首页 > 文献资料
-
HPLC梯度洗脱法测定回春酒中淫羊藿苷、宝藿苷Ⅰ、西红花-Ⅰ和西红花-Ⅱ的含量
目的:采用高效液相色谱法测定回春酒(HCJ)中淫羊藿苷、宝藿苷Ⅰ、西红花苷-Ⅰ和西红花苷-Ⅱ的含量.方法:Hypersil C18色谱柱(4.6 mm×150 mm,5 μm),流速0.8 mL· min-1,流动相A为乙腈,B为1％冰醋酸溶液,检测波长270 nm(淫羊藿苷和宝藿苷Ⅰ);流动相A为乙腈-甲醇(2∶3),流动相B为0.5％磷酸溶液,检测波长440 nm(西红花苷-Ⅰ和西红花苷-Ⅱ).结果:淫羊藿苷和宝藿苷Ⅰ分别在0.054 6 ～1.092 μg (r=0.9997),0.076 2～1.524 μg(r=0.999 1)进样量与峰面积呈良好的线性关系,平均加样回收率分别为97.56％,99.17％,RSD分别为0.94％,0.77％,西红花苷-Ⅰ和西红花苷-Ⅱ分别在0.102 8 ～2.056 μg(r =0.999 4),0.060 4～1.208 μg(r =0.999 8)进样量与峰面积呈良好的线性关系,平均加祥回收率分别为97.54％,96.91％,RSD分别为0.90％,1.27％.结论:该方法测定结果准确、灵敏、重复性好.
-
超声波辅助酶解法制备宝藿苷Ⅰ
目的:优选宝藿苷Ⅰ的超声波辅助酶解工艺.方法:采用HPLC测定宝藿苷Ⅰ含量,色谱条件为Diamond C18色谱柱(4.60 mm×250 mm,5μm),流动相乙腈-水(25∶75),流速1.0 mL· min-,柱温30℃,检测波长270 nm.以宝藿苷Ⅰ转化率为指标,在单因素试验基础上,通过正交试验考察超声功率、pH、温度、酶用量及反应时间对超声酶解工艺的影响.结果:佳酶解条件为超声功率200W,pH5.0,温度40℃,酶用量5％,反应时间4h;宝藿苷Ⅰ转化率97.4％.结论:超声波辅助酶解法制备宝藿苷Ⅰ具有转化率高、反应温度低、反应时间短、酶用量少等优点,优选的工艺简单稳定,适合工业化生产.
-
HPLC梯度洗脱法同时测定参茸延龄片中补骨脂素、异补骨脂素、淫羊藿苷和宝藿苷Ⅰ含量
目的：建立高效液相色谱法同时测定参茸延龄片中补骨脂素、异补骨脂素、淫羊藿苷和宝藿苷Ⅰ含量的方法。方法采用Hypersil C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm)；流速：1.1 mL/min；流动相A 为乙腈-甲醇(2∶1),流动相B为0.1%冰醋酸溶液,梯度洗脱；检测波长分别为246 nm(补骨脂素和异补骨脂素)、270 nm(淫羊藿苷和宝藿苷Ⅰ)。结果补骨脂素、异补骨脂素、淫羊藿苷和宝藿苷Ⅰ分别在0.0332～0.6640μg(r＝0.9998)、0.0226～0.4520μg(r＝0.9991)、0.0294～0.5880μg(r＝0.9995)、0.0242～0.4840μg(r＝0.9994)范围内进样量与峰面积呈良好的线性关系,平均加样回收率分别为97.48%、98.44%、99.13%、98.71%,RSD分别为0.92%、1.39%、1.17%、1.21%。结论本方法简便、准确、灵敏、重复性好,可作为参茸延龄片中补骨脂素、异补骨脂素、淫羊藿苷和宝藿苷Ⅰ的含量控制方法。
-
宝藿苷Ⅰ的制备方法及药理作用研究进展
淫羊藿为小檗科植物淫羊藿Epimedium brevicomu、箭叶淫羊藿E.sagittatum、柔毛淫羊藿E.pubescens或朝鲜淫羊藿E.koreanum的干燥叶,在我国有着几千年的用药历史,具有补肾阳、强筋骨、祛风湿等功效.现代研究表明宝藿苷Ⅰ在淫羊藿中含量较低,但却有着广泛的药理作用,如抗骨质疏松、抗肿瘤、改善认知功能障碍、脑缺血再灌注损伤保护、神经保护等.鉴于宝藿苷Ⅰ诸多的生物学活性及药理作用,对其制备方法和药理作用的研究越来越成为关注的热点.该文对近年来宝藿苷Ⅰ的制备方法及药理作用的相关研究进行了汇总和整理,为更好的大量制备宝藿苷Ⅰ及合理开发利用提供参考.
