,既有肿瘤抑制作用,又有肿瘤促进作用.EphB4磷酸化激活后的正向信号可抑制肿瘤的发生、发展,促进肿瘤细胞凋亡,抑制其迁移、侵袭;反向信号经ephrinB2+细胞向胞内传递则促进肿瘤细胞生长、增殖、迁移和侵袭.研究显示,EphB4和ephrinB2与妇科肿瘤有密切联系,但其研究尚较局限.深入研究其作用机制将有利于进一步了解妇科肿瘤的发病机制,发现全新有效的靶向治疗和干预途径,有望成为肿瘤早期诊断及判断预后的指标之一,亦可作为肿瘤治疗的新靶点,有助于完善现有的肿瘤治疗措施.
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EphB4受体及其配体EphrinB2在结直肠癌组织中的表达及意义
目的 探讨EphB4受体及其相应的配体EphrinB2在结直肠癌发生发展过程中的作用.方法 随机选取结直肠癌组织72例,以正常结肠组织为对照,应用免疫组织化学技术检测EphB4和EphrinB2蛋白在结直肠癌组织中的表达情况.结果 正常结肠粘膜和结直肠癌组织中,EphB4受体表达阳性率分别为45.5%,73.6%,EphrinB2的表达阳性率分别为39.4%,69.4%,组间差异具有统计学意义(P＜0.05).在结直肠癌中,EphB4受体和EprinB2配体的表达均与肿瘤的分化程度、淋巴转移和Dukes分期有关,而与年龄、性别、发生部位无明显相关性.EphB4和EprinB2的表达存在一定的关联性.结论 EphB4和EphrinB2在结直肠癌的发生发展中可能起重要的促进作用.
