微生物学免疫学进展杂志
Progress in Microbiology and Immunology 미생물학면역학진전
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脑膜炎奈瑟菌外膜蛋白NhhA研究进展
脑膜炎奈瑟菌(Neisseria meningitides,Nm,以下简称脑膜炎球菌),是引起流行性脑脊髓膜炎疾病的主要病原体.NhhA(Neisseria hia homologue)是Nm的一种寡聚外膜蛋白.研究表明,NhhA在宿主-病原体相互作用中具有重要功能,如参与Nm无症状鼻咽黏膜定植,诱导巨噬细胞凋亡,具有免疫刺激功能等.该蛋白表面暴露,并在许多Nm菌株中都能表达,表明它有希望作为候选疫苗.现对NhhA的分子结构、在宿主-病原体相互作用中的功能以及作为疫苗候选物的研究现状等作一概述.
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HIV双特异性抗体研究进展
双特异性抗体(bispecific antibody,BsAb)是一种人工制备的非自然抗体.该抗体含两种特异性结合位点,能在抗原抗体反应的同时结合多种功能分子与细胞,从而介入引导免疫反应的方向.上述特性使BsAb在对抗人免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus,HIV)时具有广谱效能.目前,BsAb已成为抗HIV研究领域中的一大热点.现就BsAb在抗HIV病毒中表位的设计选择与优化、作用机制等方面的研究进展作一概述.
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疫苗的稳定性研究进展
疫苗的稳定性始终贯穿在产品的研发阶段以及疫苗上市、疫苗运输和上市后继续追踪其免疫效果的全过程.疫苗稳定性试验所得数据是评价该疫苗质量和免疫效果的重要依据,更是制定产品储存条件、有效期等重要参数的主要依据.现就疫苗的稳定性相关法规、研究方案、有效期制定、联合疫苗稳定性研究及成品中有效成分的累计时间等方面作一综述.
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CD8+T细胞抗衣原体感染研究进展
衣原体(Chlamydia)是一种重要的胞内致病菌,其感染可引起多种疾病并常导致并发症.在衣原体感染过程中,宿主多种细胞参与免疫调控以抵抗衣原体的感染.CD8+T细胞通过其跨膜受体(T cell receptor,TCR)识别抗原,从而在T细胞介导的抗衣原体感染中发挥了至关重要的作用,其抗感染机制可能与分泌细胞因子有关.现就CD8+T在衣原体感染过程中的产生、募集、应答机制以及所介导的免疫病理反应作一概述,旨在为衣原体疫苗研制提供新的思路.
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基因疗法中非整合型病毒载体的应用
在过去的十年间,基因疗法在肿瘤、遗传性疾病以及传染性疾病等多个领域的临床治疗中取得了突破性进展.在基因疗法中,广泛地应用了各种各样的病毒载体,按其生活史可分为整合型病毒载体(如 γ-逆转录病毒、慢病毒)和非整合型病毒载体(如腺病毒、腺相关病毒、单纯疱疹病毒和痘病毒).腺病毒、单纯疱疹病毒是溶瘤病毒中常用的病毒载体,能优先感染肿瘤细胞,经复制后造成其裂解.这些病毒的特点是基因携带量大,但只能维持较短时间的外源性基因表达,加之免疫原性较强,因此需要采取肿瘤内注射的给药方式.腺相关病毒则由于其较低的免疫原性和持久的表达能力而被广泛使用于遗传缺陷性疾病的基因替代疗法中.现就用于直接在体细胞内进行稳定表达的非整合型病毒载体作一概述.
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2012—2017年濮阳市急性弛缓性麻痹病例监测系统评价
目的 分析濮阳市2012—2017年≤15岁人群急性弛缓性麻痹(acute flaccid paralysis,AFP)病例流行病学特征,评价AFP监测专报系统运转质量及问题,为本地区AFP防控策略提供依据.方法 采用描述性流行病学方法,分析监测专报系统报告的AFP报告病例的流行病学特征,并对AFP病例监测系统运转情况进行评价.结果 濮阳市2012—2017年AFP监测专报系统共报告108例,其中AFP报告病例84例,非AFP报告病例24例,年均报告发病率1.68/10万;华龙区AFP报告发病率高8.58/10万;发病时间以秋季为主;男性高于女性,差异具有统计学意义(χ2=10.72、P<0.05),1~<5岁组居多,占总AFP报告病例数的69.05%;84例AFP报告病例中,完成脊髓灰质炎疫苗全程免疫史的有80例,占总AFP报告病例数的95.24%.结论 濮阳市2012—2017年≤15岁人群未发现脊灰野病毒病例,AFP监测专报系统运转状况良好,但仍需加强系统监测人员的培训,强化报告病例意识,进一步提高监测敏感性.
