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不同来源家蝇幼虫分泌物对猪蛔虫卵发育影响
目的 分别从饲养家蝇幼虫的饲料残渣及幼虫浸液中提取家蝇幼虫分泌物,初步纯化后观察对猪蛔虫卵发育的影响.方法 将家蝇幼虫饲料残渣或3龄幼虫浸泡于适量蒸馏水中4h,吸取浸液用硫酸胺盐析或透析的方法分离分泌物,所得分泌物分别制成虫卵培养液,观察培养液中猪蛔虫卵发育情况.同时,设立不含家蝇幼虫分泌物的培养液为阴性对照.结果 从饲料残渣和幼虫浸液中提取的分泌物0～30%,30%～50%的盐析蛋白液、盐析上清液对虫卵发育均无影响;50%～80%的盐析蛋白液、透析外液可明显阻碍虫卵的发育.结论 家蝇幼虫饲料残渣和幼虫浸液中提取的幼虫分泌物均可阻碍猪蛔虫卵的发育,活性物质主要集中在50%～80%的盐析沉淀部分,其分子量<14KD.
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家蝇幼虫血淋巴提取物抗肿瘤作用
目的 探讨家蝇3龄幼虫血淋巴40％固相萃取组分抗肿瘤作用及机制.方法 应用四甲基偶氮噻唑蓝(MTT)法检测40％固相萃取组分对S180肉瘤细胞株生长的抑制作用；通过体内试验检测40％固相萃取组分对S180小鼠实体瘤生长的抑制率,测定荷瘤小鼠血清总抗氧化能力(T-AOC)、超氧化物歧化酶(SOD)活力、丙二醛(MDA)含量变化.结果 在体外,40％固相萃取组分25 μg/mL对S180肉瘤细胞增殖抑制率高达79％,与阴性对照组比较差异有统计学意义(t =6.40,P＜0.05)；40％固相萃取组分有抑制S180实体瘤小鼠肿瘤生长的作用,高、中、低剂量组肿瘤生长抑制率分别为46.23％、35.23％、32.13％；与模型对照组(3.19 ±0.80)、(163.41±22.65) U/mL比较,3个剂量组的血清T-AOC和SOD活性均升高,其中高剂量组小鼠血清T-AOC和SOD活性分别为(4.91±0.46)、(213.19 ±43.37) U/mL,差异均有统计学意义(tT-AOC=7.12、tSOD=-7.16,P＜0.01)；3个剂量组的血清MDA含量均降低,其中高剂量组血清MDA含量为(8.85±1.81) nmol/mL,差异有统计学意义(tMDA=6.79,P＜0.01).结论 40％固相萃取组分在体外和体内均具有抑制S180肉瘤细胞生长的作用,清除自由基可能是其体内抗肿瘤机理.
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家蝇幼虫分泌型抗菌肽对小鼠免疫功能影响
目的 探讨家蝇幼虫分泌型抗菌肽对正常小鼠免疫功能影响.方法 选用BalB/c小鼠,随机分为对照组(生理盐水)和家蝇幼虫分泌型抗菌肽(腹腔注射)5、10、20 mg/kg组,每天1次,7d后处死小鼠,测量体重、胸腺/体重比值、小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞能力、刀豆蛋白A诱导小鼠脾T淋巴细胞转化率、碳粒廓清能力及半数溶血值.结果 10、20 mg/kg抗菌肽组小鼠脾脏指数分别为(7.41±0.93)和(7.56±1.05),胸腺指数分别为(3.80±0.69)和(3.51±1.02),巨噬细胞吞噬率为(38.81±7.88)％和(40.16±9.74)％,脾脏酸性磷酸酶活性分别为( 268.60±36.64)、(270.48±54.62) U/g,脾T淋巴细胞转化率分别为(0.31±0.11)％和(0.32±0.09)％,与对照组比较,差异有统计学意义(P均＜0.05).抗菌肽组小鼠体重及血清半数溶血值与对照组比较,差异无统计学意义(P＞0.05).结论 家蝇幼虫分泌型抗菌肽对小鼠具有增强免疫功能作用.
