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自制微型轴流血泵对缺血后心脏左心辅助机制的实验研究
目的应用自制微型轴流血泵对正常心脏及衰竭心脏进行辅助,探讨血泵的心脏辅助机制.方法对8只绵羊在心衰前后分别开关血泵进行自身比较,观察在正常和心衰时开关血泵对血流动力学指标的影响,并通过计算压力作功指数观察心肌耗氧量(MVO2)的变化.结果心衰时,血泵能显著提高总心排量[(2.69±0.16)L/min,与关泵时(2.30±0.15)L/min比较,P＜0.01];血泵可以提高平均动脉压(P＜0.001),在心脏正常时主要是由于舒张压的升高而引起的,与对照组比较,P＜0.01;心衰时血泵使收缩压和舒张压均显著升高[(85.1±3.5)mm Hg(1mmHg=0.133kPa)和(80.8±5.1)mmHg,与关泵比较,P＜0.01];血泵显著降低了左室舒张末压和左房压(P＜0.01),在心衰时可降低左室心肌大收缩速度(Dp/Dtmax)[(333±92)mmHg/s,P＜0.001],血泵显著降低了心脏左室外部作功和作功指数,减少了MVO2;在心衰时,当辅助流量占总心排量的100%时,MVO2降低48%;结论在不完全左心辅助时,主要通过减轻左室容量负荷减少左室MVO2;当达到完全辅助时,容量和压力负荷的减少均为左室MVO2减少的原因,且此时MVO2下降幅度大为48%.
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体外诱导小鼠胚胎干细胞分化为肝细胞的研究
目的基于肝脏发育生物学进展,建立有效诱导胚胎干细胞(ESC)向肝细胞分化的体外培养体系.方法小鼠ESC细胞系E14,在内含1000 U/ml的rmLIF的无饲养层高糖DMEM培养基中培养,去除rmLIF后用悬滴培养法制备成拟胚体.依次加入10-7M的Dexamethasone、10μg/L的FGF-4、25μg/L的HGF等诱导因子,继续培养1～2周.然后取分化细胞,行细胞形态学观察、免疫细胞化学染色检测白蛋白和CK8/18的表达、RT-PCR检测白蛋白和转甲状腺蛋白等肝细胞特征性蛋白的mRNA转录水平.糖原染色、尿素合成功能检测则对其功能进行检验.结果ESC体外培养生长旺盛,呈"巢状"克隆性增殖.去除rmLIF后悬浮培养,一般2～3 d可制备成拟胚体.序贯加入Dex、FGF-4和HGF等诱导因子进行分化培养后,约于ED12可见分散、克隆样增殖的小上皮样细胞集落,ED19左右有较多细胞分化为多角形的肝细胞样细胞.免疫组化染色,见胞浆内出现棕黄色颗粒,表达肝细胞特有的白蛋白以及CK8/18等蛋白.RT-PCR显示有白蛋白、转甲状腺蛋白等的mRNA转录.糖原染色见胞浆内存在红色颗粒,呈阳性反应;尿素合成功能检测显示,培养液内可见尿素氮的逐日升高,说明细胞具有肝细胞特有的糖原合成、尿素合成和分泌功能.结论加入FGF-4、HGF和Dex等肝脏胚胎发育时期的关键性调控因子的体外培养体系可以诱导胚胎干细胞分化为肝细胞样细胞.
