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蓬子菜总黄酮对人脐静脉内皮细胞氧化损伤的保护作用及其机制

董均明；马英丽；张紫阳；李瑞；朱玉良；马玲

关键词：黄酮类内皮细胞过氧化氢信号传导

摘要： 目的探讨蓬子菜总黄酮(FGVL)对过氧化氢所致人脐静脉内皮细胞氧化损伤的作用及其机制.方法将人脐静脉内皮细胞分为5组,包括对照组(加入1640完全培养基)、损伤组(加入100 μmol/L过氧化氢培养4h)、FGVL 1组(12.5 mg/L FGVL培养24 h后,加入100 μmol/L过氧化氢培养4h)、FGVL 2组(25.0 mg/L FGVL培养24 h后,加入100 μmol/L过氧化氢培养4h)和FGVL 3组(50.0 mg/L FGVL培养24 h后,加入100 μmol/L过氧化氢培养4h).采用硝酸还原酶法检测细胞上清液中的一氧化氮含量,ELISA检测细胞上清液中的6-酮-前列腺素1α(6-keto-PGF1α)、血栓烷素B2(TXB2)、白细胞介素-6和白细胞介素-22的分泌水平,RT-PCR检测细胞中磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)、蛋白激酶B(Akt)及内皮型一氧化氮合酶(eNOS)的mRNA表达水平,Western bolt检测磷酸化Akt(ser473)和磷酸化eNOS(ser1177)的蛋白表达水平,并观察细胞凋亡情况.结果 (1)损伤组细胞上清液中的一氧化氮含量为(34.11±1.78) μmol/L,低于对照组的(74.81±2.93) μmol/L(P ＜0.05);FGVL 2组和FGVL 3组细胞上清液中的一氧化氮含量分别为(41.86 ±2.32) μmol/L和(62.79±1.16) μmol/L,均高于损伤组(P均＜0.05).(2)损伤组细胞上清液中的6-keto-PGF1α含量为(44.84±3.87) ng/L,低于对照组的(82.38±3.98)ng/L(P ＜0.05);FGVL 1组、FGVL 2组和FGVL3组细胞上清液中的6-keto-PGF1α含量分别为(52.76±1.78) ng/L、(56.58 ±1.44) ng/L和(67.78 ±2.02) ng/L,均高于损伤组(P均＜0.05).损伤组细胞上清液中的TXB2含量为(43.37±3.96) ng/L,高于对照组的(25.56±1.75) ng/L(P ＜0.05);FGVL 2组和FGVL 3组细胞上清液中的TXB2含量分别为(32.41 ±1.68) ng/L和(28.23±2.15) ng/L,均低于损伤组(P均＜0.05).(3)损伤组细胞上清液中的白细胞介素-6和白细胞介素-22的含量分别为(539.74± 11.63) ng/L和(43.60 ±2.44) ng/L,均高于对照组[白细胞介素-6含量为(288.67±19.52) ng/L,白细胞介素-22含量为(23.70±3.05) ng/L,P均＜0.05];FGVL 1组、FGVL 2组和FGVL 3组细胞上清液中的白细胞介素-6含量分别为(502.11 ±6.18) ng/L、(457.33 ±14.30) ng/L和(361.02±11.67) ng/L,均低于损伤组(P均＜0.05);FGVL 2组和FGVL 3组细胞上清液中的白细胞介素-22含量分别为(38.23±1.97) ng/L和(21.89±3.59) ng/L,均低于损伤组(P均＜0.05).(4)损伤组细胞中的PI3K和eNOSmRNA相对表达水平分别为0.68±0.09和0.22 ±0.03,均低于对照组(PI3K mRNA为0.81±0.12,eNOS mRNA为0.63 ±0.11,P均＜0.05);FGVL 2组和FGVL 3组细胞中的PI3K mRNA相对表达水平分别为0.76±0.03和0.83 ±0.06,均高于损伤组(P均＜0.05);FGVL 1组、FGVL2组和FGVL3组细胞中的eNOS mRNA相对表达水平分别为0.37±0.08、0.53±0.04和0.56±0.09,均高于损伤组(P均＜0.05).各组细胞中的Akt mRNA相对表达水平差异无统计学意义(P＞0.05).(5)损伤组细胞中的磷酸化Akt(ser473)和磷酸化eNOS(ser1177)蛋白相对表达量分别为0.48 ±0.05和0.23±0.03,均低于对照组[磷酸化Akt(ser473)为0.71 ±0.12,磷酸化eNOS(ser1177)为0.66±0.05,P均＜0.05];FGVL 1组、FGVL 2组和FGVL 3组细胞中的磷酸化Akt(ser473)蛋白相对表达量分别为0.54±0.04、0.69±0.07和0.73±0.09,均高于损伤组(P均＜0.05);FGVL1组、FGVL2组和FGVL3组细胞中的磷酸化eNOS(ser1177)蛋白相对表达量分别为0.53 ±0.05、0.71 ±0.10和0.65 ±0.07,均高于损伤组(P均＜0.05).(6)损伤组的细胞凋亡率为(63.67±11.37)％,高于对照组的(4.67±1.15)％ (P＜0.05);FGVL 1组、FGVL 2组和FGVL 3组的细胞凋亡率分别为(43.33±4.16)％、(18.33±4.93)％和(15.67 ±2.08)％,均低于损伤组(P均＜0.05).结论 FGVL可减轻过氧化氢对人脐静脉内皮细胞的氧化损伤,其机制与激活PI3K/Akt/eNOS通路,从而增加一氧化氮分泌有关.

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