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不同产地艾叶中异泽兰黄素含量比较
目的:比较不同产地艾叶中异泽兰黄素的含量.方法:采用HPLC测定异泽兰黄素的含量.流动相乙腈一水-冰醋酸(63∶37∶5),流速1.0 mL· min-1,检测波长254 nm,柱温30℃,进样量10 μL.结果:在所测定3个样品中,异泽兰黄素含量高的是湖北艾叶(0.165％).结论:不同产地艾叶中异泽兰黄素含量存在差异.
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基于古代本草记载的不同产地艾叶中棕矢车菊素和异泽兰黄素的含量研究
为了评价“海艾”、“蕲艾”、“北艾”、“祁艾”和南阳艾叶品质,利用高效液相色谱法同时测定艾叶中棕矢车菊素和异泽兰黄素的含量.采用Agilent Eclipse XDB-C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5 μm),流动相为乙腈-0.2％磷酸溶液(35:65),流速1.0mL·min-1,检测波长350 nm,柱温25℃.棕矢车菊素和异泽兰黄素分别在0.003～0.126 9·L-1(r=0.999 9),0.005 ～0.200 9·L-1(r =0.999 9)呈良好的线性关系,平均回收率(n=6)分别为99.14％(RSD 1.2％),99.40％ (RSDO.73％),说明该方法准确可靠、重复性好,是用于艾叶的质量控制的有效方法.结果表明不同产地艾叶中棕矢车菊素含量差异较小,不同产地艾叶中异泽兰黄素的含量差异较大,淮河以南的浙江宁波、湖北蕲春、湖北襄阳、河南南阳的艾叶和淮河以北汤阴艾叶、安国艾叶中异泽兰黄素含量相对较高.
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不同产地艾叶中异泽兰黄素和棕矢车菊素含量的比较
目的 考察产地生态因子对艾叶中异泽兰黄素和棕矢车菊素两种成分的影响,为提升艾叶质量标准提供科学依据.方法 采用高效液相色谱法对9批不同产地艾叶样品中异泽兰黄素和棕矢车菊素两种活性成分的含量进行测定,色谱柱为Kromasil 100-5 C18(4.6 mm×150 mm,5μm),以磷酸二氢钠缓冲溶液-乙腈(70∶30,V/V)为流动相进行等度洗脱,流速1.0 mL/min;柱温30℃;检测波长345 nm.采用GIS技术,结合对多种空间数据的使用,对全部样品采集地四项生态因子数据进行提取.结果 9批艾叶样品异泽兰黄素和棕矢车菊素分别在0.02～0.5 mg/mL和0.04～0.1 g/mL内与峰面积有良好的线性关系.各样品中两种活性成分含量与样品产地生态因子均存在差异.异泽兰黄素和棕矢车菊素的含量分别为0.110％～0.276％和0.059％～0.072％.异泽兰黄素的含量在9批样品中变化较为明显,而棕矢车菊素含量在9批样品中变化较小.两种成分含量高样品均为湖北蕲春样品.结论 艾叶中异泽兰黄素和棕矢车菊素两种成分的含量受独特生态因子的影响,表现为道地药材产区含量明显高于非道地产区,而异泽兰黄素的含量又与药材的品质密切相关,可用于评价和控制艾叶药材的质量.
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青钱柳叶子化学成分的研究
目的 研究青钱柳Cyclocarya paliurus叶子的化学成分.方法 采用色谱分离技术进行分离和纯化,并根据谱学数据鉴定化合物的结构.结果 从青钱柳叶子的甲醇提取物中分离得到14个化合物,包括11个黄酮类和3个酚酸类化合物,分别鉴定为山柰酚(1)、槲皮素(2)、芹菜素(3)、苜蓿素(4)、异泽兰黄素(5)、3,7,8,3'-tetrahydroxy-4’-methoxyflavone (6)、杨梅素(7)、3,5-dihydroxy-7-methoxy-3’,4’-methylenedioxyflavone (8)、异槲皮苷(9)、槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖醛酸苷(10)、杨梅素-3-O-β-D-葡萄糖醛酸苷(11)、咖啡酸(12)、5-咖啡酰基奎宁酸(13)和3-羟基苯甲酸-4-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(14).结论 化合物3～5和14为首次从青钱柳中分离得到,化合物6和8为首次从青钱柳属植物中分离得到.化合物1～11显示中等强度的细胞毒活性,化合物12～14显示显著的细胞毒活性.
