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孕妇外周血中胎儿有核红细胞在非损伤性产前诊断中的研究进展
随着生活水平及生活质量的提高,遗传咨询中要求做产前诊断者越来越多.目前,对遗传性疾病的产前诊断有数种方法.常规使用有:羊膜腔穿刺、绒毛细胞吸取术、胎儿脐带血穿刺等.这些方法诊断的准确性很高,但均属有创性操作,对孕妇和胎儿均有一定的风险,故主要用在怀疑孕育有染色体异常胎儿和高龄孕妇中.而无创操作就超声波而言,只能发现明显畸形且发现时间通常较晚,对孕妇及胎儿来说均是残酷的打击.而从孕妇外周血中获取胎儿细胞为非损伤性产前诊断开辟了一条颇具前景的道路,其中胎儿有核红细胞(NRBC)被公认为是可用于无创性产前诊断比较好的胎儿遗传物质来源.
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Keihuaer抗酸染色标记FNRBC结合多重置换扩增行产前基因诊断的初步研究
目的 探讨Keihuaer抗酸染色法标记孕妇外周血中胎儿有核红细胞(fetal nucleated red blood cell , FNRBC),并结合单细胞聚合酶链式反应(polymerase chain reaction, PCR)技术行产前性别相关基因诊断的可行性. 方法 采集12例孕周为10周～16周的孕妇外周血10ml,经Percoll不连续密度梯度离心初步分离后,运用Keihuaer抗酸染色法对FNRBC进行特殊染色标记,显微操作法获取阳性单个靶细胞,经过多重置换扩增,全基因组扩增产物作为PCR模板,行STS (steroid sufatase)基因同源序列PCR性别诊断,以验证靶细胞的胎源性.结果 12例孕妇外周血中FNRBC阳性标记11例,1例未获取FNRBC;对获取的4个FNRBC单细胞进行性别初步诊断,其中2例证实为男胎,2例为女胎,经证实均与临床诊断相符合,准确率为100%.结论用Keihuaer抗酸染色标记及显微操作法获取的FNRBC,经多重置换扩增后可用于无创性产前基因诊断,实验操作可行、诊断准确,具有重要临床应用价值.
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CD71和Hoechst33258用于孕妇外周血中胎儿有核红细胞的分选
目的比较CD71单染和CD71、Hoechst33258(HO258)双染对单个核细胞的标记情况,并用于对孕妇外周血中有棱红细胞(nucleated red blood cells ,NRBCs)的分选.方法选用红细胞特异性抗体CD71、核染料HO258对正常孕妇外周血、轻(或)中度妊娠高血压综合征(简称妊高症)患者外周血、初生要儿脐血单个核细胞进行标记,并结合流式细胞术对有核红细胞进行分选.结果用CD71和HO258进行双染色标记,正常孕妇、妊高症患者、脐血单个核细胞的阳性标记率明显低于CD71单染色标记(t检验,P＜0.01),并成功地用于流式细胞术分选出孕妇外周血中的NRBCs.结论采用CD71和HO258双染色标记,可以排除成熟红细胞、血小板、网织红细胞,提高NRBCs的特异性标记和分选纯度.
关键词： 胎儿有核红细胞 流式细胞术 CD71 Hoechst33258 -
HIF-1α、VEGF在妊娠期糖尿病胎盘组织中的表达及其与胎儿缺氧的关系
目的:探讨缺氧诱导因子-1α(HIF-1 α)和血管内皮生长因子(VEGF)在妊娠期糖尿病(GDM)胎盘中的表达及其与血糖控制效果和胎儿缺氧的关系.方法:选取GDM孕妇64例,其中血糖控制不良组(A组)22例,血糖控制良好组(B组)42例,同期分娩正常孕妇27例为对照组(C组).采用Giemsa染色法计数脐血中胎儿有核红细胞(FNRBC)；免疫组化SP法和RT-PCR技术测定HIF-1α和VEGF蛋白和mRNA在胎盘中表达；分析GDM组FNRBC水平与HIF-1α mRNA及VEGF mRNA表达的相关性.结果:①3组胎盘中均有HIF-1 α和VEGF蛋白的表达,A、B组胎盘中HIF-1α和VEGF蛋白的表达呈较强阳性和强阳性.②A、B、C组胎盘组织中HIF-1α和VEGF蛋白阳性表达率两两比较差异均有高度统计学意义(P＜0.01).③A、B、C组胎盘组织中HIF-1α及VEGF mRNA表达水平两两比较差异均有高度统计学意义(P＜0.01).④A、B、C组脐血FNRBC计数水平两两比较差异均有高度统计学意义(P＜0.01).⑤A、B组脐血FNRBC水平与胎盘组织中HIF-1 α、VEGF mRNA表达均呈正相关关系(P＜0.01)；A、B组胎盘组织中HIF-1α与VEGF mRNA表达亦呈正相关关系(P＜0.01).结论:GDM胎盘中HIF-1α和VEGF的高表达可能参与了GDM的发病过程,其表达水平与孕妇血糖控制效果有关,且能导致胎儿缺氧和不良后果.
