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微小RNA-181减轻氧化低密度脂蛋白诱导的血管内皮细胞损伤的作用及机制

王宁宁；孙晓；张晓璐；娄琳；陈凯明；李卉；唐亮；王文刚；张曼

关键词：内皮细胞炎症 NF-κB

摘要： 目的观察微小RNA-181和输入蛋白α3在氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的血管内皮细胞损伤模型中的表达水平,并探讨微小RNA-181对血管内皮细胞损伤的作用及机制.方法培养人静脉血管内皮细胞株CRL-1730,并通过加入ox-LDL构建血管内皮细胞损伤模型.将细胞分为对照组(加入双蒸水)、低剂量组(加入10 μg/ml ox-LDL)和高剂量组(加入20 μg/ml ox-LDL),分别检测各组细胞活性及白细胞介素-6(IL-6)、微小RNA-181、输入蛋白α3和核转录因子-κB (NF-κB)的mRNA和蛋白表达水平.另外,将低剂量组细胞进一步分为微小RNA-181模拟物组(转染微小RNA-181模拟物)和模拟物对照组(转染微小RNA-181模拟物对照),观察微小RNA-181过表达对ox-LDL诱导血管内皮细胞损伤模型中细胞活性及微小RNA-181、输入蛋白α3和NF-κB的mRNA和蛋白表达水平的影响.采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测各组细胞活性;分别采用实时荧光定量PCR和Western blot检测各组细胞中IL-6、微小RNA-181、输入蛋白α3和NF-κB的mRNA和蛋白表达水平.结果 (1)低剂量组和高剂量组的细胞活性分别为0.207±0.012和0.204±0.007,均低于对照组的0.323±0.018(P均＜0.01).低剂量组和高剂量组IL-6的mRNA相对表达水平分别为1.24±0.16和1.36±0.23,均高于对照组的0.22 ±0.03(P均＜0.01).低剂量组和高剂量组微小RNA-181的mRNA相对表达水平分别为0.91±0.11和0.88±0.07,均低于对照组的2.20±0.13(P均＜0.01).低剂量组和高剂量组输入蛋白α3的mRNA相对表达水平分别是1.23 ±0.22和1.67±0.34,均高于对照组的0.44±0.06(P均＜0.01).低剂量组和高剂量组NF-κB的mRNA相对表达水平分别是0.55±0.03和0.41 ±0.11,均高于对照组的0.11 ±0.04(P均＜0.01).低剂量组和高剂量组输入蛋白α3的蛋白相对表达水平分别是1.44±0.23与1.31±0.22,均高于对照组的0.29±0.08(P均＜0.01).低剂量组和高剂量组NF-κB的蛋白相对表达水平分别是0.43±0.05与0.37±0.04,均高于对照组的0.16 ±0.03(P均＜0.01).(2)微小RNA-181模拟物组的细胞活性为0.262±0.008,高于模拟物对照组的0.211±0.021(P＜0.01).微小RNA-181模拟物组微小RNA-181的mRNA相对表达水平为4.23±0.34,高于模拟物对照组的0.88 ±0.16(P ＜0.01).微小RNA-181模拟物组输入蛋白α3的mRNA相对表达水平为0.24±0.03,低于模拟物对照组细胞的1.08±0.13(P＜0.01).微小RNA-181模拟物组细胞NF-κB的mRNA相对表达水平为0.13 ±0.03,低于模拟物对照组的0.51 ±0.06(P ＜0.01).微小RNA-181模拟物组输入蛋白α3的蛋白相对表达水平为0.34±0.06,低于模拟物对照组细胞的1.67 ±0.26(P ＜0.01).微小RNA-181模拟物组NF-κB的蛋白相对表达水平为0.43±0.02,低于模拟物对照组的1.53±0.36(P ＜0.01).结论在ox-LDL诱导的血管内皮细胞损伤模型中,微小RNA-181呈低水平表达,输入蛋白α3及其下游的NF-κB呈高水平表达.上调微小RNA-181可通过输入蛋白α3/NF-κB途径减轻血管内皮细胞损伤.

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