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艾叶饮片HPLC指纹图谱研究
目的:采用HPLC法建立艾叶饮片的指纹图谱,为艾叶饮片质量评价提供依据.方法:采用Agilent Eclipse XDB-C18(250 mm ×4.6mm,5μm)色谱柱;以乙腈(B)-0.2％磷酸(A)为流动相,进行梯度洗脱;采用DAD检测器检测,检测波长330nm,参比波长420nm.流速:1.0 mL/min;柱温:25℃.结果:建立了艾叶饮片HPLC指纹图谱,方法学考察结果符合指纹图谱技术要求,采用该方法共检测了不同产地10批艾叶饮片,共标定12个共有特征指纹峰.结论:本法准确、可靠,建立的HPLC指纹图谱为艾叶的质量控制提供更全面的信息.
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异泽兰黄素抑制瘢痕组织成纤维细胞增殖的机制
目的 探讨异泽兰黄素对瘢痕组织成纤维细胞增殖的影响及机制.方法 应用MTT法检测异泽兰黄素对瘢痕组织成纤维细胞活力的影响,流式细胞仪检测异泽兰黄素对瘢痕组织成纤维细胞中活性氧(ROS)的生成及细胞凋亡的影响,Western印迹法检测异泽兰黄素对细胞内JNK和Bcl2磷酸化的影响.结果 2.5、5.0、10.0、20.0、40.0μg/ml异泽兰黄素作用细胞24 h后,细胞活力呈浓度依赖性降低.ROS抑制剂(NAC)预处理细胞1 h能显著抑制异泽兰黄素对细胞活力的抑制作用.10.0μg/ml异泽兰黄素作用细胞24 h能促进细胞ROS生成和细胞凋亡,细胞凋亡率为(47.20±1.60)%,与正常对照组相比具有显著统计学差异;促进JNK磷酸化水平和Bcl2表达水平,JNK磷酸化水平为(3.12±0.25)倍,Bcl2磷酸化水平为(2.84±0.22)倍,与正常对照组相比具有显著性差异.JNK磷酸化抑制剂和NAC均能显著抑制异泽兰黄素诱导的细胞凋亡和JNK的磷酸化.结论 异泽兰黄素可诱导瘢痕组织成纤维细胞ROS的产生,通过激活JNK/Bcl2通路诱导细胞凋亡,从而抑制成千维细胞的增殖活性.
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鼠曲草化学成分研究
目的 研究鼠曲草的化学成分.方法 鼠曲草的乙醇提取物依次经石油醚和乙酸乙酯萃取,再经硅胶柱色谱法、Sephadex LH-20柱色谱法等进行分离纯化,并通过波谱技术及理化性质鉴定化合物结构.结果 从鼠曲草中分离得到8个化合物,分别为β-谷甾醇(1),芦丁(2),槲皮素-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(3),异泽兰黄素(4),5-羟基6,7,3',4'-四甲氧基黄酮(5),槲皮素(6),木犀草素(7)和芹菜素(8).结论 其中化合物5为首次从鼠曲草属植物中分离得到,化合物8为首次从该植物中分离得到.
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应用高效液相色谱法测定中药奇蒿中异泽兰黄素和奇蒿黄酮的含量
目的 采用高效液相色谱(HPLC)法测定中药奇蒿中异泽兰黄素和奇蒿黄酮的含量.方法 奇蒿药材以10倍体积甲醇超声60 min提取.色谱分离采用资生堂MG-C18色谱柱(3.0 mm×100 mm,3μm),流动相为乙腈-0.1%甲酸(40:60,V/V),等度洗脱,流速0.5 ml/min,检测波长350 nm,柱温25℃,进样量5μl.结果 异泽兰黄素和奇蒿黄酮在15 min内基线分离,线性良好.方法学验证表明,日内、日间精密度,重复性和稳定性的范围均符合相关标准.异泽兰黄素的低、中、高加样回收率分别为100.26%,99.58%和102.24%;奇蒿黄酮的低、中、高加样回收率分别为99.09%,101.12%和101.43%.结论 该方法快捷简单,稳定可靠,可用于对奇蒿药材进行质量控制.
