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反相高效液相色谱法测定柴胡及柴葛颗粒中柴胡皂苷D的含量
目的:控制柴葛颗粒及主药柴胡的质量.方法:采用Polarls C-18柱,以乙腈∶水(40∶60)为流动相,流速1.0 ml/min,检测波长204 nm,检测温度为室温.结果:此方法可使样品达到基线分离,阴性样品无干扰,线性关系良好,r=0.999 5,平均回收率=99.1%,RSD=3.67%(n=5).结论:此方法简便、准确、稳定、重复性好,其它组分测定无干扰,可用于该药材及其制剂中该成分的研究.
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北柴胡麸煨工艺的正交试验法优选
目的 优选北柴胡的佳麸煨工艺.方法 以柴胡皂苷a、d含量为考察指标,通过正交试验考察麦麸用量、麸煨锅温、麸煨时间3个因素,采用高效液相色谱法进行含量测定.结果 麸煨锅温和麸煨时间对柴胡皂苷a和柴胡皂苷d含量均有显著性影响,而麦麸用量对柴胡皂苷a和柴胡皂苷d含量影响不明显.佳麸煨工艺为1倍麦麸用量,麸煨锅温150℃,麸煨时间60 min.结论 优选的北柴胡佳麸煨工艺合理可靠,重现性好,为规范麸煨北柴胡的饮片加工提供参考.
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不同炮制方法对北柴胡中柴胡皂苷含量的影响
目的 测定北柴胡不同炮制品(蜜炙北柴胡和麸炒北柴胡)中柴胡皂苷a和柴胡皂苷d的含量.方法 采用高效液相色谱法;Ultimate XB-C18色谱柱(4.6mm×250mm,0.45 μm);流动相:乙腈-水;流速:1.0ml/min;检测波长:210nm;柱温:30C;采用梯度洗脱法测定北柴胡不同炮制品中柴胡皂苷a和皂苷d的含量.结果 生柴胡和麸炒北柴胡中柴胡皂苷a和柴胡皂苷d含量均高于蜜制北柴胡中的柴胡皂苷a和柴胡皂苷d含量.结论 不同炮制方法对北柴胡中柴胡皂苷a、d含量影响不同.
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咳平胶囊质量标准的研究
目的 建立咳平胶囊的质量控制标准.方法 采用薄层色谱法(TLC)对制剂中黄芩和柴胡进行定性鉴别;用高效液相色谱法测定柴胡皂苷a、柴胡皂苷d的含量.结果 黄芩、柴胡供试品与对照品色谱相应位置上均有相同颜色的斑点,阴性对照品无干扰.柴胡皂苷a在0.420～8.40μg范围内呈良好的线性关系,r=0.999 6,平均回收率为99.74%,RSD为2.95%;柴胡皂苷d在0.992～19.84 μg范围内呈良好的线性关系,r=0.999 4,平均回收率为99.83%,RSD为2.81%.结论 该方法简便、快速、准确,可作为该制剂质量控制方法.
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柴胡皂苷D对急性心肌梗死大鼠血流动力学和心肌氧化应激损伤的保护作用
目的 研究柴胡皂苷D(saikosaponin D,ssd)对急性心肌梗死(acute myocardial infarction,AMI)大鼠血流动力学和心肌氧化应激损伤的保护作用.方法 通过结扎左前降支建立大鼠急性心肌梗死模型,将建模成功的20只雄性大鼠随机分成心梗模型组(AMI)和模型加药组(AMI+SSd),每组10只.20只健康雄性SD大鼠随机分成健康对照组(Ctrl)和单独加药组(SSd),每组10只.单独加药组和模型加药组大鼠腹腔注射50 mg/kg,健康对照组和心梗模型组大鼠腹腔注射等量生理盐水,每天1次,连续2周.多道生理记录仪检测各组大鼠平均动脉压(mean arterial pressure,MAP)、 心率(heart rate,HR)和左心室收缩压(left ventriculoar systolic,LVSP).三苯基氯化四氮唑(2,3,5-Triphenyltetrazolium Chloride,TTC)染色计算心肌梗死面积.苏木伊红(hematoxylin and eosin,HE)染色观察心肌病理损伤.免疫组化检测Ki67的表达.