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昆明儿童呼吸道感染9种病原体IgM抗体检测结果分析
目的 分析2016年1—12月1136例门诊及住院拟诊呼吸道感染的4月龄 ~12岁患者,了解昆明地区儿童呼吸道感染患者中9种常见病原体(嗜肺军团菌、肺炎支原体、肺炎衣原体、Q热立克次体、腺病毒、呼吸道合胞病毒、甲型流感病毒、乙型流感病毒和副流感病毒)的感染情况.方法 采用间接免疫荧光法,检测患儿的血清中9种病原体.通过SPSS统计软件比较分析阳性检测率在不同年龄、季节、性别患儿阳性病例数及阳性率的差异.结果 1136例儿童呼吸道感染患者中,IgM抗体检测阳性534例,阳性率为47%.9种病原体IgM抗体阳性率,MP阳性率高(40.8%),COX低(0.0%).单一病原体感染487例,阳性率为42.9%,混合病原体感染47例,阳性率为4.1%.统计分析结果显示,各年龄组(婴儿组、幼儿组、学龄前期组、学龄期组),学龄期组IgM阳性率高(54.1%),幼儿组低(39.8%),组间差异有统计学意义(χ2=18.729、P<0.05).春、夏、秋、冬IgM阳性率分别是44.9%、53.5%、43.8%和45.5%,组间差异无统计学意义(χ2=6.657、P=0.084,P>0.05).患者男女性别IgM阳性率分别是37.8%和58.8%,组间差异有统计学意义(χ2=49.562、P<0.05).结论 昆明地区儿童呼吸道感染以MP为主,学龄前期及学龄期儿童感染率较高,无季节差异,女性患儿多于男性.
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百日咳毒素抗原检测系统的建立及其应用
目的 建立吸附无细胞百白破联合疫苗中百日咳毒素(pertussis toxin,PT)的ELISA测定方法,并进行验证及应用.方法 以PT作为检测抗原,用高效价鼠单抗和相应的兔多抗建立双抗体夹心ELISA,确定方法的线性范围、重复性、准确性、专属性等,并进行初步应用.结果 PT质量浓度在2.5~80.0 ng/mL时线性良好,决定系数R2>0.98.该方法与Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型脊髓灰质炎病毒原液、甲肝疫苗原液、乙肝疫苗原液、白喉类毒素(diphtheria toxoid,DT)、破伤风类毒素(tetanus toxoid,TT)、百日咳丝状血凝素(filamantous hemagglutinin,FHA)、黏着素(pertactin,PRN)均无明显交叉反应,重复性好,专属性较强,其他均符合常规质控要求.该抗原检测系统对生产具有指导意义,并可以正确反映原液及成品中PT的稳定性.结论 建立了PT双抗体夹心ELISA检测方法,为吸附无细胞百白破联合疫苗生产过程中PT含量的质量控制提供有效的技术手段.
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2011—2017年河池市5岁以下儿童手足口病流行特征和病原特征分析
目的 了解河池市主要易感人群0~5岁儿童2011—2017年手足口病(hand-foot-mouth disease,HFMD)流行特征和病原特征,为制定更有针对性的防控措施提供科学依据.方法 收集2011—2017年河池市传染病报告信息系统HFMD疫情报告资料、人口资料、监测点医院的HFMD病原学监测资料和0~5岁儿童预防接种信息系统EV71疫苗接种资料,采用描述性流行病学方法进行分析.结果 7年中河池市0~5岁儿童HFMD病例共报告109113例,年均发病率5314.97/10万,占总发病人数95.35%;0~5岁儿童男性发病多于女性,男女性别比为1.61:1;发病呈波动式起伏,双数年高发,每年有两个高发期:主高峰期在5—7月,次高峰期在10—12月.各县(区)0~5岁儿童发病率存在差异,城市发病率高于农村.0~5岁儿童5年普通病例的病原构成比为:EV7115.45%、Cox A1619.09%、其他肠道病毒65.45%.0~5岁儿童7年重症病例的病原构成比为:EV7181.63%、Cox A164.90%、其他肠道病毒13.47%,且不同年份病原构成也有差异.结论 0~5岁儿童是HFMD病例主要发病人群,尤其是0~<4岁的散居儿童多;男性比女性多;0~5岁儿童HFMD普通病例的主要病原体为其他肠道病毒,重症病例以EV71居多,死亡病例基本都为EV71导致,因此接种EV71疫苗是预防重症和死亡HFMD病例的重要手段.