-
淫羊藿苷仿生酶解过程的多因素考察
本实验对影响淫羊藿苷仿生酶解成宝藿苷Ⅰ的多种因素进行考察,并选择佳反应条件,为构建新型的淫羊藿苷仿生酶解给药系统提供研究基础.以酶解温度为37℃、缓冲溶液为人工肠液和人工胃液模拟体内环境,并以宝藿苷Ⅰ转化率为指标,考察酶的种类、酶活力、水解底物浓度、反应时间、人工肠液中胰酶及表面活性剂对宝藿苷Ⅰ生成的影响.结果表明:在人工胃液中纤维素酶、β-葡萄糖苷酶和蜗牛酶均失活,基本没有宝藿苷Ⅰ生成;人工肠液中胰酶对β-葡萄糖苷酶、蜗牛酶酶解反应没有明显影响(P＞0.05),但显著降低纤维素酶的活性(P＜0.05).人工肠液中β-葡萄糖苷酶酶解淫羊藿苷得到的宝藿苷Ⅰ多,佳反应条件为酶活力10 U·mL-1、底物浓度1 mg·mL-1和3 g·L-1鼠李糖脂,反应时间3h,此条件下宝藿苷Ⅰ转化率达99.8％.
-
二维斑马鱼模型联合色谱技术评价朝藿定A及其代谢物宝藿苷Ⅰ抗骨质疏松活性
以二维斑马鱼模型联合色谱技术筛选朝藿定A及其代谢物宝藿苷Ⅰ的抗骨质疏松活性,建立高效筛选中药抗骨质疏松活性成分新方法.用斑马鱼成鱼对朝藿定A的0.5％ DMSO溶液进行代谢,代谢液浓缩后用LC-MS分析、HPLC捕获代谢产物宝藿苷Ⅰ,用斑马鱼骨质疏松模型评价朝藿定A和宝藿苷Ⅰ的活性.结果表明朝藿定A和宝藿苷Ⅰ均能防止泼尼松龙诱导斑马鱼骨质疏松.该方法使朝藿定A的量微代谢产物得到富集、分离分析,通过在体斑马鱼抗骨质疏松模型简单、高效的筛选朝藿定A及代谢产物宝藿苷Ⅰ的抗骨质疏松活性,为早期、快速发现中药量微成分及其代谢物的抗骨质疏松活性提供新思路与方法.
-
宝藿苷Ⅰ磷脂复合物的制备及其抗肿瘤活性的初步研究
目的 制备宝藿苷Ⅰ磷脂复合物,并考察其体外抗肿瘤活性.方法 采用溶剂法制备宝藿苷Ⅰ磷脂复合物,应用差示扫描量热法(DSC)和X-射线粉末衍射法(XRD)对所制得的磷脂复合物进行表征,通过细胞毒性和细胞摄取实验考察其体外抗肿瘤活性.结果 差示扫描量热法和X-射线粉末衍射法图谱结果显示成功制备宝藿苷Ⅰ磷脂复合物,MTF实验表明,将宝藿苷Ⅰ制备成磷脂复合物后,其对乳腺癌细胞MCF-7增殖的抑制作用增强,细胞对药物的摄取率也有一定的提高.结论 与宝藿苷Ⅰ相比,宝藿苷Ⅰ磷脂复合物的抗肿瘤活性有所增强.