末端标记法(terminal-deoxynucleoitidyl transferase mediated nick end labeling,TUNEL)染色观察心肌细胞凋亡情况.Western印迹检测心肌组织中肌红蛋白(myohemoglobin,Mb)、 肌酸激酶同工酶(creatine kinase-MB,CK-MB)和心肌肌钙蛋白Ⅰ(cardiac troponinⅠ,cTnⅠ)的表达.试剂盒检测线粒体氧化应激指标超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、 丙二醛(malondialdehyde,MDA)和谷胱甘肽(glutathione,GSH)的含量.结果 与对照组相比,AMI组MAP、HR和LVSP显著降低,心肌梗死面积显著升高;大鼠心肌组织细胞排列紊乱,有大量炎性细胞浸润;Ki67的表达显著下调,凋亡细胞比率显著上升;MB、CK-MB和cTnⅠ的表达显著上调;SOD的活性显著下降,MDA的含量显著上升,GSH的含量显著下降.AMI+SSd组与AMI组相比,MAP、HR和LVSP显著升高,心肌梗死面积显著降低;大鼠心肌组织细胞排列规则,仅有少量炎性细胞浸润;Ki67的表达显著上升,凋亡细胞比率显著下降;MB、CK-MB和cTnⅠ的表达显著下调;SOD的活性显著上升,MDA的含量显著下降,GSH的含量显著上升.结论 柴胡皂苷D通过改善急性心肌梗死模型大鼠血流动力学, 增加抗氧化能力, 对急性心肌梗死模型大鼠具有保护作用.
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柴胡皂苷d对阻塞性黄疸大鼠肝细胞游离钙及基质交联分子1的调控机制
目的 观察柴胡皂苷d(SSd)对阻塞性黄疸大鼠胆汁酸代谢、肝细胞游离钙及基质交联分子1(STIM1)基因表达的影响.方法 将108只SD雄性大鼠随机分为假手术对照组、阻黄组、阳性药物对照组、高、中、低剂量SSd组,同时各组随机分7、14、21d3个时段,每时段每组6只,建模成功后,分别连续给药7、14、21 d,于各时段末取肝组织和下腔静脉血标本,检测血清总胆汁酸(TBA)；应用流式细胞仪通过荧光指示剂Fluo-3/AM测定肝细胞内钙离子浓度；逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测STIM1的mRNA表达.结果 阻黄模型建立7、14、21 d后,阻黄组血清TBA逐步增加,肝细胞游离钙平均荧光强度(MFI)值逐步上升,STIM1 mRNA表达逐步减弱；SSd治疗组7d末,与阻黄组比较,低、中、高剂量组TBA水平逐步下降,差异有统计学意义(P＜0.05)；肝细胞游离钙MFI值逐步下调,差异有统计学意义(P＜0.05)；STIM1 mRNA表达逐步增强,差异有统计学意义(P＜0.05)；14、21 d末各检测指标变化趋势与7d末相同.结论 SSd能降低血清TBA浓度,上调STIM1 mRNA表达,抑制肝细胞钙超载,从而减轻阻塞性黄疸大鼠肝脏损害.
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空心柴胡不同部位中柴胡皂苷a、d和总黄酮的含量比较
目的: 比较空心柴胡不同部位中柴胡皂苷a、d和总黄酮的含量,为临床合理使用药用部位提供参考.方法: 柴胡皂苷a、d含量测定采用HPLC法:色谱柱Inertsil C18柱(250 mm×4.6 mm,5 μm);流动相:乙腈-水(40∶60),流速:1.0 ml·min-1;检测波长:210 nm,柱温:40 ℃,进样量:10 μl.总黄酮的测定采用比色法:检测波长为500 nm.结果: 柴胡皂苷a、柴胡皂苷d和柴胡总黄酮分别在0.21~1.26 mg·ml-1(r=0.999 6)、0.25~1.51 mg·ml-1(r=0.999 7)和4.00~25.00 μg·ml-1(r=0.999 6)范围内与峰面积呈良好的线性关系;平均回收率分别为99.27%(RSD=2.15%,n=6)、99.4%(RSD=2.14%,n=6)和99.03%(RSD=1.34%,n=6).空心柴胡根中柴胡皂苷a、d含量分别为0.31%、0.50%,其他部位含量较低;总黄酮在花中含量高达8.48%,在叶、茎、根中依次降低.结论: 空心柴胡地上部分富含黄酮类化合物,根中柴胡皂苷含量较高,临床使用带根全草比较合理.