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应用神经示踪技术观察先天性马蹄内翻足大鼠腓肠肌运动神经元的变化
目的观察先天性马蹄内翻足大鼠支配腓肠肌的脊髓运动神经元数量和形态的变化,为先天性马蹄内翻足病因学说中神经肌肉病变学说的研究提供客观依据.方法用全反式维甲酸(all trans-Retinoic acid,at-RA)诱导大鼠产生先天性马蹄内翻足动物模型,将胎儿外科与显微注射技术相结合,对正常胎鼠和先天性马蹄内翻足胎鼠支配腓肠肌的脊髓运动神经元用荧光金(fluorogold,FG)进行逆行性神经示踪,留取脊髓标本进行冰冻切片,在荧光显微镜下进行FG标记神经元的定量计数和形态观察.结果荧光金标记的神经元主要分布在脊髓前角腹外侧区.RA致畸组中合并神经管发育异常的胎鼠,脊髓冰冻切片未计数到形态正常的FG标记神经元,实验中共有10只胎鼠;未合并神经管发育异常的胎鼠脊髓冰冻切片可观察到FG标记神经元,计数的实验胎鼠数量为25只,其神经元数量比对照组减少、细胞体积较小、突触间联系减少.神经元计数结果为:对照组FG标记神经元数量为(441±222)个;RA致畸组FG标记神经元数量为(266±134)个.结论腰骶段脊髓运动神经元的发育异常可能直接影响其支配部位的肌肉,产生肌肉结构异常和功能障碍,引起肌力不平衡导致足部骨骼形态的改变,终形成先天性马蹄内翻足畸形的病理改变.
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无神经节细胞症大鼠结肠上皮离子转运的变化
目的建立一种适合骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)移植的实验性无神经节细胞症大鼠模型,并探讨模型大鼠结肠上皮离子转运的变化.方法 8～9周龄SD大鼠80只,随机分为二组.氯胺酮麻醉下开腹,实验组用0.1%苯扎氯铵(benzalkonium chloride,BAC)处理大鼠降结肠浆膜40 min,温盐水冲洗后关腹,对照组用生理盐水代替苯扎氯铵.分别于术后1、2、3、4、8周进行大体观察、钡灌肠X线检查,结肠测压、取处理段结肠行组织学检查,利用短路电流技术检测结肠上皮离子转运的变化.结果 BAC处理后1周,实验组大鼠出现腹胀,处理段结肠狭窄,反射性收缩消失,近端结肠扩张,且随着时间延长症状加重.组织学检查发现BAC处理后1周结肠神经节细胞明显减少、空泡变,3周后完全消失.短路电流检测提示,与对照组比较,实验组大鼠结肠上皮各时间点跨膜电压、基础电流明显降低,而钠离子吸收电流占基础电流的百分比升高.另外,由Forskolin所引起的氯离子分泌电流也明显高于对照组,但二苯胺-2,2'-二羧酸阻断Forskolin所引起的Isc的百分比下降且小于1,而结肠跨膜电阻二组之间无差异.结论①采用0.1% BAC处理降结肠浆膜成功建立了实验性无神经节细胞症大鼠模型,为进一步结肠内MSCs移植分化为神经细胞的研究奠定了基础; ②实验性无神经节细胞症大鼠模型结肠黏膜屏障功能未受损伤, 结肠上皮离子转运功能紊乱, 提示巨结肠大便排空困难除与失神经之后的平滑肌和括约肌功能失调有关外,可能还与结肠离子转运的变化有关.
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有机磷农药-敌敌畏诱导建立大鼠尿道下裂模型的实验研究
目的尝试用有机磷农药-敌敌畏建立尿道下裂大鼠模型,敌敌畏与尿道下裂发生的关系.方法40只孕鼠,分成3组:生理盐水对照组(CG)10只;敌敌畏高剂量组10只;敌敌畏低剂量组20只.在大鼠怀孕12～17 d期间,每组每天分别给予管喂生理盐水1.5～2 ml/d,敌敌畏20 mg·kg-1·d,敌敌畏10 mg·kg-1·d-1.待孕大鼠分娩完毕,即对新生大鼠点数并在普通放大镜及解剖显微镜下观察雄性新生鼠的阴茎包皮外观、尿道口位置、称体重和测量肛生殖距离(AGD).结果敌敌畏高、低剂量组均诱导出了大鼠尿道下裂,两组间发生率无统计学差异(P＞0.05),对照组大鼠的生殖器未见异常改变;各组新生大鼠的AGD、体重比较有统计学差异(P＜0.05).敌敌畏可使新生大鼠的AGD明显缩短,体重明显减轻,并显示与敌敌畏有剂量依赖关系.结论①用有机磷农药-敌敌畏成功建立的尿道下裂大鼠模型可为研究尿道下裂病因学和预防干预措施提供进一步研究的基础;②首次采用有机磷类农药诱导出大鼠尿道下裂畸形,同时有缩短AGD和减轻新生大鼠体重的作用,从实验动物学角度支持了流行病学的研究发现,有机磷农药可能作为一种环境内分泌干扰物质,是尿道下裂发病率增加的原因之一.