-
维生素E聚乙二醇1000琥珀酸酯对宝藿苷Ⅰ抑制乳腺癌细胞MCF-7增殖的影响
目的 考察非离子表面活性剂维生素E聚乙二醇1000琥珀酸酯(TPGS)对宝藿苷Ⅰ抑制乳腺癌细胞MCF-7增殖的影响.方法 MTT法测定宝藿苷Ⅰ对MCF-7的细胞毒性,用荧光显微镜观察宝藿苷Ⅰ的细胞摄取,并采用HPLC法测定细胞内的宝藿苷Ⅰ的量.结果 在应用TPGS后,宝藿苷Ⅰ对MCF-7增殖的抑制作用增强,在宝藿苷Ⅰ低浓度的情况下作用更显著;当宝藿苷Ⅰ与TPGS质量比分别为1∶1、1∶2、1∶4时,在MCF-7细胞培养2h的摄取率分别为29.51％、38.12％、40.37％,与仅用宝藿苷Ⅰ相比分别提高了27.92％、65.24％、74.99％.结论 TPGS能够增加MCF-7对宝藿苷Ⅰ的细胞摄取,并增强其对MCF-7的细胞毒作用.
-
维生素E聚乙二醇1000琥珀酸酯对Caco-2细胞模型转运宝藿苷Ⅰ的影响
目的 考察非离子表面活性剂维生素E聚乙二醇1000琥珀酸酯(TPGS)对宝藿苷Ⅰ在Caco-2细胞模型转运的影响.方法 采用Caco-2细胞模型研究不同浓度的TPGS对宝藿苷Ⅰ细胞转运行为的影响,以超高压液相色谱(UPLC)法测定细胞样品溶液中宝藿苷Ⅰ的浓度,计算表观渗透系数(Papp).结果 在应用TPGS后,宝藿苷Ⅰ从细胞绒毛面供给侧(AP)→基底面外侧(BL)的跨膜转运量明显增高(P＜0.05),外排比率显著下降(P＜0.05).当宝藿苷Ⅰ与TPGS比例分别为1:1、1:3、1:9时,宝藿苷Ⅰ的外排比率分别为1.978 8、1.779 8、1.609 0,与仅用宝藿苷Ⅰ相比分别下降了73％、76％、78％.结论 在Caco-2细胞模型上,TPGS可显著促进宝藿苷Ⅰ的吸收.
-
淫羊藿苷的肠菌代谢研究Ⅰ.肠内细菌对淫羊藿苷的代谢转化
目的:在考察淫羊藿苷(icariin)于人工胃液中稳定性的基础上,研究了肠道内细菌对淫羊藿苷的代谢作用.方法:于人工胃液或肠内菌培养液中,加入淫羊藿苷温孵培养一定时间后,以薄板层析、高效液相色谱仪和电喷雾质谱仪,对培养物成分做定性分析检查.结果:淫羊藿苷在人工胃液中有较高的稳定性.离体培养人肠道内细菌可代谢淫羊藿苷,且其主要代谢产物为淫羊藿苷的苷元(icaritin)及其苷元的异戊烯基位置异构体.在大鼠整体实验中,从粪便和尿液中均检出一主要代谢产物,并初步确定此代谢产物为宝藿苷Ⅰ (baoliuoside Ⅰ).结论:在离体条件下,淫羊藿苷可被人肠内菌代谢,主要代谢产物为淫羊藿苷的苷元.大鼠灌服淫羊藿苷后,吸收入血的主要代谢物为宝藿苷Ⅰ.