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一株临床分离的水痘带状疱疹病毒的生物学特性分析
目的 研究水痘带状疱疹病毒(varicella-herpes zoster virus,VZV)临床分离株WXL株的生物学特性.方法 筛选2BS细胞培养WXL株的佳条件,对佳培养条件下WXL株的滴度及糖蛋白E(glycoprotein E,gE)浓度进行检测,并检测所致细胞病变(cytopathic effect,CPE)直径,检测结果与Oka株进行比较.采用透射电子显微镜(transmission electron microscope,TEM)对WXL株进行病毒颗粒形态观察;通过检测其ORF22基因片段的核酸序列,对其进行基因型分型.结果 采用MOI 0.001感染2BS细胞培养WXL株时,其病毒培养液滴度高.在此培养条件下,WXL株病毒培养液的滴度与Oka株无明显区别,但其gE浓度明显低于Oka株,同时CPE直径明显大于Oka株.WXL株病毒颗粒TEM观察到3种不同的病毒颗粒,其中,完整病毒颗粒直径约200 nm,核衣壳直径约100 nm,并呈六面体形;根据ORF22核酸序列检测结果,WXL株属于基因2型.结论 WXL株具有典型VZV野生毒株的生物学特性.
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2013—2017年佛山市南海区手足口病流行特征分析
目的 分析2013—2017年佛山市南海区手足口病的流行病学特点,为预防和控制手足口病疫情提供科学依据.方法 对南海区2013—2017年手足口病病例进行描述性流行病学分析.结果 2013—2017年南海区共报告手足口病病例101498例,年平均发病率为761.12/10万,死亡2例;全年均有病例报告,呈明显的夏秋季发病特征,5—6月出现发病峰值(36927例,占36.38%);发病人群主要集中在人口密度大的地区;男性发病高于女性;以5岁及以下的散居儿童为主(91305例,占89.96%),尤其集中在1~<4岁组(69204例,占68.18%).在病原学特征方面,不同年份呈现出不同的优势病原流行.结论 2013—2017年佛山市南海区手足口病在全区广泛流行,呈典型的季节、地区、年龄、性别和职业分布特征.因此,根据病原的流行规律做好重点地区、重点时段、重点人群的防控工作至关重要.
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新型结核病疫苗T-BioVax与Poly(I:C)和DDA配伍后的免疫效果初步评价
目的 对新型结核病疫苗T-BioVax及其与聚肌胞苷酸Poly(I:C)、二甲基三十六烷基铵(dimo-thylidioctyl ammonium bromide,DDA)佐剂配伍后的免疫效果进行初步评价,并验证体外分枝杆菌生长抑制试验(mycobacteria growth inhibition assay,MGIA)评价结核病疫苗效力的可行性.方法 将BALB/c小鼠随机分成4组,1组于腹股沟皮下免疫T-BioVax+Poly(I:C)+DDA 2针,间隔3周;3组分别免疫T-BioVax、BCG(Danish 1331)或生理盐水(nor-mal saline,NS)为对照,其中BCG(Danish 1331)组经皮内免疫一针,另2组免疫程序与T-BioVax+Poly(I:C)+DDA组相同.分别在第4、6、7、9周通过ELISA检测小鼠血清特异性IgG、IgG1和IgG2a抗体水平;在第4周通过ELIS-POT检测脾脏淋巴细胞分泌的细胞因子IFN-γ 和IL-17;在第6周和第9周通过MGIA来评价疫苗效力.结果 抗体检测结果显示,T-BioVax+Poly(I:C)+DDA组T-BioVax特异性IgG和IgG1抗体水平均高于T-BioVax组和BCG(Danish 1331)组,差异有统计学意义(P<0.05);T-BioVax+Poly(I:C)+DDA组T-BioVax特异性IgG2a抗体水平高于T-BioVax组,差异有统计学意义(P<0.05);T-BioVax+Poly(I:C)+DDA组T-BioVax特异性IgG2a抗体水平在第4周和第7周高于BCG(Danish 1331)组,差异有统计学意义(P<0.05).ELISPOT检测结果显示,除了在2.5μg/孔的T-BioVax抗原刺激时,T-BioVax+Poly(I:C)+DDA组诱导产生的细胞因子IFN-γ 