损毁单侧黑质-纹状体通路的大鼠SVZ、纹状体和黑质神经前体细胞的变化
摘要： 研究成年大鼠脑室下区(SVZ)神经前体细胞(neural precursors)在黑质-纹状体通路损伤后的反应,本研究用6-羟多巴胺单侧纹状体注射以损毁黑质-纹状体通路,损毁10 d后腹腔注射BrdU,连续4 d,每日两次;在SVZ、纹状体和黑质部位用免疫组化方法检测BrdU、nestin以及GFAP阳性细胞.结果显示:(1) 6-羟多巴胺损毁黑质-纹状体通路后,伤侧SVZ的BrdU阳性细胞数明显增多,并成簇分布nestin和GFAP阳性细胞数也增多,但以GFAP阳性细胞增多明显;(2)伤侧纹状体可见大量Br-dU、GFAP以及少量nestin阳性细胞分布,而健侧只有少量GFAP阳性细胞;(3)伤侧可见BrdU阳性细胞在SVZ和纹状体之间呈条带样分布;(4)伤侧黑质除酪氨酸羟化酶阳性神经元减少外,未见BrdU、GFAP和nestin阳性细胞表达.上述结果表明,6-羟多巴胺损毁黑质-纹状体通路后,SVZ神经前体细胞活动增强,有向纹状体迁移的趋势.
-
G-CSF对帕金森病小鼠运动能力和黑质纹状体神经元的影响
目的:探讨粒细胞集落刺激因子(G-CSF)对1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTTP)所致小鼠帕金森病(PD)模型中脑黑质致密部(SNpc)及纹状体(STR)多巴胺(DA)能神经元的影响.方法:正常健康雄性C57BL/6J小鼠随机分为对照组、MPTP组及MPTP+ G-CSF组,采用腹腔注射MPTP法制作小鼠PD模型,MPTP+G-CSF组于后一次MPTP注射后再腹腔注射G-CSF.爬杆实验观察小鼠的行为学改变;尼氏染色技术观察各组小鼠黑质致密部神经元数量及形态学变化;免疫组织化学法检测酪氨酸羟化酶(TH)在各组小鼠中脑黑质致密部及纹状体的表达;Western Blot法检测各组小鼠中脑TH蛋白的表达量.结果:与对照组相比,MPTP组小鼠较对照组爬杆用时显著延长(P＜0.05),尼氏染色显示黑质致密部神经元数量显著减少(P＜0.05),黑质致密部、纹状体TH表达量显著减少(P ＜0.05);MPTP+ G-CSF组较MPTP组爬杆用时显著缩短(P＜0.05),神经元丢失减少(P＜0.05),神经元形态较完整;与MPTP组比较,MPTP+ G-CSF组黑质致密部、纹状体TH表达水平显著增高(P＜0.05).结论:G-CSF能够改善PD小鼠运动功能,减少黑质致密部多巴胺能神经元丢失,增加TH表达水平.
-
创伤性脑损伤小鼠海马和皮层NONO表达变化
目的:探索创伤性脑损伤(TBI)后小鼠海马和皮层区不含POU结构的八聚体结合蛋白(NONO)表达变化.方法:重物打击法制作TBI小鼠模型,分为假手术组和TBI组,根据创伤后的时间TBI组又分为伤后6h、24h、3d和7d.Real time RT-PCR检测脑组织NONO mRNA表达,Westem Blot和免疫组化检测脑组织NONO蛋白表达.结果:NONO在小鼠大脑皮层和海马区有较强表达,TBI后海马区NONO表达水平显著降低.结论:NONO在皮层和海马区均有表达,但是TBI后只有海马区NONO表达发生显著变化,实验结果为进一步研究NONO在TBI中的作用机制提供了基础.
关键词： 创伤性脑损伤 不含POU结构的八聚体结合蛋白(NONO) 海马 皮层 小鼠 -
米诺环素对CCI大鼠抑郁样行为的影响及机制研究
目的:观察海马CA1区注射米诺环素对坐骨神经慢性缩窄性损伤(CCI)大鼠的抑郁样行为、海马和前额叶皮层小胶质细胞激活的影响并分析其机制.方法:成年SD雄性大鼠随机分为:对照组、假手术组、CCI模型组、CCI+米诺环素组.糖水偏好及旷场实验检测大鼠抑郁样行为;免疫组化观察海马以及前额叶皮层Iba-1表达;取海马以及前额叶皮层组织,real-time PCR观察Iba-1、NLRP3和caspase1 mRNA表达,ELISA测定IL-1β和IL-18含量.结果:与假手术组相比,CCI大鼠7、10 d和14 d的糖水偏好明显降低(P＜0.05),旷场中央活动距离和中央活动时间明显减少(P＜0.05);与CCI组相比,CA1区注射米诺环素后CCI大鼠7d和14 d的糖水偏好明显升高(P＜0.05),旷场中央活动距离和中央活动时间明显增加(P＜0.05).与假手术组相比,CCI组大鼠海马CA1、CA3及DG区和前额叶皮层Iba-1阳性细胞数目显著增多(P＜0.05),Iba-1、NLRP3和caspase1 mRNA表达明显上调;IL-1β和IL-18含量也明显升高(P＜0.05).与CCI组相比,注射米诺环素后,CCI大鼠海马CA1、CA3及DG区和前额叶皮层Iba-1阳性细胞数目减少(P＜0.05),Iba-1、NLRP3和caspase1 mRNA表达降低(P＜0.05),IL-1β和IL-18含量降低(P＜0.05).结论:海马CA1区注射米诺环素明显抑制CCI大鼠的抑郁样行为;其机制可能是抑制海马和前额叶皮层小胶质细胞激活,下调NLRP3和caspase1表达,从而使IL-1β和IL-18产生减少.