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Eupatilin对黄嘌呤氧化酶活性抑制的实验研究
目的:通过体外酶学试验分析Eupatilin对黄嘌呤氧化酶活性的影响及抑制机理.方法:利用紫外分光光度计观测尿酸生成导致的吸光度变化值,测定波长为292 nm,并以黄嘌呤为底物根据测定结果绘制Lineweaver-Burk和Dixon图.结果:Eupatilin对黄嘌呤氧化酶表现很强的抑制作用,其Ki值为0.128 6 μg/ml,抑制类型为混合型;而别嘌吟醇作为对照,其Ki值为0.62 μg/ml,抑制类型为竞争性抑制 结论:Eupatilin具有明显的黄嘌呤氧化酶抑制活性.
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醋艾叶饮片HPLC指纹图谱研究暨异泽兰黄素和棕矢车菊素含量测定
目的 采用高效液相色谱法建立醋艾叶的指纹图谱,同时测定不同产地醋艾叶中异泽兰黄素和棕矢车菊素的含量,为醋艾叶质量评价提供依据.方法 采用Agilent Eclipse XDB-C18(4.6 mm×250 mm,5 μm)色谱柱;以乙腈(B)-0.2%甲酸 (A)为流动相,进行梯度洗脱;检测波长330 nm;流速:1.0 mL·min-1;柱温:25 ℃.结果 建立了醋艾叶HPLC指纹图谱,方法 学考察结果 符合指纹图谱技术要求,采用该方法 共检测了10批醋艾叶,共标定14个共有特征指纹峰;不同产地艾叶异泽兰黄素和棕矢车菊素含量存在差异.结论 本法准确、可靠,建立的高效液相色谱指纹图谱为醋艾叶的质量控制提供更全面的信息.
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HPLC法同时测定不同品牌艾条及艾柱中山奈酚、棕矢车菊素、异泽兰黄素的含量
目的:对不同品牌艾条及艾柱中主要有效黄酮的含量进行测定,为成品艾条及艾柱的质量控制提供参考.方法:采用DIONEX ULTIMATE 3000高效液相色谱仪(泵:LPG-3400SD Quaternary Analytical Pump,化学软件:CM-CHM-1:Server+1xTB1+Client+Control),紫外检测器(VWD-3100 Single Wavelength Detector),色谱柱为AgiLent ZORBAX Extend-C18(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为乙腈-0.2％磷酸溶液(50:50),流速为0.8 ml·min-1,检测波长为360 nm,检测器柱温为30℃,以山柰酚、棕矢车菊素、异泽兰黄素为对照品,对不同品牌艾条及艾柱中山柰酚、棕矢车菊素、异泽兰黄素的含量进行比较分析.结果:11批样品均含有山柰酚、棕矢车菊素、异泽兰黄素,但含量差别较大.山柰酚、棕矢车菊素和异泽兰黄素分别在0.049～0.244μg(r=0.9999)、0.095～0.475μg(r=0.9993)、0.190～0.590μg(r=0.9999)范围内,其质量和峰面积之间均呈良好的线性关系;平均加样回收率分别为100.69％,100.31％,100.14％;RSD分别为1.21％、1.24％、1.14％(n=5).结论:该方法操作简便、准确度高、重复性好,可作为艾条及艾柱中山柰酚、棕矢车菊素和异泽兰黄素的含量测定方法,也可用于艾条及艾柱的品质评价和质量控制.