的斑点形成细胞(Spot forming cells,SFC)数量与BCG(Danish 1331)组差异无统计学意义(q=0.6328,P=0.9694)外,T-BioVax+Poly(I:C)+DDA组诱导产生的细胞因子IFN-γ 和IL-17的SFC数量均高于T-BioVax组、BCG(Danish 1331)组和NS组,差异有统计学意义(P<0.05).MGIA结果显示,第6周T-BioVax+Poly(I:C)+DDA组和BCG(Danish 1331)组共培养的CFU数均低于T-BioVax组和NS组,差异有统计学意义(P<0.05),T-BioVax+Poly(I:C)+DDA组共培养的CFU数与BCG(Danish 1331)组差异无统计学意义(q=2.067,P=0.4789);第9周T-BioVax+Poly(I:C)+DDA组共培养的CFU数低于T-BioVax组、BCG(Danish 1331)组和NS组,差异有统计学意义(P<0.05).结论 结核病疫苗T-Bio-Vax与Poly(I:C)、DDA佐剂配伍后,免疫原性得到了增强,诱导小鼠的体液免疫和细胞免疫应答都得到了提高,MGIA试验结果也显示疫苗对结核杆菌生长的抑制效果得到了提高,与体液免疫和细胞免疫结果相一致,初步表明该方法建立成功.
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2011—2017年青海省女性肺结核流行病学特征监测分析
目的 了解2011—2017年青海省女性肺结核流行病学特征,为女性结核病防治工作提供科学依据.方法 对青海省7年间女性肺结核监测数据进行描述性流行病学分析.结果 7年来青海省共计报告病例9568例女性肺结核患者,报告发病率为48.25/10万(9568/19831853),年报告发病率整体呈下降趋势;医学检测涂片阳性患者占45.46%(4350/9568);果洛州的女性肺结核报告发病率高(130.93/10万,820/626272),海西州低(29.55/10万,474/1604125),不同地区报告发病率差异有统计学意义(χ2=3201.5,P<0.05).痰涂片阳性中,西宁市肺结核患者构成比高达61.51%(1454/2364),玉树州为25.40%(424/1669).时间分布,3月报告发病患者多,占10.74%(1028/9568),2月少,占5.88%(563/9568).女性肺结核患者年龄及重症分布,60~<80岁女性人群发病率高;0~<10岁低年龄组和≥85岁高年龄组仍有病例报告;不同年龄组肺结核报告发病率差异有统计学意义(χ2=2835.174,P<0.05);总重症率为2.32%(222/9568),除0~<10岁年龄组外,70岁以上高年龄组重症率高,不同年龄组重症率差异有统计学意义(χ2=71.28,P<0.05).报告病例主要职业以农牧民和学生为主,占85.39%(8170/9568);家政、家务及待业人群中痰涂片阳性的患者构成比为66.41%(350/527).青海省女性肺结核患者中,少数民族占63.87%(6111/9568),其中藏族占46.15%(4416/9568).从发现方式看,因症就诊的患者占56.94%(5448/9568).结论 青海省女性肺结核发病率总体呈下降趋势,疾控部门需密切关注患者报告数和涂片阳性肺结核患者,提高患者发现工作质量.
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流感减毒活疫苗效力试验检测新方法的建立
目的 建立基于NP蛋白检测的流感减毒活疫苗病毒滴度检测方法,并进行初步应用.方法 对病毒接种方式、流感病毒感染MDCK细胞培养时间、一抗和酶标二抗的稀释度、封闭液等ELISA反应条件进行筛选优化.采用建立的方法检测3批流感减毒活疫苗原液和1批疫苗成品,并与鸡胚培养法检测结果进行比较.结果 选择直接接种法作为接种方式,病毒感染细胞后培养48 h进行NP蛋白表达的检测;ELISA检测条件一抗稀释度为1:4000,酶标二抗稀释度为1:4000,2% 牛血清白蛋白封闭2 h,检测结果P/N值大.用建立的方法检测流感减毒活疫苗原液及疫苗成品效力,与鸡胚培养法检测结果差异无统计学意义(P>0.05),具有较好的一致性.结论建立了基于NP蛋白检测的流感减毒活疫苗效力试验方法,可用于生产过程中流感减毒活疫苗原液和成品的检定.
