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小鼠Cdc25B融合蛋白构建和表达
目的 研究小鼠N末端缺失286氨基酸的野生型Cdc25B原核表达载体的构建和表达.方法 应用Primer5.0软件分析并设计小鼠Cdc25B5'及3'端引物(N末端缺失286氨基酶),化学合成并用聚合酶链反就(PCR)方法扩增,经限制性内切酶酶切后连接原核表达载体PGEX4T-2,构建成PGEX4T-2-Cdc25B融合表达载体,转化大肠埃希菌BL21后,通过异丙基硫代-β-D半乳糖苷(IPTG)诱导进行目的蛋白表达.结果 通过双酶切、电泳分析及测序证明成功构建了Cdc25B融合表达载体,融合蛋白产物经蛋白印迹(Western blot)显示,相对分子量为53KD的蛋白谱带,与预期一致.结论 成功构建并表达了Cdc25B-N末端缺失的基因,并在原核细胞中获得较高水平的表达,为近一步研究Cdc25B的功能提供基础依据.
关键词： CDC25B 基因表达 谷胱甘肽转移酶(GST) 聚合酶链式反应 -
ZHX2-GST融合蛋白原核表达载体的构建和鉴定
目的:构建编码ZHX2-GST融合基因的原核表达载体,在大肠杆菌中表达并对融合蛋白(ZHX2-GST)进行鉴定.方法:RT-PCR提取正常肝组织的RNA,然后扩增出ZHX2基因cDNA全长,克隆至含有GST标签的原核表达载体PGEX-4-1中,转化到Ecoli.BL21(DE3),IPTG诱导大肠杆菌表达ZHX2-GST蛋白,电泳分离鉴定.结果:测序结果显示克隆的ZHX2 cDNA序列正确,SDS-PAGE鉴定表达产物分子量118 ku,与ZHX2-GST分子量相符.结论:成功构建了编码ZHX2基因的ZHX2-GST原核表达载体,融合蛋白可用于临床及实验研究.
关键词： ZHX2 谷胱甘肽转移酶(GST) 融合蛋白 原核表达 -
HEV-GST融合蛋白的表达、纯化及鉴定
目的 利用谷胱苷肽转移酶(GST)蛋白纯化系统表达、纯化和鉴定HEN-GST融合蛋白.方法 将标记有GST的重组大肠杆菌E.coli BL21诱导表达HEV-GST融合蛋白,采用GST蛋白纯化系统进行纯化、所得产物进行SDS-PAGE和Western Blot鉴定.结果 大肠杆菌细胞高效表达出约43Kd蛋白,其分子量与HEV-GST分子量相符,经Western Blot显示所纯化蛋白能被抗GST抗体识别.结论 GST大肠杆菌表达系统中高效表达的HEV-GST融合蛋白可用于临床及实验研究.