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正交试验法优选北柴胡麸炒工艺
目的:优选北柴胡的佳麸炒工艺.方法:以柴胡皂苷a、d含量为考察指标,通过L9(34)正交试验考察麦麸用量、预热锅温、麸炒时间3个因素,采用高效液相色谱法进行皂苷含量测定.结果:预热锅温和麸炒时间对柴胡皂苷a和柴胡皂苷d含量均有显著性影响,而麦麸用量对柴胡皂苷a和柴胡皂苷d含量影响不明显.佳麸炒工艺为10%的麦麸用量,预热锅温290℃,麸炒时间80 s.结论:优选的北柴胡佳麸炒工艺合理可靠,重复性好,为规范麸炒北柴胡的饮片加工提供参考.
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灰色关联分析与主成分分析综合评价不同产地柴胡质量
目的: 应用灰色关联法(Grey Relational Analysis, GRA)与主成分分析(principal components analysis,PCA)评价不同产地柴胡药材质量并进行比较.方法: 收集来自15个不同产区柴胡药材,测定各批药材的灰分、酸不溶性灰分、浸出物、柴胡皂苷a和d的百分含量,采用灰色关联度法,以定义的相对关联度为测度,构建柴胡质量评价模型并与主成分分析法进行比较.结果: 对不同批次柴胡药材中的各成分进行灰色关联分析,得出陕西产柴胡药材与优参考序列的相对关联度高(0.79)质量优,河北产柴胡药材与优参考序列的相对关联度低(0.23)质量差,主成分分析法与灰色关联法的分析结果基本一致,说明结果的可重复性较好,较为可靠.结论: 灰色关联分析方法及本文所建立的柴胡质量评价模型可用于柴胡药材的质量评价.
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正交试验法优选柴胡中柴胡皂苷提取工艺
目的:以柴胡中柴胡皂苷a及柴胡皂苷d含量为评价指标,优选柴胡佳提取工艺.方法:采用L9(34)正交试验设计对提取方法进行优选,FIPLC-ELSD法测定柴胡皂苷a及柴胡皂苷d含量.采用Agilent TOG8(4.6 mm×250 mm,5μm)色谱柱,流动相为乙腈-水(50:50);流速:0.8 mL·in-1;柱温:20℃;ELSD为检测器.结果:佳提取方法为回流1 h,加5%氨水甲醇30mL.结论:优选出的提取方法经方法学考察符合要求,可为柴胡中化学成分的提取提供参考,使分析结果准确、可靠.
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HPLC-ELSD法测定大柴胡颗粒中柴胡皂苷a及柴胡皂苷d的含量
目的 采用高效液相色谱-蒸发光散色(HPLC-ELSD)法建立大柴胡颗粒中柴胡皂苷a及柴胡皂苷d的含量测定方法.方法 采用Thermo C18柱 (250 mm 4.6mm,5 m),乙腈-水 (38:62)为流动相,流速为1.0 mL/min;Shimadzu ELSD-LTⅡ型检测器,检测温度40 ℃,外标法定量.结果 柴胡皂苷a在0.296~2.96 g范围内呈良好线性关系,平均回收率为98.27%(RSD=1.36%,n=6);柴胡皂苷d在0.299~2.99 g范围内呈良好线性关系,平均回收率为97.89% (RSD=1.15%,n=6).结论 该方法简便易行,结果准确,重现性好,可用于大柴胡颗粒的质量控制.
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柴胡皂苷d治疗咳嗽变异性哮喘的实验研究
目的:观察柴胡皂苷d对咳嗽变异性哮喘(CVA)豚鼠的治疗作用,并探究其作用机制.方法:将32只豚鼠随机分成正常组、模型组、柴胡皂苷d组和激素组,采用综合法复制CVA豚鼠模型,并给予相应药物干预,观察豚鼠体征指标、咳嗽次数、支气管肺泡灌洗液嗜酸性粒细胞计数,检测血清IL-5和TNF-α水平的变化.结果:与正常组比较,模型组豚鼠均出现阵发性咳嗽、喷嚏、呼吸急促、躁动不安等表现,豚鼠咳嗽次数明显增加(P＜0.01),嗜酸性粒细胞明显增多(P＜0.01),血清IL-5和TNF-α[水平均明显增高(P＜0.05);给予相应药物干预之后,柴胡皂苷d组和激素组豚鼠咳嗽次数明显减少,嗜酸性粒细胞明显减少,血清IL-5和TNF-α水平均明显降低,与模型组比较,差异均有统计学意义(P ＜0.05,P＜0.01).结论:柴胡皂苷d可能通过降低CVA豚鼠IL-5和TNF-α的表达,达到治疗CVA的目的.