-
HPLC法测定复方鹿茸酒中尿囊素、山药素Ⅰ、淫羊藿苷、淫羊藿次苷Ⅰ和宝藿苷Ⅰ
目的 建立HPLC梯度洗脱法测定复方鹿茸酒中尿囊素、山药素I、淫羊藿苷、淫羊藿次苷I和宝藿苷I.方法 采用Agilent TC-C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相A:甲醇–乙腈(1:1)、流动相B:水,梯度洗脱;0~22 min在224 nm波长下检测尿囊素,22~45 min时在270 nm波长下检测山药素Ⅰ、淫羊藿苷、淫羊藿次苷Ⅰ和宝藿苷Ⅰ;体积流量0.9 mL/min;柱温30℃;进样量10μL.结果 尿囊素、山药素I、淫羊藿苷、淫羊藿次苷I和宝藿苷I分别在7.98~159.60μg/mL、4.75~95.00μg/mL、9.18~183.60μg/mL、4.54~90.80μg/mL、4.92~98.40μg/mL与峰面积线性关系良好;平均回收率分别为98.67%、96.86%、99.56%、98.15%、97.90%,RSD值分别为1.12%、0.85%、1.07%、1.49%、0.97%.结论 该方法简便、准确,重复性好,为进一步完善复方鹿茸酒的质量标准提供参考.
-
箭叶淫羊藿中化学成分及其体外抗肿瘤活性研究
目的 分离箭叶淫羊藿中的化学成分并对8-异戊烯基黄酮类化合物进行体外抗肿瘤活性筛选.方法 采用硅胶柱色谱、凝胶柱色谱和HPLC制备色谱方法分离纯化,根据理化性质和波谱分析方法鉴定其结构,利用MTT法对分离得到的异戊烯基黄酮类化合物进行体外抗肿瘤活性筛选.结果 分离得到7个黄酮类化合物,分别鉴定为淫羊藿苷(1)、淫羊藿素(2)、宝藿苷Ⅰ(3)、去甲淫羊藿素(4)、苜蓿素(5)、淫羊藿次苷Ⅰ(6)和朝藿定C(7).体外抗肿瘤结果表明,在0.5～1 00 μmol/L浓度,化合物2、3、4、6对人乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖具有明显抑制作用,并随浓度的增加抑制作用更加明显,48 h的IC50分别为12.43、35.44、11.53、16.31 μmol/L,化合物1、7活性很弱.结论 化合物3、4为首次从箭叶淫羊藿植物分离得到,化合物3有望成为靶向抗乳腺癌的候选药物.
-
淫羊藿中活性成分的代谢产物研究进展
淫羊藿为我国传统中药,具有补肾阳、强筋骨、祛风湿的功效.淫羊藿中主要活性成分是以淫羊藿苷为代表的黄酮苷类化合物.近年来研究发现淫羊藿给药后发挥功效的物质基础主要为其活性成分的代谢产物.综述近年来国内外对淫羊藿中活性成分的代谢产物的研究方法及代谢产物研究进展,对进一步阐明淫羊藿药材的作用机制、研制新药具有直接指导意义.
-
HPLC梯度洗脱联合波长切换法测定龟鹿补肾胶囊中7种成分的含量
目的 建立HPLC法同时测定龟鹿补肾胶囊中的7种成分.方法 采用Alltima C18色谱柱;以乙腈-体积分数0.2％磷酸溶液为流动相,梯度洗脱;切换波长检测,检测波长分别为330 nm(麦角甾苷、吉奥诺苷B1)和270 nm(朝藿定A、朝藿定B、朝藿定C、淫羊藿苷、宝藿苷Ⅰ);流速:0.8 mL·min-1;柱温:30℃.结果 7种成分的质量浓度与峰面积在测定范围内均呈良好的线性关系(r ＞0.999);平均加样回收率及相应的RSD分别为98.7％(1.6％)、97.9％(1.3％)、99.6％(0.8％)、97.7％(0.5％)、99.3％(1.4％)、96.9％(0.8％)和100.3％(0.6％).结论 本文作者建立的HPLC波长切换法同时测定龟鹿补肾胶囊中麦角甾苷、吉奥诺苷B1、朝藿定A、朝藿定B、朝藿定C、淫羊藿苷和宝藿苷Ⅰ,为龟鹿补肾胶囊质量的全面评价提供了科学依据.
