含人 LINGO -1慢病毒干扰载体的构建与鉴定
摘要: 目的:体外构建含人 LINGO -1慢病毒干扰载体,并测定其对靶基因 LINGO -1的干扰效应。方法2015年3—11月,根据 GenBank 数据库中报道的人 LINGO -1基因序列,设计合成针对人 LINGO -1短发夹 RNA (LINGO -1 shRNA)干扰序列,并将其克隆至重组质粒载体,测序验证后在293T 细胞内包装慢病毒并测定病毒滴度。将慢病毒载体分为目标基因干扰载体组(实验组)和错配序列干扰载体组(对照组),并转染至人胶质细胞瘤细胞U251,荧光显微镜下观察其感染效率,并采用免疫荧光染色、实时荧光定量聚合酶链式反应(qPCR)法检测 LINGO-1 mRNA 表达水平,采用 Western blotting 法检测 LINGO -1 表达水平。结果成功构建两组慢病毒干扰载体,经过包装分别得到滴度为2×108 TU/ ml 和4×108 TU/ ml 的病毒原液。病毒载体感染人胶质细胞瘤细胞 U251后,实验组和对照组载体转染效率分别为96.6%、95.2%。免疫荧光染色显示,人胶质细胞瘤细胞 U251高表达 LINGO -1,经慢病毒载体转染后,实验组免疫荧光呈现减弱现象。实验组 LINGO -1 mRNA 表达水平(0.09±0.01)较对照组的(1.00±0.00)降低(t =12.87,P ﹤0.01),实验组 LINGO -1 mRNA 相对表达抑制率为91.0%。实验组 LINGO -1 表达水平(0.28±0.02)较对照组的(1.00±0.00)降低(t =-8.13,P ﹤0.01)。结论本研究成功构建了含人 LINGO -1 shRNA 干扰载体,并证实了干扰载体对靶基因有较好的干扰效果,为研究 LINGO -1 在轴突再生中的作用奠定了基础。
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英国社区卫生服务考察札记
[编者按] 近期,以卫生部副部长彭玉为组长的社区卫生服务考察组对英国布里思特市蒙特皮乐社区卫生中心、伦敦东区帕姆社区医学中心等医疗机构进行了访问、考查.鉴于国内社区卫生服务正处于起步阶段,这里将考察的一些重要内容介绍给读者,以开拓视野和思路,汲取、借鉴其有益经验.
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思考病例(7)请你做一次全科医生
患者,男,26岁,农民.以情绪低落,全身不适7月余就诊.7月前患者常因小事与妻子吵架,多次说想弄死妻子,自己也去死,经劝解方安静.渐表现话少疲乏无力,头昏头闷.否认有精神疾病.在当地医院就诊,给口服奋乃静和多虑平,疗效不佳,入院前2周停服,开始口服"安神补心丸".目前进食差,体重下降6公斤.以"抑郁状态"收住院.
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纵隔脂肪肉瘤病例分析
患者,男,33岁,一个月前胸闷、发热、咳嗽,胸片及胸部CT检查有上纵隔实质性占位,当地医院疑为良性肿瘤,按上呼吸道感染治疗,症状渐加重,3天前再次复查CT发现前上纵隔肿物明显增大,经治疗后出现气短、心慌,不能平卧,急转我院.查体:气管向右侧移位,左胸语颤减弱,并叩浊音,呼吸音减弱,左下肺呼吸音消失.
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李延芳针刺治疗小儿先天性斜颈经验
李延芳主任医师行医近40年,临床经验丰富,针刺每起沉疴.尤其对小儿先天性斜颈,臂丛神经麻痹及腓神经损伤等病的治疗,有独到之处.作者有幸随师学习,仅将吾师治疗小儿先天性斜颈经验整理如下.
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筛前神经封闭治疗鼻睫状神经痛疗效观察
我院自1988~1998年间,采用筛前神经封闭治疗鼻睫状神经痛40例,效果良好,现报道如下.
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ICA、GAD-Ab检测在2型糖尿病中的临床意义
部分2型糖尿病病人胰岛分泌功能以不同速度进行性减低并终发展为胰岛素依赖型糖尿病.为了及早发现这部分病人并预防及延缓其进展为胰岛素依赖型糖尿病,我们对186例2型糖尿病患者及40例正常人进行了ICA、GAD-Ab检测.现报道如下.
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脑梗死与肾病综合征(附3例报告)
肾病综合征的卒中患者报道极少,现就我院收治的3例报告如下.
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原发性左心室恶性神经鞘瘤1例
患者,男,31岁,因"阵发性心悸气短18个月,昏厥2次",于1994年2月收住我科.体格检查:血压14.0/10.0kPa,双肺呼吸音清,无罗音;心率90次/分,节律整齐,心前区无震颤及杂音.
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对侧疼痛尿石症6例报告
尿石症致对侧疼痛临床少见,文献鲜有报道.我院于1990年6月以来共收治表现为对侧疼痛的尿石症6例,报告如下.
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高锰酸钾热水足浴为主治疗早期糖尿病足的临床观察
糖尿病足是糖尿病的一种严重并发症.作者采用高锰酸钾热水足浴为主的治疗方法,对社区31例老年糖尿病足病患者进行治疗,取得较好疗效.