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葛根总黄酮治疗去势大鼠鼻粘膜萎缩的研究
目的:探讨葛根总黄酮治疗去势大鼠鼻粘膜萎缩的效果.方法:将60只成年雌性大鼠随机等分为4组:第1组:为正常对照组;第2组:行去势处理;第3组:于去势后以维尼安治疗.第4组:于去势后以葛根总黄酮治疗.对各组动物鼻中隔粘膜进行光镜、电镜观察;抽血测定血清雌二醇水平.结果:去势后30 d鼻粘膜呈萎缩性改变;经维尼安、葛根总黄酮胃灌注治疗30 d后.鼻粘膜可恢复正常的形态结构.去势30 d后动物血清雌二醇水平与正常组比较明显下降,差异有显著性意义(P＜0.05);经维尼安治疗,血清雌二醇水平更趋于下降(P＜0.05);经葛根总黄酮治疗后,血清雌二醇水平可恢复正常(P＞0.05).结论:葛根总黄酮可恢复去势大鼠的雌激素水平.对由于雌激素水平下降所致的鼻粘膜萎缩有较好的治疗作用.
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生物型人工食管的实验研究
目的生物型人工食管重建食管 , 探索解决术后吻合口瘘及晚期狭窄的途径 . 方法 30只中国杂种犬经右侧开胸切除胸段食管 , 并以 8 cm长生物型人工食管进行重建 , 观察愈合过程 . 结果 30只犬存活率 81 5%(22/27) , 围手术期存活率 93 3%(28/30) . 吻合口瘘发生率 6 7%(2/30) . 术后平均 28 8 d人工食管脱落 , 术后 60～75 d出现不同程度狭窄 , 13例狭窄经扩张而缓解 , 5例需放置支架 . 病理结果显示新生食管由纤维结缔组织构成 , 其内面覆盖鳞状上皮 , 上皮下可见血供 . 结论生物型人工食管植入后 , 可短暂替代食管 , 并由机体修复为有上皮组织爬覆的纤维结缔组织新生食管 , 新生食管的后期狭窄经妥善的内科治疗可缓解 , 故人工食管可望成为有效的食管重建方式之一 ; 解决植入长度及减轻狭窄是今后研究的重点 .
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黄连解毒汤对内毒素类炎症模型小鼠血中白细胞介素2的影响
为进一步探讨黄连解毒汤(黄连、黄柏、黄芩、栀子组成)对T细胞来源的细胞因子的调节作用,采用腹腔注射D-氨基半乳糖和脂多糖攻击小鼠造成内毒素类炎症模型,用放射免疫法检测观察了黄连解毒汤对该模型小鼠血清白细胞介素2(IL-2)的影响.结果表明黄连解毒汤在2.5kg/L、1.25kg/L剂量时可有效提高IL-2水平.提示黄连解毒汤可升高T细胞来源的细胞因子IL-2水平.