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淫羊藿苷对CVB3诱导的幼龄大鼠心肌炎的作用
目的 探究淫羊藿苷(Icariin)对柯萨奇B3病毒(coxsackievirus B3,CVB3)诱导的幼龄大鼠心肌炎的作用及作用机制.方法 将幼龄SD大鼠随机分为对照组(Ctrl组)、Icariin组、CVB3组和CVB3+Icariin组,CVB3组和CVB3+Icariin组大鼠腹腔注射CVB3复制心肌炎模型.HE染色检测心肌组织病理改变,Western blot检测Caspase-3和Caspase-9的表达,试剂盒检测心脏功能指标肌红蛋白(myoglobin,Mb)、肌酸激酶同工酶(Creatine kinase MB,CK-MB)、肌钙蛋白I(Cardiac troponin I,cTn I)、氧化应激指标超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)和丙二醛(malondialdehyde,MDA)的浓度,ELISA检测炎症因子白介素-6(Interleukin-6,IL-6)和IL-1β 的浓度.结果 与Ctrl组相比,CVB3组大鼠心肌组织病理损伤加重;与CVB3组相比,CVB3+Icariin组大鼠心肌组织病理损伤明显减轻;同时,CVB3组Caspase-3和Caspase-9的表达水平明显高于Ctrl组,差异有统计学意义(P<0.01),CVB3+Icariin组大鼠Caspase-3和Caspase-9表达水平均低于CVB3组,差异有统计学意义(P<0.01);CVB3能明显升高大鼠血清Mb、CK-MB和cTn I的浓度(P<0.01),Icariin能降低模型大鼠Mb、CK-MB和cTn I的浓度,差异有统计学意义(P<0.01);与Ctrl组相比,CVB3组大鼠血清SOD浓度明显降低(P<0.01),MDA浓度明显升高(P<0.01),而Icariin能减弱CVB3对SOD和MDA的调控作用,差异有统计学意义(P<0.01);此外,CVB3能升高模型大鼠血清中IL-6和IL-1β 的浓度(P<0.01),Icariin能降低IL-6和IL-1β 的浓度(P<0.01).结论 Icariin能通过抑制氧化应激和炎症反应减轻CVB3诱导的幼龄大鼠心肌炎.
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恶性疟原虫合子/动合子表面25蛋白自身偶联条件的优化及其聚体蛋白的制备
目的 探讨影响恶性疟原虫合子/动合子表面25蛋白(25 kDa Plasmodium falciparum sexual stage protein,Pfs25)偶联的因素,优化Pfs25蛋白的偶联反应条件,制备具有免疫原性的Pfs25纯化聚体蛋白.方法 通过对偶联反应时Pfs25蛋白浓度、偶联反应的酸碱度、不同的缓冲液及偶联试剂添加方式的探索,考察不同反应条件对Pfs25蛋白偶联的影响.凝胶过滤层析纯化Pfs25偶联反应产物,双抗体夹心ELISA和SDS-PAGE对凝胶柱洗脱液进行检测,Western blot检测纯化的Pfs25聚体蛋白.结果 Pfs25蛋白偶联反应选择1/15 mol/L Na2 HPO4-KH2 PO4为偶联缓冲液,反应体系在pH 5.6~6.0时偶联效果更好,而Pfs25蛋白反应质量浓度为25 mg/mL时可获得佳的Pfs25偶联效率(68.67%),凝胶过滤层析法获得Pfs25聚体蛋白,经双抗体夹心ELISA和Western blot检测,形成的Pfs25聚体蛋白保持了与Pfs25蛋白相同的抗体结合能力.结论 优化了Pfs25蛋白佳偶联反应条件,获得具有免疫原性的Pfs25纯化聚体蛋白.在形成Pfs25聚体中,以二聚体(Pfs25)2为主要形式,兼有少量三聚体(Pfs25)3和四聚体(Pfs25)4.
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破伤风类毒素减量的DTaP与Hib结合苗的 联合疫苗免疫婴儿后的Hib抗体应答
虽然联合疫苗有助于提高儿童对疫苗吸收率,但研究证明一些疫苗成分的免疫原性改变了. 作者研究了改变 DTaP 和 Hib 联合疫苗中破伤风类毒素(TT)的量,是否会导致与分开而同时给药相似的免疫原性.