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家蝇幼虫分泌型抗菌肽对大肠埃希菌抑制作用
目的 探讨家蝇幼虫分泌型抗菌肽的抗菌机制.方法 利用透射电镜、十二烷基硫酸钠(SDS)-聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)及流式细胞仪等技术初步探索了家蝇幼虫分泌型抗菌肽对大肠埃希菌作用机理.结果 经20、40及80 μg/mL抗菌肽作用后,大肠埃希菌液的A570值分别增加了0.170、0.032、-0.030,对照组增加了0.363;菌体外胞内酶含量各组分别增加0.148、0.230、0.324,对照组无变化;电镜观察显示抗菌肽可使菌体皱缩,细胞内容物外泄;SDS-PAGE检测发现,作用后菌体的某些蛋白条带浓度降低或消失,有新的条带出现;流式细胞仪显示抗菌肽作用后处于细胞周期中复制期(R期)的细菌量只占总数的11.89％,而对照组占45.25％,比实验组高33％.结论 家蝇幼虫分泌型抗菌肽可通过改变细菌细胞膜的通透性,抑制细菌某些蛋白的合成等发挥抗菌作用.
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家蝇幼虫抗菌蛋白对子宫内膜癌细胞生长影响
目的 探讨家蝇幼虫抗菌蛋白对子宫内膜癌细胞(JEC)的影响.方法 细胞计数法、四甲基偶氨噻唑蓝(MTT)法测定家蝇幼虫抗菌蛋白对JEC细胞生长的影响;MTT法测定家蝇幼虫抗菌蛋白对正常人牙周膜细胞生长的影响;苏木素-伊红(HE)染色法观察细胞凋亡,并计算细胞凋亡指数(AI).结果 高浓度组JEC细胞数及吸光度 (A)值明显降低,细胞增殖抑制率随浓度的增加而增大;各浓度组正常人牙周膜细胞的A值和细胞增殖抑制率与对照组比较差异均无统计学意义;HE染色见细胞凋亡,各浓度组AI均明显高于对照组.结论 家蝇幼虫抗菌蛋白可能是通过诱导细胞凋亡来抑制JEC细胞生长.
关键词： 家蝇幼虫 抗菌蛋白 子宫内膜癌细胞(JEC) -
家蝇幼虫分泌物抗菌组分的抗菌效果观察及筛选
目的筛选家蝇幼虫分泌物中的抗菌组分并测定其抗菌活性.方法用盐析、凝胶过滤层析、反相高效液相色谱(RP-HPLC)分离纯化分泌物中抗菌蛋白肽,以大肠埃希菌为指示菌种,采用平板滤纸片法检测抗菌活性,并观察其对金黄色葡萄球菌等多种细菌的抗菌活性.结果经50%～80%硫酸铵盐析沉淀、Sephadex G-100、G-50凝胶过滤柱层析分离得到一活性峰,该活性峰对大肠埃希菌及金黄色葡萄球菌等细菌显示较强的抗菌作用,进一步用反相高效液相色谱纯化,该活性峰由3个活性组分构成.结论家蝇幼虫分泌物中含有3个抗菌组分,对多种革兰氏阳性及阴性菌具有较强的抗菌活性.
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水仙子昆虫蛋白研究概况
水仙子即家蝇幼虫,作为药用,明朝李时珍的《本草纲目》中就有记载:"蛆,又称'五谷虫'、'罗仙子'、'水仙子',可治小儿甘热,为治疳疾之良药."
