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UPLC法测定“柴胡-白芍”药对提取物的3种皂苷类成分
目的 建立同时测定“柴胡-白芍”药对提取物中芍药苷、柴胡皂苷a及柴胡皂苷d的超高效液相色谱法.方法 采用Waters Acquity UPLC系统;色谱柱:Waters XSELECTTMHSS T3 (2.1 mm×100 mm,2.5μm);柱温:30℃;以0.1％(体积分数)H3 PO4水溶液和乙腈为流动相进行梯度洗脱;流速:0.4 mL/min;检测波长:210 nm.结果 芍药苷、柴胡皂苷a及柴胡皂苷d3种成分基本分离,线性关系良好.芍药苷的线性范围为0.1616～1.616 μg(r=1.000 0),平均回收率为100.8％;柴胡皂苷a的线性范围为0.050 8 ～0.508 μg(r =0.999 6),平均回收率为99.4％;柴胡皂苷d的线性范围为0.053 8 ～0.538μg(r=0.999 8),平均回收率为101.2％.结论 本方法简便、快捷、准确、重复性好,可实现柴胡-白芍药对提取物的多指标质量控制.
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HPLC法同时测定黑柴胡药材中柴胡皂苷a和d的含量
目的:建立同时测定黑柴胡药材中柴胡皂苷a和d含量的方法.方法:采用高效液相色谱法.色谱柱为Inertsil C18(250 mm×4.6 mm,5 μm),流动相为乙腈-水(38:62,V/V),流速为1.0 ml/min,检测波长为210 nm.结果:柴胡皂苷a和d的进样量分别在0.425～6.375 μg和0.130～3.250 μg范围内与各自峰面积积分值呈良好线性关系(r均为0.999 9);精密度、稳定性和重复性试验的RSD＜2％;平均加样回收率分别为96.66％(RSD=1.11％,n=6)和96.20％ (RSD=0.78％,n=6).结论:该方法简便、重复性好,结果稳定、可靠,可用于黑柴胡药材的质量控制.
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HPLC法同时测定柴葛清热颗粒中柴胡皂苷a、d和葛根素的含量
目的:建立同时测定柴葛清热颗粒中柴胡皂苷a、d和葛根素含量的方法.方法:采用高效液相色谱法.色谱柱为Agilent C18(250 mmx4.6 mm,5μm),流动相为乙腈-水(梯度洗脱),流速为1.0mL·min-1,柱温为30℃,检测波长为210nm,进样量为10μL.结果:柴胡皂苷a、d和葛根素的检测浓度分别在0.014～1.120 mg·mL-1(r=0.9997)、0.015～1.200 mg·mL-1(r=0.9996)和0.012～0.960 mg·mL-1(r=0.9998)范围内与各自峰面积积分值呈良好的线性关系；三者平均加样回收率分别为99.96％、99.80％和99.83％,RSD分别为1.67％、0.97％和1.24％(n=6).结论:本方法简便、准确、重复性好,可用于柴葛清热颗粒的质量控制.
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柴胡皂苷d对肝纤维化大鼠TPA、PAI、MDA及NO影响的研究
目的:观察柴胡皂苷d(SSd)对二甲基亚硝胺(DMN)所致肝纤维化大鼠组织型纤溶酶原激活因子(TPA)、纤溶酶原抑制因子(PAI)、丙二醛(MDA)及一氧化氮(NO)的影响.方法:选用健康SD大鼠18只,随机分成正常组、模型组、治疗组.正常组每天ip生理盐水(NS),模型组和治疗组ip 10mg·kg-1DMN,3次·wk-,治疗组同时ip SSd 1.8 mg·kg-1,连续给药28d,末次给药1h后处死全部大鼠,腹主动脉取血、肝脏,进行病理观察,同时进行TPA、PAI、MDA及NO等指标的检测.结果:SSd能减轻模型大鼠肝组织纤维化的程度,同时能改善TPA、PAI纤溶活性,对MDA有清除作用,对肝细胞也有明显的保护作用,与模型组比较有显著性差异.结论:SSd对大鼠实验性肝纤维化有一定的保护作用,其机制可能与改善纤溶功能,清除过氧化脂质和提高体内NO水平有关.
