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锌指蛋白KLF12抑制人子宫内膜间质细胞体外蜕膜化过程中胰岛素样生长因子结合蛋白-1表达
目的 人子宫内膜间质细胞蜕膜化标志蛋白胰岛素样生长因子结合蛋白-1 (insulin-like growth factor binding protein-1,IGFBP-1)参与调控月经周期、排卵、蜕膜化、胚胎种植以及胎儿生长等生理过程,本研究旨在探索锌指蛋白KLF12对人子宫内膜间质细胞体外蜕膜化过程中IGFBP 1表达的影响.方法 制备Ad Flag KLF12重组腺病毒,通过荧光定量聚合酶链式反应(PCR)和酶联免疫吸附试验(ELISA)结合重组腺病毒介导的KLF12过表达实验,阐述人子宫内膜间质细胞体外蜕膜化过程中KLF12对IGFBP 1表达调控作用.结果 成功获得滴度为2×1011 ifu/ml的重组KLF12腺病毒,该腺病毒可在人子宫内膜间质细胞中高表达Flag KLF12融合蛋白;体外分离培养的人子宫内膜间质细胞经8 Br cAMP和醋酸甲羟孕酮(medroxy progesterone acetate,MPA)联合诱导蜕膜化后,KLF12的mRNA表达随着诱导时间延长逐渐降低,72 h降低明显,较未刺激降低约70％;过表达KLF12显著抑制8 Br cAMP和MPA诱导的人子宫内膜间质细胞中IGFBP 1 mRNA的表达,并以时间依赖的方式明显抑制IGFBP 1的分泌(P＜0.01);过表达KLF12明显抑制人子宫内膜间质细胞体外蜕膜化过程中IGFBP 1启动子转录活性.结论 锌指蛋白KLF12抑制人子宫内膜间质细胞体外蜕膜化过程中IGFBP 1的表达与分泌.
关键词： KLF12 胰岛素样生长因子结合蛋白-1 子宫内膜间质细胞 蜕膜化 -
基底样乳腺癌中microRNA-205靶向调控KLF12及对细胞侵袭能力的影响
目的 探讨基底样乳腺癌(basal-like breast carcinoma,BLBC)特异性miRNAs和靶基因及生物学功能.方法 提取细胞总RNA和蛋白,荧光素酶实验验证靶基因;采用qRT-PCR、Western blot和免疫组化EnVision法分析miRNA和靶基因表达;CCK8和Transwell实验检测细胞增殖和侵袭能力.结果 荧光素酶实验示miR-205靶向调控KLF12(P =0.001 6).qRT-PCR检测结果示MAD-MB-468细胞中miR-205表达下调(P=0.007),KLF12表达升高(P=0.039);转染miR-205 mimics过表达miR-205,miR-205表达显著升高(P=0.000),KLF12表达减少(P =0.038).Western blot检测结果示miR-205过表达,MDAMB-468细胞KLF12表达显著升高(P=0.007 9).CCK8实验示miR-205未参与细胞增殖.Transwell实验示过表达miR-205显著抑制细胞侵袭能力(P =0.001).结论 miR-205是BLBC特异性的miRNA,通过负性靶向调控原癌基因KLF12和抑制侵袭具有抑癌基因的功能.miR-205和KLF12为BLBC的诊断和治疗提供潜在的分子标志物和新思路.
关键词： 乳腺肿瘤 microRNA-205 KLF12 MDA-MB-468细胞 侵袭 增殖 -
Krüppel样转录因子12在子宫颈腺癌中的表达及意义
探讨Krüppel样转录因子12(Krüppel-like factor 12,KLF12)在子宫颈腺癌中的表达及与临床特征的关系,为寻找新的子宫颈腺癌预后标志物及治疗靶点提供依据.方法:收集增城市妇幼保健院2005-2007年92例子宫颈腺癌患者的肿瘤组织标本,采用免疫组织化学染色法分析KLF12在子宫颈腺癌中的表达.Kaplan-Meier及Log-rank法分析KLF12表达水平与患者5年生存率的关系.Mann-Whitney U检验分析KLF12表达水平高低与患者临床特征之间的关系.Cox比例风险回归模型分析KLF12表达水平及其他临床特征与患者预后的关系.结果:KLF12在大部分子宫颈腺癌患者中高表达(69/92),高表达KLF12的子宫颈腺癌患者5年生存率明显低于KLF12低表达患者(P＜ 0.001).KLF12高表达与子宫颈腺癌患者的临床分期(P=0.01)、淋巴结转移(P＜ 0.001)和宫旁浸润(P＜ 0.001)存在明显的相关性.KLF12高表达是子宫颈腺癌患者预后不良的独立预测指标(HR=4.117,P=0.001).结论:KLF12在子宫颈腺癌中可能是一个癌基因,并有可能作为子宫颈腺癌患者预后分子标志物和新的治疗靶点.
