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甲基汞急性暴露诱导大鼠内质网应激的脑区特异性及时间效应特征研究
目的 探讨甲基汞急性暴露诱导大鼠不同脑区内质网应激的时间-效应关系.方法 42只SD大鼠随机分为7组,染毒组腹腔注射氯化甲基汞(4mg/kg),并在0.5、1、3、6、12和24h后麻醉断头处死.对照组腹腔注射同等剂量的生理盐水后立刻断头处死,迅速在冰上分离小脑、大脑皮层、脑干、海马和纹状体5个脑区.以蛋白印迹法测定各个脑区内质网应激的标志性蛋白Grp78的表达.同时测定大脑皮层内还原型谷胱甘肽(GSH)含量.结果 甲基汞染毒后,各个脑区Grp78蛋白的表达显示了较为一致的先升高后降低的变化趋势,0.5h开始升高,6h或12h达到高峰,然后下降,24h时接近对照组水平,其中大脑皮层与脑干Grp78的变化与对照组相比分别具有统计学意义.大脑皮层Grp78蛋白的表达在染毒6h时处在高峰,表达量与对照组相比增加约50%.脑干在染毒12h处在高峰,表达量比对照组增加约40%.GSH的测定结果显示,与对照组相比,大脑皮层GSH含量呈先降低后缓慢升高的趋势,显示出与Grp78变化相反的趋势.结论 甲基汞急性暴露大鼠显示内质网应激具有时间效应和脑区特异性,这种内质网应激效应可能与氧化性应激有关.
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内质网分子伴侣GRP78在乳腺癌中的表达及其预后意义
目的 探讨乳腺癌中GRP78的表达及其与乳腺癌临床、病理特征的相关性及其预后意义.方法 采用免疫组化Envision法检测了172例乳腺癌石蜡标本中GRP78的表达并对其表达与乳腺癌患者的月经状况、肿瘤大小、淋巴结转移状况、病理类型、组织学分级、激素受体状况、Her-2、Ki-67表达状况等临床、病理特征的相关性以及与预后的关系进行统计分析.结果 在172例手术切除的乳腺癌标本中,GRP78普遍阳性表达于肿瘤细胞,其中71例(41.28％)为强表达,101例(58.72％)为弱表达.GRP78的表达与乳腺癌患者的月经状况、淋巴结转移状况、病理类型、组织学分级、激素受体状况、Ki-67表达状况等临床、病理特征无相关性(P＞0.05);其在T3、Her-2阳性乳腺癌患者中的表达显著高于在T1、T2和Her-2阴性患者中的表达(P＜0.05).生存分析结果表明,GRP78强表达患者的无病生存时间和总生存时间较弱表达患者差,差异有统计学意义(P＜0.05).Cox回归分析表明,GRP78的表达状况是乳腺癌患者无病生存时间的独立预后因素(P＜0.05),但不是总生存时间的独立预后因素(P＞0.05).结论 GRP78普遍阳性表达于乳腺癌,其表达增强,预示患者预后不良,GRP78的表达状况对判断乳腺癌患者的预后具有一定的参考价值.
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Par-4基因增敏顺铂对肾母细胞瘤荷瘤裸鼠生长的抑制作用
目的:探讨腺病毒介导的前列腺凋亡反应因子-4(prostate apoptosis response-4,Par-4)协同顺铂(CDDP)对人肾母细胞瘤细胞SK-NEP-1裸鼠皮下移植瘤的影响.方法:采用人肾母细胞瘤细胞株SK-NEP-1建立BALB/c裸鼠皮下移植瘤模型,分别用表达Par-4的腺病毒、CDDP及两者联合治疗,随机分成5组:Par-4+CDDP组、Par-4组、CDDP组、空Par-4(不表达Par-4的对照腺病毒)组、空白对照组.测定移植瘤的体积及瘤重,通过HE染色及免疫组化分析,检测移植瘤组织中Par-4、GRP78及BAX蛋白的表达水平.结果:Par-4+CDDP组、Par-4组及CDDP组均有抑制裸鼠移植瘤生长的作用,瘤重差异有统计学意义(P ＜0.05),其中,Par-4+CDDP组优于Par-4组与CDDP组.而空Par-4组与空白对照组相比,差异无统计学意义.Par-4+CDDP组能明显上调Par-4、GRP78及BAX蛋白表达(P＜0.05).结论:外源性Par-4协同CDDP抑制裸鼠移植瘤的生长可能是外源性Par-4通过结合GRP78后上调BAX蛋白所致.
