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Par-4基因增敏顺铂对肾母细胞瘤荷瘤裸鼠生长的抑制作用
目的:探讨腺病毒介导的前列腺凋亡反应因子-4(prostate apoptosis response-4,Par-4)协同顺铂(CDDP)对人肾母细胞瘤细胞SK-NEP-1裸鼠皮下移植瘤的影响.方法:采用人肾母细胞瘤细胞株SK-NEP-1建立BALB/c裸鼠皮下移植瘤模型,分别用表达Par-4的腺病毒、CDDP及两者联合治疗,随机分成5组:Par-4+CDDP组、Par-4组、CDDP组、空Par-4(不表达Par-4的对照腺病毒)组、空白对照组.测定移植瘤的体积及瘤重,通过HE染色及免疫组化分析,检测移植瘤组织中Par-4、GRP78及BAX蛋白的表达水平.结果:Par-4+CDDP组、Par-4组及CDDP组均有抑制裸鼠移植瘤生长的作用,瘤重差异有统计学意义(P ＜0.05),其中,Par-4+CDDP组优于Par-4组与CDDP组.而空Par-4组与空白对照组相比,差异无统计学意义.Par-4+CDDP组能明显上调Par-4、GRP78及BAX蛋白表达(P＜0.05).结论:外源性Par-4协同CDDP抑制裸鼠移植瘤的生长可能是外源性Par-4通过结合GRP78后上调BAX蛋白所致.
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前列腺凋亡反应蛋白-4在神经退行性疾病和精神疾病中的作用
前列腺凋亡反应蛋白-4(Par-4),由Sells等从前列腺癌细胞中分离出来[1].人类par-4基因位于染色体12q21上,蛋白质分子量约为38KDa.含442个氨基酸残基.有三个重要的功能区:羧基末端的亮氨酸拉链区(LZ),及氨基末端的核定位序列(NLS)NLS1和NLS2.
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靶向抑制Par-4基因表达对人骨髓间充质干细胞中CD2相关蛋白表达的影响及意义
目的 研究小RNA干扰靶向抑制Par-4基因表达对人骨髓间充质干细胞(hBMSCs)中CD2相关蛋白(CD2AP)表达的影响及意义.方法 利用构建靶向抑制Par-4基因的SiRNA真核表达载体转染hBMSCs.采用实时荧光定量PCR检测Par-4基因的mRNA水平.采用谷氨酸诱导hBMSCs凋亡.采用流式细胞术检测hBMSCs凋亡百分率.Western blot检测hBMSCs CD2AP蛋白表达量.应用SPSS 10.0软件进行统计学分析.结果 1.Par-4-SiRNA可下调hBMSCs Par-4-mRNA水平,抑制率为88%(P＜0.01).而非抑制的对照序列未见抑制作用(P＞0.05).2.流式细胞术检测结果 显示,与正常对照组比较,谷氨酸加常规hBMSCs组凋亡百分率为(59.12±5.43)%(P＜0.01).而在Par-4-SiRNA转染的Par-4-SiRNA-hBMSCs组中,谷氨酸对hBMSCs的凋亡诱导作用被显著抑制,凋亡百分率显著下调为(39.49±5.01)%(P＜0.01).3.Par-4-SiRNA转染的Par-4-SiRNA-hBMSCs组,谷氨酸对hBMSCs中CD2AP的下调作用被显著抑制,CD2AP蛋白的表达量显著上升(P＜0.01).结论 靶向抑制Par-4基因的表达能够拮抗谷氨酸诱导的hBMSCs凋亡及CD2AP表达的下调.
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早老蛋白-1基因突变与Alzheimer病
Alzheimer病(AD)的病因非常复杂,目前发现与AD相关的基因有5种:21号染色体上的淀粉样蛋白前体(APP)基因、19号染色体上的ApoE基因、14号染色体上的早老蛋白-1(ps-1)基因和1号染色体上的早老蛋白-2(ps-2)基因及12号染色体上的α2-巨球蛋白(α2-MG)基因.在早发型AD(EOAD)家系发现app、ps-1和ps-2基因的突变,呈线性常染色体遗传模式,此3个基因的突变分别占2%～3%、70%～80%和20%.ps-1基因已成为AD研究的热点.但迄今为止,ps-1基因的功能尚未明了.近年来更多的研究发现多数早发型家族性AD(FAD)与ps-1基因突变密切相关,ps-1基因突变诱导凋亡且伴随Par-4高表达,在AD发病中起重要作用,本文拟对此作一综述.
关键词： 早老蛋白-1基因 Alzheimer病 Par-4基因 -
人类前列腺凋亡反应因子4基因真核表达载体的构建及其在K562细胞中的表达
目的 构建带有绿色荧光蛋白的人类前列腺凋亡反应因子4(Par-4)基因真核表达载体pIRES2-EGFP/Par-4,并转染K562细胞.方法 以pDNR/Par-4质粒为模板,PCR扩增Par-4基因,T-A克隆,亚克隆至pIRES2-EGFP上,并对重组表达载体进行酶切、测序鉴定.采用Superfect转染试剂转染K562细胞.提取细胞总蛋白,Western blotting柃测Par-4表达.结果 经限制性酶切鉴定及测序分析证实pIRES2-EGFP/Par-4载体序列止确;荧光显微镜下可见转染的K562细胞有绿色荧光蛋白的表达,Western blotting 证实转染细胞中存在Par-4蛋白的表达.结论 pIRES2-EGFP/Par-4表达载体构建成功,并在K562细胞内成功表达.