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HPLC法测定感冒清口服液中柴胡皂苷a、d的含量
目的:建立测定感冒清口服液中柴胡皂苷a、d含量的方法.方法:采用高效液相色谱法.色谱柱为Agilent TC-C18柱,流动相为乙腈-水(35∶65,V/V),检测波长为210hm,流速为1.0 ml/min,柱温为25℃,进样量为10 μl.结果:柴胡皂苷a、d的进样质量分别在0.207 8～8.312 μg和0.244 8～9.792 μg范围内与峰面积积分值线性关系良好；平均回收率(n=6)分别为95.76％ (RSD=1.20％)和95.28％ (RSD=0.80％).结论:该方法操作简便、准确度高、专属性强,适用于感冒清口服液中柴胡皂苷a、d的含量测定.
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柴胡皂苷D对骨肉瘤143B细胞增殖抑制作用研究
目的 检测柴胡皂苷D(SS-d)对骨肉瘤143B细胞生长的影响,初步探讨其作用机制.方法 经不同浓度柴胡皂苷D处理骨肉瘤143B细胞后,分别于6,12,24,48,72 h时采用MTT法检测骨肉瘤143B细胞增殖情况,采用酶联免疫吸附(ELISA)法检测人骨钙素(OCN)表达,采用碱性磷酸酶(AKP)测试盒检测AKP活力.结果 低浓度的柴胡皂苷D可明显抑制骨肉瘤143B细胞的生长,并呈剂量依赖性(P<0.05);AKP活力检测结果显示,经柴胡皂苷D干预后的143B细胞的AKP活力变化无显著性;ELISA检测结果显示,柴胡皂苷D能减弱人骨钙素的表达.结论 柴胡皂苷D能抑制143B细胞增殖,活性较强,其作用机制可能与促进成骨分化无关.
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解郁安神颗粒中柴胡皂苷含量测定方法研究
目的 建立测定解郁安神颗粒中柴胡皂苷含量的高效液相色谱(HPLC)法.方法 色谱柱为Thermo Hypersil BDS C18柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为水-乙腈,梯度洗脱,检测波长为210 nm,流速为1.0 mL/min,柱温为25℃.结果 柴胡皂苷a的质量浓度线性范围为20.25～311.46μg/mL,r=0.9997(n=7),平均回收率为95.31％,RSD为1.29％(n=6);柴胡皂苷d的质量浓度线性范围为23.12～308.56μg/mL,r=0.9996(n=7);平均回收率为96.35％,RSD为1.38％(n=6).结论 该法能同时测定解郁安神颗粒中柴胡皂苷a和柴胡皂苷d的含量,结果准确、重复性好、可操作性强,为加强以柴胡皂苷作为有效成分的中成药质量控制提供了参考.
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柴胡皂苷d对免疫性肝纤维化大鼠TGF-β1、HYP、SOD、MDA的影响
目的 构建大鼠免疫性肝纤维化模型,探讨柴胡皂苷D (SS-d)抗模型鼠肝纤维化的药理学活性及其相关机制.方法 猪血清免疫法建立大鼠肝纤维化模型,实验分为6组:正常对照组、模型组、高中低剂量SS-d用药组(20、10、5mg/kg)及秋水仙素(Col,0.1mg/kg)用药组.放射免疫分析法测定大鼠血清透明质酸酶(HA)、层粘连蛋白(LN)和Ⅲ型前胶原(PCⅢ)的水平.分光分析法检测标本中超氧化物歧化酶(SOD)活性和羟脯氨酸(Hyp)、丙二醛(MDA)的含量.荧光定量PCR和Westem blot检测肝组织中TGF-β1 mRNA和蛋白表达的变化.结果 成功构建了免疫性大鼠肝纤维化模型,模型鼠中血清HA、LN和PCⅢ显著高于正常对照组(P＜0.01),SS-d可以剂量依赖性地抑制模型组血清中HA、LN和PCⅢ肝纤维化指标的升高(P＜0.05).与模型组比较SS-d可以剂量依赖性地减低肝组织中Hyp和MDA的含量,同时也剂量依赖性地升高SOD的活性(P＜0.05).荧光定量PCR和Western blot检测结果显示SS-d可以剂量依赖性地下调模型鼠肝组织中TGF-β1 mRNA和蛋白的表达水平.结论 SS-d具有较好的抗肝纤维化作用,其作用机制可能与提高SOD活性、减少氧自由基的生成、抑制TGF-β1信号通路的活化有关.