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家蝇幼虫抗菌蛋白对JEC和A375肿瘤细胞的抑制作用
目的 研究家蝇幼虫抗菌蛋白对JEC和A375肿瘤细胞的抑制作用. 方法 在体外培养的JEC和A375肿瘤细胞中分别加入0.02%、0.1%、0.5%、2.5%和12.5%浓度的抗菌蛋白,用流式细胞仪测定细胞周期和细胞凋亡,计算细胞凋亡指数;HE及AO染色法观察凋亡细胞形态.对照组采用不含抗菌蛋白的等量培养基. 结果 JEC细胞的凋亡指数/增殖指数(AI/PI)随浓度的增加而递增,2.5%抗菌蛋白组和12.5%抗菌蛋白组PI及凋亡率明显升高, G0/G1期下降.对A375细胞,12.5%抗菌蛋白组的G2/M期、S期、G0/G1期、G2/M期、AI/PI及PI与对照组的差异均有统计学意义(P＜0.01). 结论 家蝇幼虫抗菌蛋白可能通过诱导细胞凋亡来抑制JEC细胞生长;其对A375细胞的抑制可能是通过细胞周期阻滞以及诱导细胞凋亡而发挥作用.
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烯虫酯对家蝇幼虫的毒性及滞育作用研究
目的 观察研究烯虫酯对家蝇幼虫的毒性及滞育作用.方法 采用饲料混药喂食法,针对不同质量浓度的烯虫酯对家蝇幼虫的致死作用及幼虫化蛹发育历期的影响,设置不同的处理组和重复.结果 烯虫酯对家蝇幼虫的LC50为2.140 3×10-5 mg/kg;随着药剂质量浓度的提高,幼虫死亡率呈明显升高趋势.不同质量浓度的烯虫酯使家蝇幼虫化蛹的发育历期明显延长.结论 烯虫酯对家蝇幼虫有明显的毒杀作用,并阻碍幼虫的发育及变态过程,从而影响成虫存活.
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家蝇幼虫抗菌肽对肿瘤细胞的作用效果观察
目的 研究家蝇幼虫抗菌肽对肿瘤细胞的作用效果.方法 针刺感染大肠杆菌诱导家蝇幼虫产生抗菌肽,经研磨、离心、层析等步骤提取其抗菌肽,所提取的抗菌肽作用于肿瘤细胞K562、Daudi、109及T24,以流式细胞仪检测其作用效果.结果 抗菌肽对4种肿瘤细胞的有效杀伤力M1均在85%以上.结论 家蝇幼虫抗菌肽可作为潜在的抗肿瘤药物开发.
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家蝇幼虫营养成分价值的研究
目的获得畜禽粪便养殖家蝇生产蝇蛆动物蛋白的实验室数据,评价用蝇蛆代替鱼粉饲养蛋鸡的效果及经济效益.方法在相同的实验室饲养环境下,观察人工饲料、猪粪饲养的家蝇幼虫体内脂肪酸及微量元素含量的区别;用蝇蛆粉或鲜蛆代替鱼粉饲养蛋鸡,观察对蛋质的影响.结果用猪粪饲养的蝇蛆其体内所含的微量元素(Ca、Fe、Cu、Zn、Se)高于用人工饲料饲养的蝇蛆(P<0.05);用蝇蛆粉或鲜蛆代替鱼粉饲养蛋鸡,蛋内的脂肪酸及微量元素含量没有明显改变(P>0.05).结论用猪粪饲养家蝇可以生产出价廉、优质、富含微量元素的蝇蛆蛋白,而用蝇蛆代替鱼粉饲养蛋鸡不会影响鸡蛋的质量.
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家蝇幼虫血淋巴抗白念珠菌作用的初步研究
目的用微量液体培养生长抑制法检测家蝇幼虫血淋巴的抗白念珠菌活性.方法用大肠杆菌接种家蝇3期幼虫,收集接种后不同时间血淋巴,设立空白对照、药物对照和蛋白酶K对照组,检测血淋巴和血淋巴80℃5min去粗蛋白后提取多肽对3株白念珠菌的抗菌活性.结果大肠杆菌诱导24h后血淋巴出现抗白念珠菌活性,能被水解蛋白酶灭活,去粗蛋白后仍有活性,对氟康唑敏感株及耐药株白念珠菌均有抑制作用.结论大肠杆菌可诱导家蝇幼虫血淋巴产生抗白念珠菌多肽.