-
七氟醚处理对老龄小鼠脑内神经生长因子表达的影响
目的:探讨七氟醚对老年小鼠脑内神经生长因子(NGF)表达的影响.方法:老年C57小鼠吸入七氟醚建立全身麻醉动物模型,利用ELISA检测基底前脑、额叶、颞叶及顶叶NGF的含量,real time RT-PCR检测额叶、颞叶及顶叶NGF mRNA水平,Western Blot检测额叶皮层NGF合成代谢通路中相关蛋白纤溶酶、基质金属蛋白酶-9(MM P-9)、基质金属蛋白酶组织抑制因子-1(TIMP-1)、丝氨酸或半胱氨酸蛋白水解酶抑制蛋白1(neuroserpin)的表达量.结果:与对照组相比,七氟醚组小鼠基底前脑、额叶、颞叶及顶叶中NGF蛋白含量均显著降低(P＜0.05),但七氟醚组小鼠额叶、颞叶及顶叶中NGF mRNA水平无显著变化.进一步研究发现,七氟醚组小鼠额叶皮层NGF前体蛋白含量增加(P＜0.05),参与NGF翻译后加工的纤溶酶表达显著降低(P＜0.05),neuroserpin表达显著增加(P＜0.05),而参与NGF降解的MMP-9与TIMP-1含量无显著变化.结论:七氟醚可通过抑制NGF翻译后加工过程而降低老年小鼠脑内神经生长因子的含量.
-
丙烯酰胺染毒对大鼠坐骨神经MBP和MAG表达的影响
目的:通过检测染毒大鼠坐骨神经中髓鞘碱性蛋白(MBP)和髓磷脂相关糖蛋白(MAG)表达量的变化,探讨丙烯酰胺(ACR)对大鼠周围神经系统的毒性影响.方法:成年雄性SD大鼠32只,随机分为对照组、9、18、36 mg/kg ACR组,每组8只,灌胃染毒21 d后取材.每周一次步态评分,记录大鼠步态改变;利用HE染色和劳克坚牢蓝染色,观察坐骨神经及其髓鞘的改变;通过免疫组织化学方法检测蛋白MBP和MAG表达量的变化.结果:大鼠步态得分与染毒剂量和染毒时间呈正相关;HE染色显示随染毒剂量增大,坐骨神经神经纤维排列紊乱、髓鞘结构发生改变、轴突数目减少;劳克坚牢蓝染色结果显示与对照组相比,染毒组髓鞘染色较浅、着色不均,髓鞘变细;免疫组化结果显示,MBP和MAG在坐骨神经中的表达量均随染毒剂量增大而下降.结论:ACR染毒对大鼠坐骨神经髓鞘的毒性损伤,可能与MBP和MAG蛋白表达量的下降有关.
-
IL-33在脑缺血再灌注小鼠脑内的表达和细胞定位
目的:通过建立脑缺血再灌注小鼠模型,观察白细胞介素-33 (IL-33)阳性细胞在脑缺血再灌注小鼠大脑中的表达和定位情况,初步探讨IL-33在缺血性脑卒中中的作用.方法:采用线栓法制作右侧大脑中动脉阻塞(MCAO)建立脑缺血再灌注小鼠模型,利用TTC染色检测MCAO后脑梗死形成情况,采用免疫荧光组织化学染色法检测IL-33在脑缺血再灌注小鼠大脑中的表达.结果:成功建立脑缺血再灌注小鼠模型,脑缺血再灌注可引起小鼠大脑内IL-33表达升高;脑缺血再灌注小鼠模型脑内广泛表达IL-33.IL-33在神经元、星形胶质细胞、小胶质细胞内均有表达.结论:脑缺血再灌注小鼠脑内IL-33表达增加,IL-33可能参与小鼠缺氧缺血性脑损伤过程.