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四价脑膜炎球菌ACWY群破伤风类毒素结合疫苗单独或与13价肺炎球菌结合疫苗联合接种对学步 儿童的免疫原性和安全性:Ⅲ期临床试验
作者在学步儿童中评估了 1 剂和 2 剂量的四价脑膜炎球菌血清组 A、C、W、Y 群破伤风类毒素结合疫苗(MenACWY-TT)单独或与 13 价肺炎球菌结合疫苗(PCV13)联合接种的免疫原性和安全性.在Ⅲ期开放标记、有对照的多中心研究中,年龄12~14 月龄的健康幼儿被随机分成 4 组,在试验开始时接种 1 剂 MenACWY-TT 疫苗,此为 ACWY-1组;在开始时接种 1 剂 MenACWY-TT,然后在第 2 个月接种第 2 剂 MenACWY-TT,此为 ACWY-2 组;开始时接种 MenACWY-TT 和 PCV13 疫苗,此为 Co-ad组;在开始时接种 PCV13 疫苗,第 2 个月接种 Men-ACWY-TT,此为 PCV13 / ACWY 组. 每次接种后 1个月评估免疫应答. 分别记录每次接种后 4 ~ 31 d内的征询反应和症状,以及第一次接种直至 9 个月期间发生的不良反应事件(SAEs) 和新发慢性疾病状况.
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中国轮状病毒疫苗的人群效应研究
兰州羊源轮状病毒( LLR) 疫苗是中国自主研发的全球第 2 支轮状病毒疫苗,2000 年以来一直用于国内儿童轮状病毒感染性胃肠炎( RV-GE) 的预防.评估 LLR 疫苗覆盖率与儿童 RV-GE 发病的关系.采用现况和生态学研究,分析广州市 2007 年5 月 1 日至 2016 年 4 月 30 日期间可能免疫的人群(2 月龄至 3 岁)和非免疫对象人群(4 岁及以上)的相关数据,对 9 个流行季节的 RV-GE 病例的年发病年龄中位数及季节分布进行描述. 在控制了长期趋势、社会经济状态和气象因子(未滞后效应)等可能的混杂因素后,利用 Poisson 回归模型拟合 32452名 2 月龄~3 岁的儿童及 450 名非免疫对象的月发病情况. 利用 Logistic 回归模型根据不同的病例-对照研究数据组,评估了 2009—2011 年间已接种疫苗的儿童对 2 ~ 35 月龄未接种儿童的间接保护效应.
关键词: -
个性化癌症疫苗及其佐剂
个性化肿瘤(癌症)疫苗(personalized cancer vaccines,PCVs)包括新抗原癌症(肿瘤)疫苗(neoantigen cancer vaccines,NCVs)和肿瘤裂解物疫苗(tumor lysate vaccines,TLVs).NCVs以新表位为抗原.新表位是新抗原中可以激活肿瘤特异性T细胞的免疫活性肽.新抗原是根据肿瘤细胞全基因组测序数据确定的肿瘤细胞特有的突变蛋白.TLVs以肿瘤患者的肿瘤裂解物为抗原.PCVs能激活肿瘤特异性CD4+T细胞和CD8+T细胞,这些T细胞能在肿瘤患者体内抑制、杀伤肿瘤细胞,因而延长肿瘤患者的生存期.为了提高疫苗效力,PCVs必须和佐剂组成一定的剂型.可用于PCVs的佐剂有运载体、纳米颗粒、乳化剂、模式识别受体激动剂、免疫卡点抑制剂和能改变免疫抑制肿瘤微环境的制剂等.
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《微生物学免疫学进展》稿约
关键词:
年 | 期数 |
2019 | 01 |
2018 | 01 02 03 04 05 06 |
2017 | 01 02 03 04 05 06 |
2016 | 01 02 03 04 05 06 |
2015 | 01 02 03 04 05 06 |
2014 | 01 02 03 04 05 06 |
2013 | 01 02 03 04 05 06 |
2012 | 01 02 03 04 05 06 |
2011 | 01 02 03 04 |
2010 | 01 02 03 04 |
2009 | 01 02 03 04 |
2008 | 01 02 03 04 |
2007 | 01 02 03 04 |
2006 | 01 02 03 04 |
2005 | 01 02 03 04 |
2004 | 01 02 03 04 |
2003 | 01 02 03 04 |
2002 | 01 02 03 04 |
2001 | 01 02 03 04 |