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异泽兰黄素对肾癌786-O细胞增殖的抑制作用及分子机制
目的 探讨异泽兰黄素对肾癌786-O细胞增殖的影响及分子机制.方法 应用MTT法检测不同浓度(2.5、5.0、10.0、20.0、40.0 mmol/L)异泽兰黄素对肾癌786-O细胞活力的影响,流式细胞仪检测异泽兰黄素对肾癌786-O细胞凋亡的影响,Transwell检测异泽兰黄素对肾癌786-O细胞侵袭的影响,荧光定量PCR检测异泽兰黄素对肾癌786-O细胞miR-21表达的影响.转染病毒构建miR-21稳定表达细胞株,MTT、流式细胞仪和Transwell分别检测miR-21和异泽兰黄素对肾癌786-O细胞增殖、凋亡和侵袭的影响,Western blot法检测miR-21和异泽兰黄素对细胞内p-AKT、AKT、Bax和Bcl2蛋白表达的影响.结果 2.5、5.0、10.0、20.0、40.0 mmol/L异泽兰黄素作用肾癌786-O细胞,细胞活力显著降低,且呈现浓度依赖性.与正常对照组相比,异泽兰黄素作用细胞24 h能显著促进细胞凋亡(P＜0.01),抑制细胞侵袭(P＜0.01),抑制miR-21的表达(P＜0.01),且作用均具有浓度依赖性;Western blot结果显示,异泽兰黄素抑制AKT磷酸化水平和Bcl2蛋白表达,促进Bax蛋白表达,与正常对照组相比意义具有显著统计学差异.过表达miR-21能显著抑制异泽兰黄素诱导的细胞凋亡和侵袭,并抑制异泽兰黄素调控的p-AKT、Bax和Bcl2的表达.结论 异泽兰黄素可抑制肾癌786-O细胞miR-21的表达,通过激活AKT通路诱导细胞凋亡.
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RP-HPLC法同时测定艾叶及其炮制品中棕矢车菊素和异泽兰黄素的含量
目的:建立同时测定艾叶及其炮制品(醋艾叶、艾叶炭、醋艾炭)中棕矢车菊素和异泽兰黄素含量的方法,为控制艾叶及其炮制品质量提供新的评价指标.方法:采用反相高效液相色谱法.色谱柱为Agilent Eclipse XDB-C18(250 mm×4.6 mm,5 μm),流动相为乙腈-0.2％磷酸溶液(37∶63,V/V),流速为1.0 ml/min,柱温为25℃,检测波长为330 nm.结果:棕矢车菊素和异泽兰黄素的质量浓度分别在0.01～0.20、0.01～0.16 mg/ml范围内与各自峰面积积分值呈良好的线性关系(r分别为0.999 5、0.999 9);精密度、稳定性、重复性试验的RSD＜3％;平均加样回收率分别为99.72％、101.19％,RSD分别为1.48％、0.90％(n均为6).两种成分在艾叶、醋艾叶中含量较高,在艾叶炭和醋艾炭中含量极低或未检测到.结论:该方法简便、易行,测定结果准确、重复性好,可用于评价和控制艾叶和醋艾叶饮片的质量.
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HPLC波长切换法同时测定乳增宁胶囊中的9个主要成分
目的 采用HPLC波长切换法同时测定乳增宁胶囊中9个主要成分的含量.方法 采用Venusil MP C18色谱柱(250mm×4.6 mm,5μm),流动相为乙腈-0.2％甲酸溶液,梯度洗脱,流速0.8 mL·min-1,温度30℃,进样量10μL.结果 淫羊藿苷、宝藿苷Ⅰ、土贝母苷甲、土贝母苷乙、土贝母苷丙、棕矢车菊素、异泽兰黄素、柴胡皂苷a和柴胡皂苷d的线性范围分别为8.86 ～ 177.20、2.79 ～ 55.80、10.08 ～201.60、2.47 ～ 49.40、5.56 ～111.20、1.12 ～22.40、4.54 ～90.80、1.98 ～ 39.60、1.86～37.20 mg·L-1,r分别为0.9998、0.9997、0.9999、0.9993、0.9996、0.9999、0.9995、0.9997、0.9998;9种成分的平均加样回收率分别为99.54％、97.84％、100.16％、98.74％、97.79％、98.06％、99.31％、98.50％、97.71％,RSD分别为1.19％、1.40％、0.75％、0.99％、1.66％、1.27％、0.94％、1.13％、1.58％.结论 所用方法操作简便、重复性好、精密度高、稳定性好,可同时测定乳增宁胶囊中9种有效成分的含量.
