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PCB153对PBDE-47致SH-SY5Y细胞氧化应激和8-羟基脱氧鸟苷含量的影响
目的 探讨PCB153和PBDE-47单独及联合染毒对SH-SY5Y细胞氧化应激及8-羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)含量的影响.方法 设DMSO溶剂对照组,1、5、10μmol/L PBDE-47(低、中、高)单独染毒组和与5μmol/LPCB153联合染毒组及相应的抗氧化剂组(N-乙酰-L-半胱氨酸NAC 100μmol/L),分别对SH-SY5Y细胞染毒24h.用荧光染料DCFH-DA标记法和高效液相色谱-电化学技术(HPLC-ECD)分别检测细胞内活性氧(ROS)水平和8-OHdG的含量.结果 随着染毒剂量的增加,PBDE-47单独染毒组ROS水平有逐渐增高的趋势,但与对照组及其相应的PCB153联合组相比,ROS水平无明显差异(P>0.05).中、高联合染毒组ROS水平与对照组相比显著增加(P<0.05),并显著高于相应的单独剂量染毒组(P<0.05),加入抗氧化剂后细胞内ROS水平明显下降(P<0.05),细胞内ROS水平与PBDE.47染毒剂量呈现剂量.效应关系;高剂量PBDE.47单独染毒组和中、高剂量联合染毒组8-OHdG的含量与对照组相比均有明显的增加(P<0.05),高剂量联合染毒组8-OHdG含量明显高于相应的单独染毒组(P<0.05),加入抗氧化剂后其细胞内8-OHdG含量明显下降(P<0.05).细胞内ROS水平与8-OHdG含量呈正相关关系(r=0.895).结论 一定剂量的PBDE-47可致DNA氧化损伤,PCB153可增加PBDE-47对SH-SY5Y细胞DNA的氧化损伤作用,提示活性氧在PBDE-47致DNA损伤方面发挥了重要作用.
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PCB153对PBDE-47致SH-SY5Y细胞DNA损伤和修复基因表达的影响
目的 探讨PCB153和PBDE-47单独及联合染毒对SH-SY5Y细胞DNA损伤及其修复基因表达的影响.方法 设DMSO溶剂对照组,1、5、10μmol/L PBDE-47(低、中、高)单独染毒组和与5μmol/L PCB153联合染毒组及相应的抗氧化剂组(N-乙酰-L-半胱氨酸NAC 100μmol/L),分别对SH-SY5Y细胞染毒24h.用单细胞凝胶电泳试验测定DNA损伤情况,用Real Time PCR检测DNA损伤修复酶XRCCI及XRCC3 mRNA表达情况.结果 中、高剂量单独染毒组和中、高剂量联合染毒组细胞尾部DNA百分率、Olive尾距均显著高于对照组(P＜0.05),且呈现明显的剂量.效应关系,中、高联合染毒组细胞尾部DNA百分率、Olive尾距均显著高于相应的PBDE-47或PCB153单独染毒组(P＜0.05),加入抗氧化剂后其细胞尾部DNA百分率及Olive尾距均明显下降(P＜0.05),高剂量联合组对细胞DNA损伤具有交互作用(F=23.74,P＜0.01);高剂量染毒组及中、高剂量联合染毒组XRCC1 mRNA表达与对照组相比均明显下降(P＜0.05),加入抗氧化剂后其XRCCI mRNA表达上升(P＜0.05);高剂量单独和联合染毒组XRCC3 mRNA表达与对照组相比均明显上升(P＜0.05),加入抗氧化剂后可使XRCC3 mRNA表达明显下降(P＜0.05).相关分析结果表明,细胞DNA损伤与XRCC1mRNA的表达呈负相关,与XRCC3 mRNA的表达呈正相关(r分别为0.74,0.76,P＜0.05).结论 一定剂量的PBDE-47可导致DNA损伤和影响DNA损伤修复基因的表达,PCB153可增强PBDE-47对细胞DNA的损伤作用,氧化应激可能在PBDE-47致DNA损伤过程中发挥了重要作用.