-
新型双相酶水解体系制备宝藿苷Ⅰ
目的 构建新型双相酶水解体系制备宝藿苷Ⅰ.方法 单因素试验优化缓冲液pH值、酶与底物质量比、酶解时间、反应温度,并在淫羊藿苷处理量、酶重复使用、操作方便性方面上与传统酶水解法进行比较.结果 在醋酸-醋酸钠缓冲液(pH 4.0)和乙酸乙酯构建的双相酶水解体系中,当β-葡萄糖苷酶与淫羊藿苷的质量比为1∶1时,于55℃下反应6h后水解率达到100％,双相水解法可将淫羊藿苷处理量提高到60 mg/mL,是传统酶水解法的2倍,并且制备步骤得以简化.此外,双相酶水解体系中酶液使用2次后,淫羊藿苷转化率仍能达到98.58％.结论 该方法可高效、便捷地水解淫羊藿苷以获取宝藿苷Ⅰ,并实现了酶的重复利用.
-
香加皮单体成分宝藿苷I对食管癌细胞增殖及凋亡的影响
目的:研究香加皮单体成分宝藿苷Ⅰ在体内外对人食管癌细胞Eca109的增殖抑制作用及其对细胞凋亡的影响.方法:采用柱层析和高效液相色谱等逐步分离法对香加皮抗肿瘤活性成分进行分离和纯化,应用薄层层析和电喷质谱分析进行成分鉴定;采用MTT法分析不同浓度宝藿苷Ⅰ对食管癌细胞株Eca109增殖的抑制作用;应用FCM分析细胞周期变化和凋亡率变化;皮下注射Eca109细胞建立裸鼠移植瘤动物模型,通过肌肉注射给药检测宝藿苷Ⅰ的体内抗肿瘤效果;Western 印迹法检测移植瘤组织凋亡相关基因survivin的表达变化.结果:宝藿苷Ⅰ可明显抑制Eca109细胞的增殖(P<0.05),并呈浓度及时间依赖性.经宝藿苷Ⅰ作用48 h后,随着药物浓度的增加(12.5、25.0和50.0 μg/mL),Eca109细胞G0/G1期明显增加(P<0.05),S期和G2/M期细胞明显减少(P<0.05);经宝藿苷Ⅰ作用后,Eca109细胞的凋亡率随药物作用时间的延长(24、48和72 h)和宝藿苷浓度的增加(0、12.5、25.0和50.0 μg/mL)而明显升高(P<0.01);Eca109裸鼠移植瘤经宝藿苷Ⅰ(15 mg/kg)治疗后,肿瘤生长受到明显抑制(P<0.01),生长抑制率达(60.9±0.16)%;survivin的蛋白表达明显降低(P<0.05).结论:香加皮单体成分宝藿苷Ⅰ不仅在体外对Eca109细胞的增殖具有显著的抑制作用,在体内也有较好的抗食管癌效果.其抗瘤机制可能与阻滞Eca109细胞周期发展和诱导凋亡相关基因survivin的表达降低有关.
-
HPLC法同时测定淫羊藿药材中的5个黄酮类成分
目的:建立同时测定淫羊藿药材中5种成分的HPLC方法.方法:采用Diamonsil-C18柱(4.6 mm×250mm,5 μm);流动相:乙腈和甲酸水(pH=3.0),梯度洗脱;流速:0.9 mL/min;DAD检测,检测波长:270 nm.结果:淫羊藿药材中5个主要黄酮类成分朝藿定A、朝藿定C、淫羊藿苷、箭藿苷A、宝藿苷1分别在0.780 0～83.20μg/mL、2.081～222.0 μg/mL、3.288～350.7 μg/mL、0.8311～88.65 μg/mL、0.351 8～37.52μg/mL的浓度范围内呈良好的线性关系,低检测限分别为0.50、0.75、0.87、0.32、0.12μg/mL.重复性、稳定性实验结果的RSD<3%;各成分平均回收率均小于107%,RSD<6%.结论:该方法快速简便、准确可靠,各主要化学成分均能达到基线分离,适用于淫羊藿药材的质量控制.