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柴胡皂苷d对人肝细胞L-02“量-时-毒”关系及机制研究
目的:考察柴胡中主要药理活性成分柴胡皂苷d对于人正常肝细胞L-02增值的影响,探究柴胡皂苷d的体外肝毒性及其作用机制,为柴胡的临床应用提供理论依据.方法:运用MTT实验、观察细胞形态学变化,考察柴胡皂苷d对于L-02细胞的毒性影响;通过Annexin V/PI双染测定,探讨柴胡皂苷d是否诱导L-02细胞凋亡;检测给药后细胞上清中的SOD、MDA、LDH等生化指标的变化,来进一步探究柴胡皂苷d肝毒性产生的作用机制.结果:不同浓度的柴胡皂苷d对于细胞毒性呈现剂量相关性,与作用时间无关.作用24h和48h,柴胡皂苷d对人肝细胞L-02的半数抑制浓度(IC50)分别为2.26 μg/ml和1.79 μg/ml.Annexin V/PI双染未检测到早期凋亡细胞.细胞培养液上清检测结果表明,除了柴胡皂苷d 7.81 μg/ml作用48h使细胞损伤严重外,其余浓度组均检测到SOD活性降低、MDA和LDH含量升高.结论:柴胡皂苷d通过氧化损伤机制,降低细胞SOD活性,破坏细胞膜,使细胞发生损伤而发挥毒性,而非通过诱导凋亡产生肝细胞毒性.
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柴胡皂苷d对肝星状细胞ERα和ERβ mRNA水平的调节
目的:研究柴胡皂苷d对大鼠肝星状细胞ERα、ERβ mRNA的调节作用,探讨其对肝纤维化的作用机制.方法:体外培养大鼠肝星状细胞系HSC-T6,采用实时荧光定量RT-PCR方法,观察柴胡皂苷d对两种雌激素受体亚型表达的影响.采用MTT法,观察雌二醇、柴胡皂苷d对HSC-T6细胞增殖的影响,并为后续实验确定合适的实验用药物剂量和用药时间.结果:柴胡皂苷d能明显提高HSC-T6细胞ERα、βmRNA表达,且呈剂量与时间依赖性,但作用较雌二醇弱,这种作用可被ER完全拮抗剂ICI-182.780抑制.通过对半数抑制率的计算,得出柴胡皂苷d和雌二醇半数抑制率(IC50)的浓度分别为5μmol/l和1μmol/l.结论:推测柴胡皂苷d有雌激素受体调节剂的作用,可能是一种雌激素调节剂.
关键词： 柴胡皂苷d 雌激素 肝纤维化 受体 逆转录聚合酶链式反应 -
柴胡皂苷d对肝纤维化大鼠脂质过氧化与微量元素锌、钙的影响
目的:探讨柴胡皂苷d(SSd)对二甲基亚硝胺(DMN)所致肝纤维化大鼠肝组织中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)的含量与血清中微量元素锌、钙的影响.方法:以DMN腹腔内注射每周2次,持续6周,建立肝纤维化模型.SSd治疗组注射DMN 2周后同时每天SSd ip治疗4周.取肝组织进行病理检查,免疫组化法观察TGF-β1、α-SMA在肝组织中的表达;分光光度比色法检测肝组织匀浆中MDA、SOD的水平;采用原子吸收分光光度计测定血清中锌、钙微量元素的含量.结果:与模型组比较,SSd治疗组能明显减轻大鼠肝纤维化的程度,显著降低肝组织中TGF-β1、α-SMA蛋白的表达,降低肝组织中MDA含量,有升高SOD活性的趋势;并可使血清中微量元素锌水平升高、钙水平降低.结论:SSd能减轻DMN诱导的大鼠肝纤维化程度,其可能的机制与干预了肝内脂质过氧化反应和调节血清中微量元素锌、钙的水平有关.