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褪黑素减轻博来霉素诱发小鼠肺纤维化早期的内质网应激反应
目的：探讨褪黑素( MT )是否能减轻由博来霉素( BLM)诱发小鼠肺纤维化早期的内质网应激反应。方法将成年健康♂ ICR小鼠随机分为对照组、MT组、BLM组和MT+BLM组。 MT组小鼠给予生理盐水前30 min经腹腔注射MT(10 mg·kg-1),并在给予生理盐水后按每24 h一次经腹腔注射MT(10 mg·kg-1),BLM组小鼠经气管插管单次给予BLM(5 mg·kg-1),MT+BLM组小鼠在给予BLM(5 mg·kg-1)前30min经腹腔注射给予MT(10 mg·kg-1),并在给予BLM后按每24 h一次经腹腔注射给予MT(10 mg· kg-1),对照组小鼠经气管插管给予等容积的生理盐水。各组分别在BLM处理后不同时间点(24、72 h)剖杀小鼠并取材,肺组织进行病理切片,HE染色法观察肺部炎性细胞浸润情况,Western blot检测内质网( ER)应激相关蛋白( GRP78、p-eIF2α和p-IRE1α)的表达水平,免疫组化检测ER应激相关蛋白(GRP78、p-IRE1α、ATF6α和p-PERK)的分布。结果成功构建了小鼠肺纤维化急性炎症模型；在BLM处理后,肺重、肺重比和肺炎性细胞浸润明显增加,并呈明显时间-效应关系；MT可明显降低BLM引起的肺重和肺重比增加,减轻肺部炎性细胞浸润；Western blot显示, MT处理后明显对抗BLM引起的ER应激敏感蛋白GRP78蛋白的上调,抑制BLM引起的UPR通路相关蛋白eIF2α和IRE1α磷酸化；免疫组化结果显示,MT可降低BLM诱导的ER应激相关蛋白GRP78、p-IRE1α、ATF6α和 p-PERK的表达。结论 MT可减轻BLM诱发的小鼠肺纤维化早期ER应激反应。
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IGF-Ⅰ腹腔注射对新生大鼠高氧肺损伤的防治作用
目的 观察胰岛素样生长因子Ⅰ (IGF-Ⅰ)腹腔注射对新生大鼠高氧肺损伤的防治作用,并探讨其机制.方法 将30只新生Wistar大鼠随机分为空气组、高氧组、干预组,每组10只新生.高氧组、干预组制备高氧肺损伤模型,空气组和高氧组、干预组从造模第1天起分别腹腔注射生理盐水和重组IGF-Ⅰ,6μg/(kg·d),连续7d,计算各组肺组织干湿重比(W/D),计数支气管肺泡灌洗液(BALF)中白细胞总数,对BALF中的细胞进行Diff-Quik染色,HE染色观察肺组织病理,核染色结合TUNEL观察肺细胞凋亡情况,Western blotting法检测肺组织GRP78、CHOP蛋白.结果 干预组、高氧组、空气组大鼠肺组织W/D分别为5.94±0.18、6.38±0.13、5.58±0.21,BALF中白细胞总数分别为(72.37 ±3.18)×107/L、(166.02±5.36)×107/L、(27.67±1.01)×107/L,高氧组与空气组相比,干预组与高氧组相比,P均＜0.05.肺组织病理切片观察可见干预组较高氧组肺水肿减轻.干预组、高氧组、空气组新生大鼠肺细胞凋亡指数分别为10.0％±0.7％、16.3％±0.7％、4.2％±0.9％,高氧组与空气组相比,干预组与高氧组相比,P均＜0.05.干预组、高氧组、空气组大鼠肺组织GRP78分别为0.36±0.07、0.43±0.09、0.24±0.04,CHOP分别为1.46±0.11、1.63±0.13、0.62±0.08,高氧组与空气组相比,干预组与高氧组相比,P均＜0.05.结论 IGF-Ⅰ腹腔注射对新生大鼠高氧肺损伤有防治作用,其机制可能为下调CHOP、GRP78蛋白表达.
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GRP78蛋白在结肠癌组织中的表达与意义
目的 探讨葡萄耱调节蛋白78(GRP78)在结肠癌组织中的表达及意义.方法 用蛋白免疫印迹法(Wester blot)检测82例结肠癌组织、17例结肠良性增生组织、及33例正常肠组织的GRP78及癌组织中血管内皮生长因子(VEGF)、转移相关基因1(MTA1)、Ezrin的表达情况.免疫组化SABC法测定肿瘤组织微血管密度.结果 GRP78在结肠癌组织中的表达明显高于结肠良性增生组织及正常结肠组织(P＜0.05),GRP78高表达组结肠癌组织的VEGF、MTA1、Ezrin表达量高于其他两组(P＜0.05),GRP78高表达组结肠癌组织肿瘤细胞转移率及血管密度明显高于其他两组(P＜0.05).结论 GRP78在结肠癌组织中的表达呈增高趋势,参与了结直肠腺癌的发生过程.GRP78高表达与结肠癌细胞转移有关.
