遗传性耳聋家系的产前诊断及遗传咨询
摘要： 目的 对有明确耳聋致病基因的常染色体隐性耳聋家庭再次生育时行产前诊断,并给予相应的临床咨询,降低生育风险.方法 在知情同意的原则下,通过超声引导下行介入性穿刺,对获取的胎儿标本DNA应用STR位点检测以排除母体基因组的污染,并采用Taqman探针法结合Sanger测序进行相关耳聋基因检测.结果 对59个家系胎儿进行相关基因(GJB2、SLC26A4)检测,16个家系的胎儿为与先证者一致的患儿,25个家系的胎儿为携带父母一方致病突变的携带者,18个家系的胎儿为无致病突变携带的正常胎儿.出生后听力评估、基因诊断结果与产前诊断结果相符.结论 本研究中GJB2基因常见的致病突变为c.235delC,其次为c.299-300delAT.SLC26A4基因常见致病突变为IVS7-2A＞G,其次为c.2168A＞G(p.H723R).应用一代测序技术进行耳聋基因产前诊断,能准确诊断胎儿耳聋基因型,有效降低遗传性耳聋患儿的出生率.
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孕早期淋巴水囊瘤胎儿的绒毛染色体及微阵列结果分析
目的 分析孕早期超声发现的单纯性淋巴水囊瘤胎儿的绒毛染色体及微阵列结果,为遗传咨询提供依据.方法 纳入孕14周前超声诊断为单纯性淋巴水囊瘤并行绒毛穿刺产前诊断的单胎妊娠胎儿.回顾性分析其染色体及微阵列结果.结果 29例胎儿中,共有21例(72％)胎儿染色体异常,其中18例为染色体非整倍体异常,1例为环状染色体,1例为染色体易位,1例为染色体部分重复.微阵列结果中,共有22例(76％)异常.结论 早孕期超声诊断为单纯性淋巴水囊瘤胎儿染色体异常率较高,array-CGH检查有助于明确染色体异常中的具体片段及可能包含的致病基因.染色体核型分析仍是单纯性淋巴水囊瘤胎儿查找病因的重要方式.
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FOG2基因在圆锥动脉干发育畸形患者中的外显子突变和拷贝数量变化的研究
目的：了解 FOG2（Friend of GATA4）基因外显子突变在中国圆锥动脉干发育畸形（CTD）病人中情况和比例，以及在 TOF 病人中，检测是否存在 FOG2基因的拷贝数量变化。方法在南京市儿童医院收集从2004年1月到2006年1月的199例 CTD 病人的血样，包括145例法洛四联症（TOF），37例右心室双出口（DORV），17例大动脉错位（TGA）。100例健康患者作为对照组，利用一代测序检测FOG2基因的外显子突变，利用多重连接探针扩增（MLPA）检测 FOG2基因的拷贝数量变化。结果在6个 CTD 病人发现了4种错义突变，分别在2个 DORV 病人中发现了 p．V339I、p．A426T 3个 TOF 病人中发现了 p．M703L，在1个 TOF 病人中发现了 p．T843。总比例为3．0％。所有的这些突变都并没有在100个正常人中发现。MLPA 检测没有发现在 TOF 病人中存在着拷贝数量变化。结论 FOG2基因的外显子突变在中国 CTD 病人中是相对比较常见的，而 FOG2基因的拷贝数量变化不是引起 CTD的原因。但依然需要更大样本的研究来提高我们对 FOG2基因在 CTD 中的作用的认识。
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应用反向点杂交技术产前诊断β-地中海贫血
目的 探讨应用反向点杂交技术(RDB)产前诊断β地中海贫血的实用性.方法 对375例有β地中海贫血产前诊断指征的孕妇用RDB方法进行产前诊断;若夫妇一方携带的为少见β地中海贫血突变,则应用DNA 测序方法.结果 375例孕妇中有373(99.5%)例可以应用RDB作出产前诊断,仅2例需要DNA 测序完成;377例胎儿中诊断出正常103(27.3%)例,轻型β地中海贫血170(45.1%)例,重型104 (27.6%)例.结论 RDB是产前诊断β地中海贫血较为适用的方法,能应用于绝大多数产前诊断病例中.