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正常及光感受器损伤兔眼视网膜下芯片植入后的电生理结果
目的 观察视网膜下芯片所引起的光感受器损伤及正常兔眼的电生理改变.方法 青紫蓝兔共30只,其中22只兔NaIO3生理盐水溶液静脉注入后眼光感受器受到损伤.将一个由90个微光电二极管组成的阵列和相连电极构成的直径约3 mm的芯片通过巩膜切口植入4只正常及22只注药后光感受器损伤兔右眼的视网膜下腔或脉络膜中,左眼为对照眼;分别检测芯片眼及对照眼局部闪光视觉诱发电位(F-VEP)、局部闪光视网膜电图(F-ERG)、全视野闪光VEP及全视野闪光ERG.另外4只兔双眼摘作病理检查.结果 22只色光感受器损伤兔中有11只芯片眼的局部ERG主波振幅明显大于对照眼;4只正常兔中,2只芯片眼的局部ERG主波振幅大于对照眼.1只芯片眼表面视网膜出现破孔不能引出任何波.局部VEP及全视野闪光VEP重复性较差,全视野闪光ERG未见明确差别.结论 植入的芯片在受到光刺激后可刺激局部视网膜并引起局部视网膜的电活动.
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SD大鼠视网膜神经细胞培养上清液对胚胎干细胞体外分化的诱导作用
目的探讨视网膜神经细胞培养的上清液对胚胎干细胞(embryonic stem cells, ES)体外分化的诱导作用. 方法收集SD大鼠视网膜神经细胞培养上清液,抽滤后按2∶3比例与DMEM培养液混合,用该混合液进行ES 细胞的诱导分化,每天倒置相差显微镜观察ES细胞的生长及分化情况,对诱导分化后的细胞进行神经丝蛋白(nellcofilament protein,NFP)免疫组织化学检查. 结果加入了视网膜神经细胞培养上清液的ES细胞生长出类似神经细胞突起样结构,NFP免疫组织化学染色阳性. 结论 SD大鼠视网膜神经细胞培养的上清液具有诱导ES细胞向神经细胞分化的作用.
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兔眼玻璃体腔注射国产美罗培南的视网膜毒性研究
美罗培南系第二代碳青霉烯类高效广谱抗生素,已广泛用于治疗严重感染性疾病和混合感染性疾病[1].国产美罗培南对葡萄球菌、绿脓杆菌等多种眼内炎常见致病菌的体外抗菌活性较强,小抑菌浓度(MIC90)为2～32 μg/ml[2,3],对细菌性眼内炎是一种理想的治疗药物,尤其是致病菌尚不明确时,但眼内用药未见报道.本研究希望通过动物实验观察玻璃体腔注药后的视网膜毒性,为临床眼内用药提供实验依据.
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视网膜S抗原的制备和提纯方法的改进
实验性自身免疫性葡萄膜炎(EAU)是由CD4+T淋巴细胞介导的器官特异性炎症,可由多种视网膜蛋白诱发,主要有视网膜可溶性抗原(S-Ag)、光感受器间维生素A类结合蛋白(IRBP)和视紫红质等,其中以S抗原诱发的葡萄膜炎更具有临床意义[1].由于S抗原所致葡萄膜炎的活性与其纯度呈正相关,所以S抗原的纯化尤为重要.我们将Al-Mahdawi等[2]的方法进行改进简化,获得了较高纯度的牛视网膜S抗原,并免疫Lewis大鼠成功地复制出EAU模型.现将结果报告如下.
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大鼠发育过程中视皮层神经元电生理与形态学特性的相关性——细胞内染色研究
目的研究大鼠不同发育阶段视皮层神经元电生理学与形态学特性的关系,观察电生理特性和形态变化的同步化程度,认识正常视觉发育的细胞内机制. 方法应用脑片膜片钳全细胞记录技术和细胞内标记相结合的方法, 获得4～28 d Sprague-Dawleg(SD)大鼠视皮层神经元的细胞内微电极记录,再进行细胞内标记和组织学染色. 结果成功标记23例细胞,其中锥体细胞与非锥体细胞在电生理特性上差异有显著性.不同发育阶段视皮层神经元形态学上的成熟度不同. 结论①视觉发育过程中,视皮层锥体细胞和非锥体细胞的电生理学特性反映其参与不同的视皮层神经元回路的整合功能.②视觉发育可塑性关键期内,视皮层神经元形态和电生理特性变化的同步化程度大于视皮层下结构.