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妊娠期糖尿病患者氧化应激和EPO、FNRBC水平变化与胎盘组织学改变的关系
目的:探讨妊娠期糖尿病(GDM)患者氧化应激状态与脐血促红细胞生成素(EPO)和胎儿有核红细胞(FNRBC)水平变化及其与胎盘组织形态学异常发生率的关系.方法:选取28例GDM患者(GDM组)和22例正常妊娠妇女(正常对照组),采集其母血和脐血及对应的胎盘标本,检测母血和脐血氧化应激标志物丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)浓度,脐血EPO浓度和FNRBC计数,同时对胎盘组织进行病理学检测.结果:GDM组患者母血和脐血中的MDA及脐血中EPO浓度和FNRBC计数明显高于正常对照组(P＜0.05),SOD浓度较正常对照组明显降低(P＜0.05).GDM组患者胎盘病理检查提示,与正常对照组相比:绒毛成熟不良、干绒毛小动脉增厚和绒毛间质毛细血管充盈明显的发生比例增加(P＜0.05),并且母血和脐血中的MDA浓度与胎盘绒毛成熟不良的发生比例呈正相关(P均＜0.05).结论:胎盘绒毛发育和成熟的复杂过程可能受母胎氧化应激与抗氧化环境的影响,胎盘病理组织学显示GDM时绒毛血管发育与成熟的异常可能导致胎儿缺氧和不良后果.
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运用流式细胞技术分析孕妇外周血中胎儿有核红细胞的比例与孕周的关系
目的:探讨母亲外周血中胎儿有核红细胞(NRBCs)的比例与孕周的关系.方法:对61名孕龄为11～34周、年龄为21～35岁的妇女的外周血中的胎儿细胞进行分离纯化,采用荧光激活细胞分离技术(FACS)分选表达转铁蛋白受体的阳性细胞(CD71+细胞).将孕妇组、未孕组及新生儿脐血组进行对照.结果:孕11～34周的孕妇外周血中CD71+细胞的比例为(0.35±0.25)×10-2,与未孕组及新生儿脐血组均有极显著性差异.CD71+细胞在外周血中的比例在孕17～18周达峰值,分别为(0.64±0.25)×10-2和(0.54±0.35)×10-2.结论:早、中、晚期孕妇外周血中存在胎儿有核红细胞.利用母血循环中的胎儿细胞进行产前诊断的佳时间应在妊娠17～18周.
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利用孕妇外周血作非侵入性产前检查的研究进展
近年来人们对利用孕妇外周血作非侵入性产前诊断(因其材料简便易获)的研究越来越多.非侵入性产前诊断可用于诊断常见的染色体疾病,检测胎儿性别,甚至诊断单基因遗传病等.对孕妇外周血的研究主要包括三方面的内容:血清生化指标测定、胎儿有核红细胞(NRBC)的研究及胎儿DNA的研究等.
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非侵入性产前诊断方法的研究进展
非侵入性产前诊断方法包括超声检查、母体血清标记物筛查、母体外周血中胎儿细胞的富集和分析、母体外周血中游离胎儿DNA的提取和分析等.各类技术近年来发展很快,本文就其研究进展和临床应用加以综述.
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重度子痫前期病人血清体液免疫状况与外周血FNRBC水平关系
目的 探讨重度子痫前期病人血清体液免疫状况与其外周血胎儿有核红细胞(FNRBC)水平的关系.方法 随机选择重度子痫前期孕妇 33 例(研究组)及同期正常孕妇 20 例(对照组),采用免疫比浊法和Greiss反应法测定血清中的免疫球蛋白(IgG、IgM、IgA)与补体C3、C4水平,采用单密度梯度离心法富集计算 FNRBC 数量.结果 研究组孕妇外周血中 FNRBC 数量较对照组明显升高(t=10.78,P<0.05);研究组体液免疫指标中IgG、IgM及C3水平明显低于对照组(t=5.36～9.10,P<0.05).研究组 FNRBC 数量与 IgG、IgM 及C3水平呈负相关(r=-0.89～0.44,P<0.05).结论 重度子痫前期孕妇外周血中FNRBC数量增多与机体体液免疫状况密切相关,胎儿物质向母血的渗漏增多、机体免疫调控失衡和紊乱均可能是重度子痫前期发生发展的重要因素.
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孕妇外周血胎儿有核红细胞数与胎儿及胎盘异常关系
在胎儿和胎盘发生病理性改变时,母血中FNRBC数量较正常妊娠增加,同时母血中FNRBC数量随孕周增加而增加,母血中FNRBC计数对产前预测病理妊娠和胎儿异常的发生有辅助意义.