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利用甲基化CpG结合域富集甲基化DNA
目的 利用甲基化CpG 结合蛋白(MBD)与甲基化CpG 岛特异性结合并相互作用的特性,建立一种高效、简便富集甲基化DNA 序列的方法.方法 首先应用PCR 扩增获得MeCP2基因的MBD编码序列,在大肠杆菌中诱导表达重组的GST MBD,采用GlutathioneSepharose4B (GSH Beads)获得了高纯度的GST MBD.并在不同盐浓度缓冲液体系中加入一定量用甲基化酶M.SssI处理过的DNA片段.结果 不同NaCl盐浓度和pH 值可以影响甲基化程度不同的DNA 结合量,佳结合条件是400～500mM NaCl,pH7.9.结合的甲基化DNA 可以用高盐浓度(1M)进行有效洗脱.结论 该方法能够充分区分甲基化与非甲基化DNA,可以用于无创性产前诊断.
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934例绒毛染色体核型分析
目的 探讨绒毛取样产前诊断的有效性和安全性.方法 B超定位经腹绒毛取材法,采用绒毛细胞短期培养法,制备染色体,G显带进染色体核型分析.结果 934例绒毛标本中,其中85例为流产胚胎,培养成功率为99.46％.849例绒毛活检术中,异常核型75例,异常率为8.83％.其中多倍体8例,12-三体2例,13-三体2例,16-三体10例,18-三体10例,21-三体7例,22-三体2例,标记染色体2例,性染色异常9例,分别是1例47,XXY和8例45,X0.嵌合体3例,结构异常6例,染色体多态性14例,涉及的染色体有16、15、13.85例胚胎终止发育后,清宫术绒毛取材,进行胎儿染色体核型分析,检测出27例染色体异常核型,检出率为31.76％.结论 绒毛染色体核型分析是孕早期产前诊断和胚胎停止发育原因分析常用的方法,是早期、快速、有效、安全的产前诊断方法.将绒毛染色体分析技术广泛应用于临床产前诊断,有效避免染色体异常儿的出生,对提高我国人口素质有重要的意义.
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正常双胎和单胎妊娠孕中期母血清的总游离β-人绒毛膜促性腺激素、α-甲胎蛋白和游离雌三醇水平
目的 研究昆明地区单胎妊娠和双胎妊娠母体血清中总游离β-人绒毛膜促性腺激素(total free-βHCG),甲胎蛋白(AFP)和游离雌三醇(uE3)水平的差异.方法 对62名正常双胎妊娠和同期2009名单胎妊娠妇女,在怀孕15～21孕周,用贝克曼Access化学发光系统检测孕妇血清总游离β-HCG、AFP和UE3的水平.在相同孕周下比较单胎和双胎的标志物的水平.方法研究表明,单胎孕妇血清总游离β-HCG、AFP和UE3水平与双胎之间有明显差异.母血清中总游离β-HCG、AFP和UE3水平与孕期体重在单胎妊娠中具有显著相关性(P<0.05).但在双胎妊娠中,两者之间没有显著相关性.结论不同孕周母血清总游离-βHCG、AFP和uE 3水平在正常双胎妊娠中的水平并非单胎妊娠的2倍.用单胎风险计算软件来筛查双胎可能是不合理的.
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在农村基层医院开展产前超声检查的临床意义及体会(附237例报告)
目的 探讨在农村基层医院开展产前超声检查的意义并介绍体会.方法 2013年1月至2014年12月间,利用超声对13 295例孕龄在14～38周孕妇进行系统检查,对每例超声检出的胎儿畸形及其他异常进行跟踪随访,并与引产、分娩、病理解剖、上级医院超声、MR诊断等结果对比、分析.结果 13 295例初检孕妇中,共检出237例异常胎儿,检出率1.78％;漏诊6例,漏诊率2.47％(6/243);4例误诊,诊断符合率98.3％(233/237).结论 随着我国“单独二孩”政策的实施后面临的生育高峰,在农村基层医院开展超声产前系统检查,不仅具有很高的临床价值,而且对于降低本地区不良出生率、提高人口质量、减低家庭和社会经济负担、消除因不良出生儿童所带来的精神压力均具有积极的社会效益.农村基层医院开展系统产前超声检查的关键是要培养专业超声人才,技术难点是胎儿心脏畸形的诊断.