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HPLC波长切换法同时测定乳增宁胶囊中的9个主要成分
目的 采用HPLC波长切换法同时测定乳增宁胶囊中9个主要成分的含量.方法 采用Venusil MP C18色谱柱(250mm×4.6 mm,5μm),流动相为乙腈-0.2％甲酸溶液,梯度洗脱,流速0.8 mL·min-1,温度30℃,进样量10μL.结果 淫羊藿苷、宝藿苷Ⅰ、土贝母苷甲、土贝母苷乙、土贝母苷丙、棕矢车菊素、异泽兰黄素、柴胡皂苷a和柴胡皂苷d的线性范围分别为8.86 ～ 177.20、2.79 ～ 55.80、10.08 ～201.60、2.47 ～ 49.40、5.56 ～111.20、1.12 ～22.40、4.54 ～90.80、1.98 ～ 39.60、1.86～37.20 mg·L-1,r分别为0.9998、0.9997、0.9999、0.9993、0.9996、0.9999、0.9995、0.9997、0.9998;9种成分的平均加样回收率分别为99.54％、97.84％、100.16％、98.74％、97.79％、98.06％、99.31％、98.50％、97.71％,RSD分别为1.19％、1.40％、0.75％、0.99％、1.66％、1.27％、0.94％、1.13％、1.58％.结论 所用方法操作简便、重复性好、精密度高、稳定性好,可同时测定乳增宁胶囊中9种有效成分的含量.
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柴胡的HPLC指纹图谱研究
目的 建立同时测定承德产及其他主产区柴胡中柴胡皂苷a和柴胡皂苷d的含量及其HPLC指纹图谱.方法 采用ZorbaxSB-C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),乙腈溶液系统梯度洗脱,检测波长210 nm,流速1.0 mL· min-1,分析时间90 min.结果 柴胡皂苷a和柴胡皂苷d的线性范围分别为33.2～531 μg· mL-1(r=0.9999)、31.8～508 μg·mL-1(r=0.9999);平均回收率分别为98.6％(RSD=0.9％)、98.9％(RSD=1.2％)；15批药材的HPLC指纹图谱共确立6个共有峰.结论 所用方法准确可靠,重复性好,为更好地控制柴胡的质量提供了科学依据.
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紫花大叶柴胡的生药学研究
目的 对伞形科植物紫花大叶柴胡(B.longiradiatum Turcz.var.porphyranthum Shan et Y.Li)进行生药学研究.方法从宏观(植物形态、药材性状特征)和微观(显微组织)结构对紫花大叶柴胡鉴别特征进行研究;采用HPLC法对其有效活性成分进行含量检测.结果 首次详细地描述了紫花大叶柴胡根的横切面组织结构显微特征及粉末中木栓细胞、纤维、导管、油室碎片及条状分泌物、薄壁细胞等特征;其有效活性成分柴胡皂苷d含量为0.5%.结论 确定了紫花大叶柴胡的生药学鉴定特征及其有效活性成分含量,为该资源的开发利用提供了依据.
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HPLC法测定滇柴胡中柴胡皂苷d的含量
目的 建立高效液相色谱法测定滇柴胡中柴胡皂苷d的含量.方法 采用Agilent ZORBAX SB-C18色谱柱(250mm×4.6mm,5um),流动相为乙腈-水梯度洗脱,流速:1.0mL·min-1,DAD检测器,检测波长:203nm.结果 线性范围0.316μg/mL ～3.160μg/mL,r =0.9995;平均回收率为98.7％,RSD =0.42％ (n =6).结论 该法快速、准确、可靠;可作为滇柴胡中柴胡皂苷d含量的检测,为药材的用量及控制提供科学依据.
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春柴胡中柴胡皂苷a与d的含量测定
目的 测定春柴胡中柴胡皂苷a、d的含量.方法 应用高效液相色谱(HPLC)法,色谱柱为DiamonsilC18 (4.6 mm×250mm,5μm),流动相为乙腈-水梯度洗脱,流速1mL·min-,检测波长210 nm.结果 柴胡皂苷a在0.4018～6.027 μg(r=0.9990)范围内线性关系良好,平均回收率为91.19％,RSD为1.83％(n=6);柴胡皂苷d在0.5238 ～7.857μg(r =0.9992)范围内线性关系良好,平均回收率为92.76％,RSD为1.43％(n=6).结论 本研究建立的柴胡皂苷a、d的含量测定方法简便、结果准确.
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柴胡皂苷D抑制人结直肠癌细胞SW480增殖的分子机制探讨
目的:研究柴胡皂苷D(saikosaponin-D,SSD)抑制人结直肠癌细胞SW480增殖的分子机制.方法: Western blot检测SSD对AMPK信号通路相关蛋白(p-AMPKα和p-ACC)表达的影响;Western blot检测siRNA敲低AMPKα后SSD对AMPK信号通路相关蛋白表达的影响;MTT和细胞计数实验研究 siRNA敲低 AMPKα后 SSD对 SW480细胞增殖的影响.结果:SSD处理后,p-AMPKα和p-ACC的表达均增高(P＜0.05);siRNA敲低AMPKα后SSD对p-AMPKα和p-ACC的上调作用被抑制(P＜0.05);SSD抑制细胞的增殖(P＜0.05),但AMPKα被敲低后SSD对SW480细胞的增殖抑制作用被抑制(P＜0.05).结论:SSD通过激活AMPK信号通路抑制人结直肠癌细胞SW480的增殖.