-
香加皮单体成分宝藿苷Ⅰ对食管癌细胞及裸鼠移植瘤生长抑制作用研究
目的 研究香加皮单体成分宝藿苷Ⅰ在体内外对人食管癌细胞增殖作用的影响,以期为该成分用于临床治疗和预防食管癌提供实验依据.方法 采用逐步分离法包括柱层析和高效液相色谱等对香加皮抗肿瘤活性成分进行分离、纯化,应用薄层层析和电喷质谱分析进行成分鉴定.采用MTT法分析不同浓度宝藿苷Ⅰ对食管癌细胞株Eca109增殖的抑制作用,应用流式细胞术分析细胞周期变化和凋亡率变化;皮下注射Eca109细胞建立裸鼠移植瘤动物模型,通过肌肉注射给药检测宝藿苷Ⅰ的体内抗肿瘤效果.结果 宝藿苷Ⅰ可明显抑制Eca109细胞增殖(P＜0.05),并呈浓度及时间依赖性.经宝藿苷Ⅰ作用48 h后,随着药物浓度的增加,Eca109 G0/G1期细胞明显增加(P＜0.05),S期和G2/M期细胞明显减少(P＜0.05);经宝藿苷Ⅰ作用后,Eca109细胞的凋亡率随药物作用时间的延长和宝藿苷Ⅰ浓度的增加而明显升高(P＜0.01);经宝藿苷Ⅰ(15mg/kg)治疗荷Eca109细胞裸鼠后,肿瘤生长受到明显抑制(P＜0.01),生长抑制率达(60.9±0.16)%.结论 香加皮单体成分宝藿苷Ⅰ不仅在体外对Eca109细胞增殖具有显著的抑制作用,在体内也有较好的抗食管癌效果.其抗瘤机制可能与阻滞Eca109细胞周期发展和诱导细胞凋亡有关.
关键词： 宝藿苷Ⅰ 食管癌细胞株Eca109 裸鼠移植瘤 流式细胞术 -
高效液相色谱波长切换法同时测定微达康膏中的梓醇、刺五加苷B、刺五加苷E、淫羊藿苷和宝藿苷Ⅰ
目的建立HPLC波长切换法同时测定微达康膏中的梓醇、刺五加苷B、刺五加苷E、淫羊藿苷和宝藿苷Ⅰ的方法.方法 采用Waters Nova-pak C18色谱柱,以乙腈(A)-0.2％磷酸溶液(B)为流动相,梯度洗脱,流速0.9 mL·min-1.结果梓醇、刺五加苷B、刺五加苷E、淫羊藿苷和宝藿苷Ⅰ分别在4.53～90.60 μg·mL-1、6.18～123.60 μg·mL-1、3.92～78.40 μg·mL-1、7.51～150.20μg·mL-1、7.14～142.80 μg·mL-1与峰面积呈良好的线性关系,相关系数分别为0.9999、0.9998、1.000、0.9996、0.9999;平均加样回收率及相应的RSD分别为98.5％(1.2％)、98.9％(0.77％)、99.1％(0.90％)、97.5％(1.8％)、97.1％(0.84％).结论本方法快速、准确度高、专属性好,可用于微达康膏的质量控制.
-
高效液相色谱法同时测定金蚧片中尿苷、腺苷、淫羊藿苷和宝藿苷Ⅰ的含量
目的 采用高效液相色谱法同时测定金蚧片(Jinjie tablet)中尿苷、腺苷、淫羊藿苷和宝藿苷Ⅰ的含量.方法 Hypersil C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm);流速:1.1 mL·min-1;流动相A为乙腈,流动相B为0.1％磷酸溶液,梯度洗脱;检测波长为254 nm(检测尿苷和腺苷)、270 nm(检测淫羊藿苷和宝藿苷Ⅰ).结果 尿苷、腺苷、淫羊藿苷和宝藿苷Ⅰ线性范围分别为0.018 2～0.364 0 μg(r =0.999 3)、0.028 4～0.568 0 μg(r=0.999 1)、0.290 6～5.812 μg(r=0.999 7)、0.232 6～4.652 μg(r =0.999 5),平均加样回收率(n=6)分别为97.2％(RSD=1.3％)、98.1％(RSD=1.3％)、98.8％(RSD=1.1％)、99.5％(RSD=0.76％).结论 该方法准确、灵敏、重复性好,可用于金蚧片中含量测定.