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RP-HPLC法测定中柴1号及其他产地柴胡中柴胡皂苷a、d的含量
目的用反相高效液相色谱法测定中药柴胡和"中柴1号"中柴胡皂苷a、d的含量,为柴胡的质量评价提供依据.方法采用Agilent Eclipse XDB-C18色谱柱(4.6 mm×150 mm,5 μtm);流动相为甲醇-水(68:32);流速1 mL·min;柱温26℃;UV检测波长210 nm;外标法定量.结果北柴胡中柴胡皂苷a、d的含量较狭叶柴胡高,其栽培新品种"中柴1号"的柴胡皂苷a、d的含量与主产区北柴胡相近或略高,锥叶柴胡中柴胡皂苷d含量较高.结论本方法操作简便,结果可靠.
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高效液相色谱法同时测定妇炎康复片7组分含量
目的 建立高效液相色谱同时测定妇炎康复片中7种成分的方法.方法 采用HPLC切换波长联合梯度洗脱法,色谱柱为C18柱,柱温为室温,流动相为乙腈(A)和0.02％磷酸溶液(B),流速为1mL·min-1,梯度洗脱程序及检测波长为20％A:230 nm,10 min；30％A:230 nm,5 min；40％A:230 nm,5 min；41％A:210 nm,5 min; 43％A:210 nm,5 min; 45％A:210 nm,5 min; 100％A:210 nm,30 min; 20％A:230 nm.结果 芍药苷、橙皮苷、黄芩苷、柴胡皂苷a、柴胡皂苷d、川楝素及齐墩果酸浓度分别在0.056 25～0.487 5mg· mL-1(r=0.999 8)、0.0735～0.637mg·mL-1(r=0.9997)、0.192～1.664 mg· mL-1(r=1.000 0)、0.0375～0.325mg·mL-1 (r=1.0000)、0.033 75～0.292 5 mg· mL-1 (r=0.997 4)、0.027 37～0.237 2mg·mL-1 (r=0.999 9)、0.041 25～0.357 5 mg·mL-1(r=0.999 4)呈良好的线性关系.上述7个成分精密度试验、8h内稳定性试验、加样回收试验表明重复性好和回收率符合要求.结论 该方法简单准确,可同时测定妇炎康复片中7种有效成分的含量,能用于妇炎康复片的质量控制.
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不同炮制方法对北柴胡中柴胡皂苷a、d的含量影响
目的 研究北柴胡不同炮制方法(净制、醋炙、酒炙、麸炒、鳖血炙)与有效成分柴胡皂苷a、d的相关性,为阐明炮制机理和炮制品的不同功效奠定基础. 方法 采用高效液相色谱法进行测定,Hypersil ODS C18 色谱柱 (4.6 mm×200 mm, 5 μm),乙腈-水为流动相梯度洗脱,流速1.0 mL/min,柱温30 ℃,测定波长210 nm,进样量20 μL. 结果 不同柴胡炮制品之间柴胡皂苷a和d的含量差异较大,柴胡皂苷a的含量依次为:麸炒柴胡>生柴胡>醋柴胡>酒柴胡>鳖血柴胡,柴胡皂苷d的含量依次为: 生柴胡>麸炒柴胡>醋柴胡>酒柴胡>鳖血柴胡. 结论 不同炮制方法对柴胡有效成分柴胡皂苷a、d有一定影响.
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HPLC法测定春柴胡中柴胡皂苷a、d的含量
目的:测定不同产地、不同采收期春柴胡中柴胡皂苷a、d的含量.方法:采用HPLC法,色谱柱为C18柱,以乙腈-水为流动相进行梯度洗脱,检测波长为210 nm.结果:柴胡皂苷a在0.41 ～4.13μg范围内呈良好线性关系(r1 =0.9998)；柴胡皂苷d在0.40～4.02 μg范围内呈良好线性关系(r2 =0.9999),柴胡皂苷a、d的平均回收率分别为102.92％、97.04％,RSD分别为1.35％、1.27％.结论:不同产地、不同采收期春柴胡中柴胡皂苷a、d的含量差异较大,该结果为完善春柴胡的质量标准提供了可供参考的数据资料.