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家蝇免疫血淋巴抗HeLa肿瘤细胞蛋白的筛选及纯化
目的 从家蝇3龄幼虫血淋巴筛选具有抗肿瘤细胞HeLa(宫颈癌细胞)的蛋白.方法 采用固相萃取、反相高效液相色谱分离、四甲基偶氮噻唑蓝(MTT)比色法,从热诱导家蝇3龄幼虫免疫血淋巴筛选抗肿瘤多肽.结果 经10％～50％乙腈洗脱C18固相萃取柱,获得mp1、mp2、mp3、mp4、mp5等5个具有抗HeLa的活性组分,以40％乙腈萃取组分活性强达38％,而顺铂抑制率为57％,经反相高效液相色谱分析,该固相萃取活性组分由2个片段组成,分别为出现在280nm波长下24 min和29 min,对HeLa具有抑制作用,与顺铂的抗肿瘤活性相接近.结论 家蝇3龄幼虫血淋巴具有抗HeLa的mp1、mp2、mp3、mp4、mp5 5个组分,MP4活性强,由2个分子量为16KDa成酸性的多肽片段组成.
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家蝇幼虫分泌物对小鼠腹腔巨噬细胞功能的影响
目的 研究家蝇幼虫分泌物对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能、乳酸脱氢酶(LDH)活性及一氧化氮(N0)含量的影响.方法 以甲醇为洗脱液,用固相萃取法初步分离家蝇幼虫分泌物,液体培养法检测各萃取组分抗菌活性,比色法检测萃取组分对巨噬细胞吞噬中性红能力及LDH活性的影响；Griess法测定NO含量.结果 分泌物经甲醇萃取分离后,30％,40％萃取组分显示较强抗大肠埃希菌活性;经该两个梯度萃取组分作用后,巨噬细胞的吞噬率分别为(1.48±0.12)％,(1.26±0.08)％; LDH活性单位分别为(450.32±1.15)及(306.57±2.06)；诱生NO的浓度分别为(28.5±3.4) μmol/L,(25.6±2.8) μmol/L,与对照组相比均有明显的统计学意义(P＜0.05).结论 家蝇幼虫分泌物经初步纯化后,对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能、LDH活性及NO的诱生均有显著的增强作用.
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家蝇幼虫血淋巴蛋白MAC-1诱导人宫颈癌细胞凋亡的实验
目的 探讨家蝇幼虫血淋巴蛋白(anticancer protein from Musca domestica larva hemolymph,MAC-1)诱导人宫颈癌细胞系(Cervical cancer cell lines,HeLa)的凋亡过程中fas、caspase 8、bcl-2凋亡调节基因的相互关系及可能的作用机制.方法 苏木素-伊红(HE)染色法、流式细胞术(FCM)观察MAC-1蛋白作用细胞凋亡及增殖变化,应用免疫细胞化学技术检测MAC-1蛋白作用前后凋亡相关基因fas、caspase 8和bcl-2表达的变化.结果 MAC-1蛋白诱导后HeLa细胞形态发生改变；流式细胞仪分析结果发现细胞凋亡率随蛋白作用时间的延长和蛋白浓度的增加而降低的趋势.免疫细胞化学法提示MAC-1蛋白作用HeLa细胞后fas和caspase 8的染色增强(P＜0.05),bcl-2的染色减弱(P＜0.05).结论 家蝇幼虫血淋巴蛋白MAC-1能够抑制HeLa细胞增殖并诱导凋亡,此作用随着蛋白的浓度增加和作用时间延长反而降低,其机制可能与fas、caspase 8和bcl-2表达有关.
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喷雾冷冻干燥对家蝇幼虫活性成分抗菌及抗炎活性影响
以人工饲养繁殖的家蝇(Musca)3龄幼虫为材料,探讨喷雾冷冻干燥对家蝇幼虫活性提取物抗菌及抗炎活性的影响.结果表明,经喷雾冷冻干燥处理的家蝇幼虫活性提取物对金黄色葡萄球菌和大肠埃希菌具有有效抑制作用;对LPS诱导的巨噬细胞炎症因子TNF-α和IL-6表达具有明显的抑制作用.
