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检测白喉毒素特异性细胞毒性的Vero细胞/MTT法的建立

邓杰;张珂;袁涛;张雪梅

摘要: 目的 建立检测白喉毒素(diphtheria toxin,DT)特异性细胞毒性的Vero细胞/MTT法.方法 用MEM培养液对DT进行不同倍数的预稀释,用目测法确定DT的适预稀释倍数.用建立的方法检测以适预稀释倍数稀释的DT,以确定该法的灵敏度和细胞病变半数抑制浓度(IC50),同时绘制剂量-反应曲线以验证该法的重复性.用建立的方法于不同pH、盐浓度或蔗糖浓度条件下检测DT,计算DT回收率以验证该法的耐用性.结果 目测法确定的DT适预稀释倍数为106倍.建立的方法的平均检测灵敏度为(6.01±1.44)×10-5 lf/ml DT,细胞病变半数抑制率对数值(log IC50)范围为5.02 ~ 5.82,变异系数为5.82%,该法具有较好的重复性.用建立的方法检测不同条件下的DT显示,DT的平均回收率为93.7% ~ 110.4%,该法具有较好的耐用性.结论 Vero细胞/MTr法可用于检测DT特异性细胞毒性.

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