新型表达骨形态发生蛋白2腺病毒真核细胞载体的构建和鉴定
摘要： 目的 构建同时表达具有抗原表位FLAG标记的骨形态发生蛋白2(BMP2)目的蛋白和报告分子绿色荧光蛋白(GFP)的新型腺病毒真核细胞表达载体.方法将去除翻译终止密码子并添加新的酶切识别位点Xho Ⅰ的BMP2基因定向连入腺病毒穿梭质粒pShuttle CMV-IRES-hrGFP-1.携带BMP2+基因的重组腺病毒穿梭质粒经酶切鉴定、Pme Ⅰ酶切线性化后转化BJ5183-AD-1大肠杆菌,利用细菌内同源重组机制将BMP2+和GFP基因连同其顺势表达元件重组入腺病毒基因组质粒.用Pac Ⅰ酶切去除其质粒成分,暴露腺病毒基因组的反向末端重复序列,转染293细胞,进行腺病毒的包装,完成新型腺病毒载体Ad CMV-BMP2+-IRES-GFP-1的构建.作为阳性对照,同时制备多年来广为应用的BMP2腺病毒表达载体Ad CMV-BMP2.以两种载体感染骨髓基质细胞,通过RT-PCR和荧光显微镜分别检测骨形态发生蛋白2和绿色荧光蛋白表达情况;通过碱性磷酸酶活性检测判断BMP2诱导成骨分化作用.结果突变后骨形态发生蛋白2基因序列、重组腺病毒穿梭质粒和重组腺病毒质粒酶切图谱符合预定设计.感染骨髓基质细胞后,新型腺病毒载体可同时表达报告分子GFP和具有诱导成骨分化活性的BMP2.结论成功构建表达BMP2的新型腺病毒载体.
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异位妊娠的超声诊断与手术对比分析
异位妊娠发生率较高,是多发病之一,由于超声的广泛普及,异位妊娠的诊断率也逐步提高.现将我院收治的异位妊娠的超声诊断与手术进行对比分析,报告如下.
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阴囊纵隔皮瓣一期修复尿道下裂体会
2000年11月至2004年7月,我院开展了应用以尿道外口为蒂的阴囊纵隔皮瓣一期治疗尿道下裂患者,疗效满意,报告如下.
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产科多器官功能衰竭20例临床分析
多器官功能衰竭(multipe organ failure,MOF)是指机体损害24h后,两个或两个以上的器官以连锁或累加的形式,相继发生功能衰竭,其病理生理至今不清.产科多器官功能衰竭常见诱因是轻、重度子痫前期,产后出血、DIC、胎盘早剥和感染,是孕产妇死亡的重要原因.
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非体外循环冠状动脉旁路移植术28例临床分析
非体外循环冠状动脉旁路移植术(OPCAB)在微创冠心病手术中占有重要地位,我院自2002年1月～2005年9月共完成28例,分析如下.
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经纤支镜镜下给药治疗耐多药肺结核病的疗效观察
耐多药肺结核病的内科临床治疗效果一直不能令人满意,本院于2001～2004年在全身抗结核治疗辅助纤维支气管镜下给药治疗耐多药结核病人取得了较好的效果.现报告如下.
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上颌多数埋伏牙的矫治
临床上常见因牙未萌前来就诊的病人,但多数牙埋伏相对少见,通过正畸方法矫治此类错牙合畸形,达到满意效果.1 临床资料1.1 病例上颌两颗或两颗以上埋伏牙共3例,其中男1例,女2例,年龄11～13岁.
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肾综合征出血热患者心电图及心肌酶谱分析
肾综合征出血热(hemorrhagic fever with renal syndrome,HFRS)是汉坦病毒引起的以鼠类为主要传染源的自然疫源性疾病.临床以发热、低血压休克、出血、肾脏功能损害为主要特征,心脏也常常受累.回顾了我院近年来收治的肾综合征出血热患者的心电图及心肌酶谱的改变,报告如下.
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溶栓抗凝治疗对下肢深静脉血栓的影响
下肢深静脉血栓形成是一种比较常见的疾病,主要表现为患肢的肿胀,疼痛和压痛,浅静脉扩张,严重者可引起下肢动脉的痉挛,导致肢体缺血甚至坏死.随着人口老龄化和生活条件、医疗条件的改善,我国深静脉血栓形成的发生率明显增多.为评价溶栓、抗凝治疗对下肢深静脉血栓的疗效,以便进一步系统开展此疗法,本文对我科近3年来住院的20例下肢深静脉血栓的病人资料加以总结,以获得更多的临床经验.
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急性出血坏死性胰腺炎并发症的防治体会
急性出血坏死性胰腺炎(简称ANP)系高危急腹症,病情危重,并发症多,病程长,病死率高达30%～50%.严重的并发症是致死的主要原因,因而防治并发症是提高ANP治愈率、降低死亡率的关键,下面就我科8例ANP谈谈对其主要并发症防治体会.
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以反复发热2个月为主诉的白塞氏病1例
1临床病例患者,女性,36岁.因反复发热2个月,而于1999年4月13日入院.患者于1999年2月份开始发热,体温波动在37.8～39.4 ℃之间.伴有右上腹不适,偶有呕吐,为胃内容物.经用青霉素及糖皮质激素后症状一度有所缓解.B超示胆囊多发息肉,按胆系感染治疗,效果不佳.