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家蝇免疫血淋巴的抑菌作用及其免疫活性的研究
目的研究家蝇幼虫免疫血淋巴抑菌作用及其机制并探讨其免疫调节功能.方法分未经诱导、针刺诱导、蘸菌液诱导三组提取家蝇幼虫免疫血淋巴,分别针对多个标准菌株做抑菌实验,并设立空白对照和药物对照,观察抑菌效果.淋巴细胞转化实验研究家蝇血淋巴的免疫调节作用.结果三种处理方法所提取的家蝇幼虫血淋巴对金黄色葡萄球菌、枯草芽胞杆菌、大肠杆菌、肺炎克氏菌、铜绿假单胞菌、耐甲氧西林金黄色葡萄球菌、白色念珠菌等革兰氏阳性菌、阴性菌及单细胞真菌白色念珠菌均有强的抑菌作用,其中带菌诱导的血淋巴抑菌效果较好,并且抑菌活力具有一定的热稳定性.血淋巴对人淋巴细胞的激活作用明显,淋巴细胞的转化率与对照组比较差异有显著性.结论本研究进一步验证了家蝇血淋巴的抑菌活性和免疫功能,为家蝇血淋巴的抗菌机制及免疫调节作用的深入研究和应用提供资料.
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家蝇幼虫抗菌肽Defensins基因的克隆与序列分析
目的克隆家蝇幼虫的抗菌肽 defensins基因并对其进行序列分析. 方法提取家蝇幼虫总 RNA,根据家蝇成虫 defensins基因 cDNA序列设计一对引物, RT-PCR扩增目的基因片段, T-A克隆后测序,应用相关生物信息学软件对该序列进行分析. 结果 RT-PCR扩增出一条约 310bp的目的片段,序列分析表明,其与家蝇成虫防御素基因同源性高达 97%,核酸序列变异主要发生在信号肽区域. 结论成功克隆及分析了家蝇幼虫防御素基因全长编码区 cDNA序列 ,为其下一步的重组表达和生物活性研究奠定了基础.
关键词： 家蝇幼虫 defensins基因 序列分析 克隆 -
家蝇幼虫组织匀浆液抗病毒活性的研究
目的探索家蝇组织匀浆液的抗病毒作用.方法用鸡胚法检测经针刺或冷冻免疫诱导及同期对照家蝇幼虫组织匀浆液的抗病毒活性.结果家蝇幼虫组织匀浆液中有抗病毒活性物质存在,针刺或冷冻组抗病毒物质的活性高于同期对照组.结论家蝇幼虫组织匀浆液中抗病毒活性物质的性质尚待进一步确定.研究结果为抗病毒药物的寻找开辟了新的路径.
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感染大肠杆菌后家蝇幼虫血淋巴细胞的观察
目的 探讨家蝇三龄幼虫被大肠杆菌感染后的细胞免疫反应.方法 观察家蝇三龄幼虫感染大肠杆菌后4、8、16及24 h血淋巴细胞总数(THC)及各类血细胞数量(DHC)的变化.观察大肠杆菌感染后家蝇幼虫血细胞形态的变化.结果 ①与对照组比较,感染4、8、16、24 h组THC均有显著增加(P<0.01);感染后各时间组的浆血胞和粒血胞数均显著升高(P<0.01);感染后16、24 h组的珠血胞数显著升高(P<0.01);各时间组的原血胞和类绛血胞数量无明显变化(P>0.05).②感染后4、8、16 h组的浆血胞和粒血胞的比例明显增加(P<0.01),感染后各时间组的珠血胞的比例均明显减少(P<0.01),各时间组原血胞和类绛血胞的比例均无明显变化(P>0.05).③感染大肠杆菌后,浆血胞发生空泡、细胞变形等变化.结论 家蝇幼虫感染大肠杆菌后在体内诱发的细胞免疫反应表现为血淋巴细胞数量、分类及形态出现变化,其中浆血胞和粒血胞两类细胞是免疫反应的主要参与者,珠血胞也可能参与细胞免疫反应.