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柴胡皂苷D通过逆转EMT抑制人成骨肉瘤细胞MG-63的迁移和侵袭
目的:研究柴胡皂苷D对人成骨肉瘤细胞MG-63的迁移和侵袭能力的影响并初步探讨其潜在分子机制.方法:运用MTT试验检测柴胡皂苷D对细胞增殖的影响,划痕试验和Transwell迁移试验检测柴胡皂苷D细胞迁移能力的影响,Transwell侵袭试验研究柴胡皂苷D对细胞侵袭能力的影响,Western-blot检测柴胡皂苷D对EMT相关蛋白的影响.结果:对MG-63增殖无明显影响浓度的柴胡皂苷D显著抑制细胞的迁移和侵袭能力(P<0.001),柴胡皂苷D上调E-cadherin的表达而下调N-cadherin和Vimentin的表达.结论:柴胡皂苷D通过逆转EMT改变抑制人成骨肉瘤细胞MG-63的迁移和侵袭.
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柴胡皂苷D通过诱导C2－M期阻滞抑制结直肠癌 SW480细胞的增殖
目的：观察柴胡皂苷 D（SSD）对于结直肠癌肿瘤细胞增殖的影响并初步探索其潜在的分子机制。方法：运用 MTT、细胞计数试验及克隆形成试验观察 SSD 对细胞增殖的影响。流式细胞仪检测 SSD 对细胞凋亡及周期分布情况的影响。RT －PCR 和 Western －blot 技术检测 G2－M周期阻滞关键调控因子在 SW480细胞中的表达。结果：MTT 试验发现 SSD 能够显著抑制结直肠癌肿瘤细胞 SW480的增殖，而对正常结直肠细胞FHC 的增殖无明显影响。细胞计数试验和克隆形成试验进一步验证了 SSD 对于 SW480细胞增殖的影响（P＜0．05）。流式细胞术检测发现 SSD 不影响细胞的凋亡（P ＞0．05），但却显著诱导 G2－M 周期阻滞（P ＜0．05）。SSD 在 mRNA 水平下调了 G2－M周期调控因子 CCNA 1、CCNA2、CCNB 1和 CCNB2的表达（P ＜0．05）；在蛋白水平，CCNA2、CCNB1和 p34／cdc2明显被下调，p －H3S10上调，p21 WAF1／CIP1被明显上调。结论：SSD 可以通过上调 p21 WAF1／CIP1的表达诱导 G2－M周期阻滞来抑制结直肠肿瘤细胞 SW480的增殖。
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柴胡皂苷d对大鼠实验性肝癌形成的预防作用
目的 研究柴胡皂苷d(saikosaponin-d,SSd)对大鼠实验性肝癌形成的预防作用.方法 采用间断小剂量二乙基亚硝胺(diethylnitrosamine,DEN)灌胃诱发大鼠肝癌模型,将90只清洁级雄性SD大鼠随机分为5组:正常对照组(10只)、肝癌模型组(20只)、SSd大、中、小剂量组(2.0、1.5、1.0 mg/kg,各20只),SSd治疗组在建立肝癌模型的同时,腹腔注射不同剂量的SSd,实验16周后停止给药,实验第18周处死所有大鼠,比较各组大鼠体重的改变,检测血清肝功指标丙氨酸氨基转移酶(alanine aminotransferase,ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(aspartate aminotransferase,AST)、碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)、γ-谷氨酰转肽酶(γ-glutamyltransferase,GGT)、α-L-岩藻糖苷酶(alpha-L-fucosidase,AFU),并进行肝脏病理组织学检查.结果 SSd各剂量组与肝癌模型组比较,血清各项肝功指标水平明显下降,差异有统计学意义,特别是SSd大剂量组(P＜0.01);同时SSd治疗组与肝癌模型组相比,肝脏病理组织学镜下观察,癌细胞分化程度高,异型性低.结论 SSd对大鼠实验性肝癌形成具有一定的防治作用.