-
活性氧通过影响线粒体膜电位参与小鼠高血糖加重脑缺血性损伤
目的:探讨活性氧(ROS)参与高血糖加重脑缺血性损伤的可能机制.方法:采用链脲佐菌素(STZ)诱导联合大脑中动脉栓塞(MCAO)法建立小鼠高血糖脑缺血再灌注模型,于再灌注后5、24h收集脑组织,通过神经行为学评分、TTC染色评价高血糖对脑缺血性损伤的影响,用ROS荧光探针-二氢乙啶(DHE)、JC-1分析活性氧和线粒体膜电位(△ψ)的变化情况.结果:与正常血糖脑缺血组相比,高血糖脑缺血组神经行为学评分与脑梗塞体积明显增加,活性氧产量于再灌注5和24h明显增加,线粒体膜电位于再灌注24h明显去极化.结论:高血糖可加重脑缺血性损伤,且活性氧可能通过影响线粒体膜电位参与高血糖加重脑缺血性损伤.
-
NF-κB/nNOS信号通路在小鼠急性CO中毒迟发性脑病发生中的作用
目的:分析NF-κB/nNOS信号通路在急性CO中毒迟发性脑病(DEACMP)中的作用.方法:将昆明雄性小鼠随机分为空气组与CO中毒组,其中空气组和CO中毒组又分别分为1、3、7、14和21 d亚组.CO中毒组小鼠首次腹腔注射99.9％ CO气体100 ml/kg,随后3次按首次剂量的半量(50 ml/kg)作追加注射,间隔为4h,空气组以同样的方法注射等量空气,立即观察其精神状态和行为变化;并通过改良双波长碳氧血红蛋白(COHB)定量法动态监测小鼠血中COHB浓度;使用旷场实验和筑巢实验进行行为学监测;并用ELSIA法测定脑组织内髓鞘碱性蛋白(MBP)含量,筛选出DEACMP模型小鼠.用ELISA法分别检测脑组织中NF-κB和nNOS蛋白,用紫外分光光度计法测定脑组织中一氧化氮(NO)含量.结果:与空气组相比,CO中毒组旷场实验垂直站立次数和进入旷场中心次数均明显减少(P＜0.01),CO中毒组筑巢得分明显下降(P＜0.05),CO中毒组小鼠MBP、NF-κB、nNOS蛋白水平及NO含量于第3、7、14和21 d均明显增高(P＜0.01).结论:NF-κB/nNOS信号通路可能参与了DEACMP的发生和发展.
关键词： 急性CO中毒迟发性脑病 行为学 髓鞘碱性蛋白 NF-κB/nNOS信号通路 小鼠 -
小鼠脊髓背角神经元向臂旁核及丘脑中线/板内核群的分支投射
目的:观察脊髓背角P物质受体(substance P receptor,SPR)阳性神经元向臂旁核及中线/板内核群的分支投射并为其参与痒觉信息传递提供证据.方法:利用小动物脑立体定位仪向10只8周龄C57BL/6小鼠的臂旁核及丘脑中线/板内核群内分别注射四甲基罗达明(tetramethylrhodamine-dextran,TMR)及荧光金(fluoro-gold,FG),观察小鼠脊髓背角的TMR/FG双标神经元.结合免疫荧光组织化学染色方法观察双标神经元表达SPR和在急性痒模型下表达Fos的情况.结果:脊髓背角Ⅰ层、脊髓外侧核(lateral spinal nucleus,LSN)及脊髓背角Ⅳ～Ⅴ层均可观察到TMR/FG双标神经元,且部分双标神经元分别表达SPR及Fos蛋白.结论:脊髓背角存在同时向臂旁核及丘脑中线/板内核群发出分支投射的神经元,部分双标神经元表达SPR并参与痒觉信息的传递.
-
GnIH对卵巢摘除术后补充雌激素大鼠下丘脑POMC阳性神经元的影响
目的:探讨促性腺激素抑制激素(GnIH/RFRP-3)对卵巢摘除术补充雌激素(OEP)大鼠下丘脑阿片-促黑素细胞皮质素原(POMC)阳性神经元的影响.方法:65只成年雌性SD大鼠,随机选取2只用于免疫荧光多重染色,观察GnIH/RFRP-3与POMC在大鼠下丘脑神经元的表达;随机选取3只用于免疫共沉淀(Co-IP)实验,检测GnIH/RFRP-3与POMC的相互作用;余下60只建立卵巢摘除术补充雌激素(OEP)大鼠模型,模型组随机分成注射GnIH实验组和生理盐水对照组,每组30只,每组根据注射时间不同分为20、40、60、120、240、360min等共6个亚组,每组5只,采用Western Blot法检测GnIH/RFRP-3处理对下丘脑POMC表达的影响.结果:免疫荧光多重标记结果显示,GnIH/RFRP-3与POMC共表达于大鼠下丘脑神经元;Co-IP结果证明,GnIH/RFRP-3与POMC存在相互作用;Western Blot结果表明,注射GnIH/RFRP-3后20 min组大鼠下丘脑POMC蛋白表达量显著高于对照组(P＜0.05),注射60、120、240、360 min实验组大鼠POMC蛋白表达量明显低于对照组(P＜0.05).与20 min实验组相比,60、120、240 min组蛋白表达量依次呈下降趋势,360 min组蛋白表达量有升高趋势但是仍然低于20 min组(P＜0.05).结论:GnIH/RFRP-3可直接作用于POMC神经元.