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PCB153对人肾上皮细胞中LINE-1表达及转座的影响
[目的]探究2,2',4,4',5,5'-六氯联苯(PCB153)对人肾上皮细胞系(293T)细胞中长散在重复序列-1(LINE-1)基因表达和转座的影响.[方法] 293T细胞每2d传代一次,传代后立即使用5μmol/L PCB153进行染毒.染毒后的细胞置于37℃、体积分数5％CO2培养箱中继续培养,连续染毒10d.同时设置二甲基亚砜(DMSO)对照组.采用实时荧光定量PCR技术检测LINE-1开放阅读框1(ORF-1和开放阅读框2(ORF-2)基因的mRNA表达水平及拷贝数,LINE-1拷贝数增加反映其发生转座.Western blot检测LINE-1 ORF-1和ORF-2蛋白表达水平.[结果]与对照组比较,从第4天开始PCB153染毒组细胞中LINE-1 ORF-1 mRNA表达水平增加(P＜0.05),从第6天开始PCB153染毒组细胞中LINE-1 ORF-2 mRNA表达水平增加(P＜0.05).染毒第10天时,与对照组(LINE-1 ORF-1:2.74±0.51;LINE-1 ORF-2:0.57±0.10)相比,PCB153染毒组的LINE-1 ORF-1蛋白表达水平(4.39±0.85)和LINE-1 ORF-2蛋白表达水平(0.78±0.10)均明显增加(P＜0.05).染毒第10天时,PCB153染毒组与对照组的LINE-1 ORF-1拷贝数分别为1.43±0.64和0.83±0.37,LINE-1 ORF-2拷贝数分别为1.11±0.52和0.81±0.12,差异均具有统计学意义(P＜0.05).[结论] PCB153暴露可增加LINE-1的表达和拷贝数,诱导其转座.
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PCB153诱导小鼠胚胎细胞凋亡对胚胎生长发育的影响
目的 探讨环境雌激素多氯联苯同系物PCB153对发育过程中小鼠胚胎细胞凋亡的影响.方法 于体外施予孕8.5 d小鼠胚胎不同浓度PCB153,应用植入后全胚胎培养技术培养胚胎;采用原位TUNEL技术观察胚胎细胞凋亡.结果 PCB153对胚胎发育具有明显影响且呈剂量-效应关系,且随PCB153浓度增加,凋亡细胞比值上升.结论 PCB153能诱导胚胎细胞凋亡,这与其致胚胎发育异常有关,可能是PCB153的致畸作用机制之一.
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应用小鼠体外全胚胎培养方法研究多氯联苯同系物PCB153对胚胎发育的影响
目的探讨多氯联苯同系物PCB153对胚胎生长发育的影响及其作用机制.方法于体外将孕8.5d小鼠胚胎置入不同浓度PCB153,应用植入后全胚胎培养技术研究PCB153对胚胎生长发育的影响;透射电镜观察PCB153对卵黄囊的损害.结果PCB153对胚胎发育具有明显影响且呈剂量-效应关系.0.10ng/ml组除卵黄囊循环稍差外,其余指标与对照组一致或差异不显著(P＞0.05);1.00ng/ml组明显影响卵黄囊循环、头长、颅臀长、体节数、中脑、后脑、翻转、鳃弓和上下颌突等指标,与对照组比较P＜0.05;10.00ng/ml组,各指标进一步降低(P＜0.01),胚胎致畸率升高并出现死亡;电镜发现,PCB153处理的各实验组卵黄囊超微结构遭到不同程度破坏.结论PCB153使胚胎发育迟缓、具有发育毒性和致畸性,作用的敏感部位主要是卵黄囊、头长、颅臀长、中脑和鳃弓;卵黄囊的超微结构损害与PCB153致胚胎发育异常有关.
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PCB153对原代培养大鼠睾丸支持细胞SOD活性、DNA损伤及凋亡的影响
目的:探讨2,2',4,4',5-五氯联苯(2,2',4,4',5-hexachlorobiphenyl,PCB153)暴露对原代培养大鼠睾丸支持细胞(Sertoli cells,SC)超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性、DNA损伤、细胞凋亡的影响以及抗氧化剂N-乙酰半胱氨酸(N-acetyl-L-cysteine,NAC)的干预作用.方法:原代培养出生18～20 d雄性SD大鼠的睾丸支持细胞,设PCB 153不同浓度的染毒组(加人10、20、30 μmol/L PCB153),NAC组(以300 μmol/L NAC预处理1h后加人30 μmol/L PCB153),和对照组(加入与PCB153大染毒量等体积的DMSO),各组细胞经土述处理后继续培养24 h,用SOD试剂盒测定各组细胞SOD活性,彗星实验测定DNA损伤程度,流式细胞术检测细胞凋亡,细胞荧光标记观察凋亡形态.结果:染毒24 h后,大鼠睾丸支持细胞SOD活性随着PCB 153染毒剂量的升高而降低,20、30 μmol/L染毒组显著低于对照组(P<0.05),NAC预处理可提升SOD活性(P<0.05).各PCB153处理组及NAC预处理组与对照组相比,DNA损伤间的差异均无统计学意义(P>0.05),细胞凋亡率则均显著增加(P<0.05),NAC预处理可降低PCB153所致的凋亡率(P<0.05).结论:10～30 μmol/L PCB 153染毒24 h可诱导的原代培养大鼠SCSOD活性降低,细胞凋亡增加,但并未引起DNA损伤,NAC预处理具有保护作用.
