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Apelin 对单侧输尿管结扎小鼠肾脏纤维化的影响研究
目的：探讨生物活性肽Apelin对单侧输尿管结扎（ UUO）小鼠肾脏纤维化的影响及相关机制，分析在肾脏纤维化时血清和肾脏局部Apelin／APJ系统的代偿性变化。方法2014年1月选取7周龄雄性C57Bl／6j小鼠共60只，构建UUO的小鼠模型，并设立假手术组（ Sham）作为对照。术后每天给小鼠腹腔注射Apelin－13（0.1μmol／kg）或等量0.9％氯化钠溶液（ vehicle ）。根据小鼠手术方式和术后用药情况分为4组（15只／组）： Sham ＋vehicle组、Sham ＋Apelin组、 UUO ＋vehicle组、 UUO ＋Apelin组。术后2周将小鼠处死，取手术侧肾脏进行检测。采用Masson染色观察肾脏纤维化程度；采用实时荧光定量 PCR （ RT-PCR ）法检测肾脏细胞外基质胶原〔纤维连接蛋白（Fibronectin）、Ⅰ型胶原（Collagen I）、Ⅲ型胶原（Collagen Ⅲ）〕表达水平以及肾脏Apelin、 APJ表达水平；采用Western blotting法检测肾小管上皮细胞标志物上皮细胞钙黏蛋白（ E－cadherin）、间充质细胞标志物α平滑肌肌动蛋白（α－SMA）表达水平以及转化生长因子β（ TGF-β）／Smads 信号通路的主要信号分子（ TGF-β1、 TGF-βR1、p－Smad2）表达水平；采用ELISA法检测小鼠血清Apelin表达水平。结果4组小鼠肾脏纤维化程度比较，差异有统计学意义（ P ＜0.05）。 UUO ＋vehicle组和 UUO ＋Apelin组小鼠肾脏纤维化程度均高于 Sham ＋vehicle组和 Sham＋Apelin组（ P＜0.05）； UUO ＋Apelin组小鼠肾脏纤维化程度低于 UUO ＋vehicle组（ P ＜0.05）。4组小鼠肾脏Fibronectin、 CollagenⅠ、 Collagen Ⅲ表达水平比较，差异均有统计学意义（ P ＜0.05）。 UUO ＋vehicle组和 UUO＋Apelin组小鼠肾脏 Fibronectin、 CollagenⅠ、 Collagen Ⅲ表达水平高于 Sham ＋vehicle组和 Sham ＋Apelin组（ P ＜0.05）； UUO ＋Apelin组小鼠肾脏Fibronectin、 CollagenⅠ、 CollagenⅢ表达水平低于UUO ＋vehicle组（ P＜0.05）。4组小鼠肾脏E－cadherin、α－SMA表达水平比较，差异均有统计学意义（ P＜0.05）。 UUO ＋vehicle组和UUO ＋Apelin组小鼠肾脏E－cadherin表达水平低于Sham ＋vehicle组和Sham ＋Apelin组，α－SMA表达水平高于Sham ＋vehicle组和Sham ＋Apelin组（ P＜0.05）； UUO ＋Apelin组小鼠肾脏E－cadherin表达水平高于UUO ＋vehicle组，α－SMA表达水平低于UUO ＋vehicle组（ P＜0.05）。4组小鼠肾脏TGF-β1、 TGF-βR1、 p－Smad2表达水平比较，差异均有统计学意义（ P＜0.05）。 UUO ＋vehicle组和 UUO ＋Apelin组小鼠肾脏 TGF-β1、 TGF-βR1、 p －Smad2表达水平均高于 Sham＋vehicle组和Sham ＋Apelin组（ P＜0.05）； UUO ＋Apelin组小鼠肾脏TGF-β1、 TGF-βR1、 p－Smad2表达水平均低于UUO ＋vehicle组（ P＜0.05）。4组小鼠肾脏Apelin表达水平比较，差异无统计学意义（ P＞0.05）；4组小鼠肾脏APJ、血清Apelin表达水平比较，差异有统计学意义（ P＜0.05）。 UUO ＋vehicle组和UUO ＋Apelin组小鼠肾脏APJ表达水平高于Sham ＋vehicle组和Sham ＋Apelin组，血清Apelin表达水平低于Sham ＋vehicle组和Sham ＋Apelin组（ P＜0.05）；UUO ＋Apelin组小鼠肾脏APJ表达水平低于UUO ＋vehicle组，血清Apelin表达水平高于UUO ＋vehicle组（ P＜0.05）。结论 Apelin通过干扰经典的TGF-β／Smads信号通路抑制UUO小鼠肾脏的肾小管上皮－间充质转分化，进而减轻肾脏纤维化。在肾脏纤维化时，小鼠血清Apelin表达水平降低，肾脏APJ表达水平升高，可能对慢性肾脏病的进展起到一定的代偿作用。
关键词： 纤维化 肾疾病 肾小管上皮-间充质转分化 小鼠 Apelin -
水飞蓟宾对肾间质纤维化模型大鼠肾小管上皮-间充质转分化的影响
目的:探讨水飞蓟宾对肾间质纤维化模型大鼠肾小管上皮-间充质转分化(EMT)的影响.方法:将36只8周龄雄性SD大鼠均分为假手术组(S组)、模型组(U组)、治疗组[水飞蓟宾200 mg/(kg·d)](D组),U组及D组均采用单侧输尿管梗阻复制大鼠肾间质纤维化模型,D组大鼠于术后第1天使用水飞蓟宾灌胃至处死前[200 mg/(kg·d)],S组和U组注射等量生理盐水灌胃;各组大鼠分别于术后第7天、第14天处死6只大鼠,免疫组化染色和Westem Blot观察观察Ski、E-钙粘蛋白(E-cadherin)、转化生长因子-β1(TGF-β1)、α-平滑肌肌动蛋白、Ⅲ型胶原(col-Ⅲ)蛋白的表达,Pearson法分析Ski与TDI、TFI、TGF-β1、α-SMA、col-Ⅲ蛋白表达的相关性.结果:大鼠肾组织免疫组化染色和Western Blot结果显示,与S组比较,U组Ski、E-cadherin蛋白表达明显减少,TGF-β1、α-SMA、col-Ⅲ表达明显升高,第14天时变化更明显(P＜0.05);与U组比较,D组大鼠肾组织中Ski、E-cadherin有所增加,但仅第14天差异有统计学意义(P＜0.05),TGF-β1、α-SMA、col-Ⅲ显著降低,第14天组更为明显(P＜0.05);Pearson相关分析显示,Ski表达与E-cadherin表达呈正相关,而与TGF-β1、α-SMA、col-Ⅲ呈负相关(P＜0.05).结论:水飞蓟宾可能通过Ski影响EMT的发生.