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超声引导羊膜腔穿刺产前基因诊断脊髓性肌萎缩症
目的 采用超声引导羊膜腔穿刺抽取羊水产前基因诊断脊髓性肌萎缩症(SMA ).方法 对21 例孕17 ～20 周,均有生产过一胎以上经临床病史,基因诊断确诊为脊髓性肌萎缩症患儿的孕妇,经系统超声检查排除明显的胎儿结构异常,在超声引导下用一次性20G 或22G 的PTCD 针行羊膜腔穿刺术,抽取澄清的羊水40ml,进行DNA 系列测定,运用限制性片段长度多态性(RFLP )技术检测羊水DNA 中运动神经元生存1 基因(SMN1 )是否有缺失,并用短串联重复系列连锁分析(STR 连锁分析)排除母血的污染、检测是否为基因携带者.结果 21 例羊膜腔穿刺均一次穿刺成功,术后无一例出现羊膜破裂、自然流产、感染、羊水栓塞、胎儿损伤等并发症.21 例中均排除母血的污染,其中6 例提示SMN1 基因缺失,行人工流产术;15 例提示SMN1 基因未见缺失,其中3 例为SMA 基因携带者,另12例为完全正常个体,15 例足月产后随访至出生后情况良好,引产及出生后的胎儿均经再次基因分析,结果 与产前诊断完全一致.结论 超声引导行羊膜腔穿刺抽取羊水是产前基因诊断脊髓性肌萎缩症获取标本的安全有效途径,联合运用限制性片段长度多态性(RFLP )技术、短串联重复系列连锁分析(STR连锁分析)法检测不但可产前基因诊断SMA,还可排除母血的污染,且可产前诊断是否为SMA 基因携带者,进一步完善了SMA 产前诊断体系.
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应用高分辨熔解曲线分析方法检测β-地中海贫血纯合突变
目的 探讨高分辨熔解曲线分析方法(HRM)检测β-地中海贫血纯合突变的有效性.方法 应用HRM方法对中国常见的4种β-地中海贫血(4个IVS-Ⅱ-654即HBB:c.316-197C>T,3个Codons 41/42即HBB.c.126-129 delCTTT,1个Codon 17即HBB.c.52A>T和4个-28即HBB:C.-78A>G)纯合突变进行检测,通过直接检测和与野生型标本混合后再检测2种方法检测.结果 HRM方法可以检测出中国常见的4种β-地中海贫血纯合突变.结论 HRM方法可以对ep国常见的4种β-地中海贫血纯合突变进行检测,在产前诊断上有很好的应用前景.
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超声和磁共振成像在胎儿蛛网膜囊肿中的对比分析
目的 前瞻性地探讨和比较超声(US)和磁共振成像(MRI)在胎儿蛛网膜囊肿产前诊断中的应用价值.方法 对17例产前超声检查怀疑单纯性蛛网膜囊肿的胎儿中枢神经系统(CNS)进行US和MRI检查,16例胎儿随访至生后1年或引产病检证实,失访1例;将16例胎儿两种检查的结果与随访结果进行对比分析.结果 在产前CNS超声检查怀疑蛛网膜囊肿的16例胎儿中,MRI诊断胎儿正常5例,胎儿均足月生产无特殊;MRI明确诊断胎儿蛛网膜囊肿10例,修正诊断1例,均行引产且胎儿尸检结果均证实异常.在胎儿蛛网膜囊肿检查中:超声诊断正确率62.5％,错误率37.5％;磁共振成像检查与终结果均符合,诊断正确率100％.结论 超声是产前胎儿中枢神经系统检查的首选,但诊断效力有限,MRI是重要的补充;当超声检查怀疑胎儿蛛网膜囊肿时,需进行MRI检查进一步确诊或修正诊断.