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不同播期对柴胡有效成分含量、产量的影响及评价
目的:研究不同播期对不同柴胡品种根中有效成分含量及产量的影响,并进行综合评价,确定适宜播期.方法:以黑柴胡、北柴胡(黑)、甘肃(黑)柴胡子、805柴胡的干燥根为材料.在不同时间进行播种,同一时间收获,进行产量和各指标测定.产量采用称重法;把柴胡的十燥根粉碎以后,超声提取,柴胡皂苷a、d含量用高效液相色谱法测定,柴胡总皂苷含量用分光光度计测定.利用隶属函数分析对柴胡的指标进行综合评价.结果:播期对柴胡皂苷a、d与柴胡总皂苷含量及柴胡产量的影响显著,呈现不同的变化趋势;隶属函数分析结果表明,柴胡有效成分含量及产量由高至低的播期排序为:3月20日、10月 20日、7月20日、9月20 日、6月20日、4月20 日.结论:柴胡以3月20日播期为优.
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柴胡属5种易混药材的鉴别研究
目的:对柴胡属5种药材北柴胡、南柴胡、竹叶柴胡、藏柴胡和锥叶柴胡进行性状、薄层色谱及分子鉴定研究.方法:参考2015年版中国药典四部相关方法,对药材进行了性状观察和描述;以柴胡皂苷d和柴胡对照药材为指标性成分和标准物质,建立了柴胡属5种易混药材的薄层色谱鉴别方法;采用DNA条形码鉴别方法对5种易混药材进行了鉴别研究.结果:5种药材从性状特征上能够准确予以区分;薄层色谱结果显示,锥叶柴胡和其他几种柴胡区别较大,能够快速鉴别,竹叶柴胡及藏柴胡与正品柴胡较为一致;分子鉴定结果表明ITS2序列可用于5种柴胡药材的物种鉴定.结论:该研究建立的性状及薄层色谱方法在鉴别这5种药材上具有简单、准确的特点,DNA条形码技术是传统鉴别方法的有效补充,具有很大的应用前景,该研究也为竹叶柴胡和藏柴胡进一步的药效学研究提供了科学依据.
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柴胡皂苷d对肝星状细胞ERα和ERβ蛋白水平的调节
目的 研究柴胡皂苷d对肝星状细胞ERα和ERβ蛋白的调节作用.方法 体外培养肝星状细胞系HSC-T6,细胞铺板24 h后,用柴胡皂苷d或雌二醇处理HSC-T6细胞;或者先以雌激素受体拮抗剂(ICI-182.780)预处理细胞30 min后,再用柴胡皂苷d或雌二醇处理细胞.用Western blot方法观察柴胡皂苷d对雌激素受体表达的影响.结果 柴胡皂苷d(5μmol· L-1)和雌二醇(1 μmol· L-1)处理细胞后能显著提高HSC-T6细胞ERα和ER β蛋白的表达水平,且作用24 h后的上调作用显著(P＜0.01);柴胡皂苷d和雌二醇上调ERβ表达的作用比上调ERd表达的作用强.结论 柴胡皂苷d能够上调HSC-T6细胞ERα和ERβ蛋白表达,是一种雌激素受体调节剂.
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毛细管电泳法测定气滞胃痛颗粒中柴胡皂苷a和柴胡皂苷d的含量
目的 建立毛细管电泳法测定气滞胃痛颗粒中柴胡皂苷a和柴胡皂苷d的含量.方法 以对硝基苯甲酸为内标；采用未涂层弹性融硅石英毛细管柱(65 cm×50 μm ID,有效长度57 cm)；以20 mmol·L-1Tris+ 20 mmol·L-1磺丁基-β-环糊精+25 mmol·L-1β-环糊精(pH9.93)为流动相；分离电压为12 kV;重力进样10 s(高度15 cm)；检测波长210nm.结果 柴胡皂苷a、柴胡皂苷d的线性范围分别为20.16～201.6 μg·mL-1(r =0.9953)、16.26 ～ 162.6 μg·mL-1(r=0.9986)；平均回收率分别为97.9％、96.3％.结论 该法简便、快速、准确可靠,可用于气滞胃痛颗粒的质量控制.
