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Cav1.2和钙调蛋白在自发性遗传性癫痫大鼠小脑中的异常表达
目的 研究自发性遗传性癫痫大鼠(Tremor,TRM)小脑组织中Cav1.2与钙调蛋白(Calmodulin,CaM)蛋白表达与共定位情况.方法 应用Western blot技术检测Cav1.2与CaM蛋白表达,应用免疫荧光技术定位Cav1.2与CaM蛋白的分布,应用激光共聚焦显微镜检测[Ca2+].结果 TRM大鼠小脑内Cav1.2的蛋白表达低于正常Wistar大鼠(P＜0.05),而CaM的蛋白表达高于正常Wistar大鼠(P＜0.05)；荧光定位显示Cav1.2与CaM共定位的阳性细胞比率较之正常组表达降低(P＜0.01).与正常的Wistar大鼠相比,急性分离的TRM大鼠小脑神经元中[Ca2+]i明显增强.结论 TRM大鼠小脑内Cav1.2和CaM蛋白表达异常可能是癫痫的发病机制之一.
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无镁诱导培养大鼠海马神经元癫痫放电模型中电压门控性钙通道Cav1.2和钙调蛋白激酶Ⅱ的表达
目的 利用无镁细胞外液诱导原代培养大鼠海马神经元癫痫放电模型来检测电压门控性钙通道Ca,1.2和钙凋蛋白激酶Ⅱ的表达变化.方法 采用新生24h内Wistar大鼠,取海马进行神经元原代培养.体外培养至12d,无镁细胞外液处理一部分神经元3h后,应用全细胞膜片钳技术记录神经元的放电情况以及免疫印迹法检测电压门控性钙通道Ca,1.2和钙调蛋白激酶Ⅱ的蛋白表达.无镁细胞外液处理另一部分细胞12h后检测Ca,1.2和钙调蛋白激酶Ⅱ的蛋白表达.结果 在无镁细胞外液处理3h后,神经元存在自发的“癫痫样”放电,而神经元Ca,1.2和磷酸化钙调蛋白激酶Ⅱ表达不变；无镁诱导12h后,神经元电压门控性钙通道Ca,1.2表达下调,而磷酸化钙调蛋白激酶Ⅱ表达上调.结论 电压门控性钙通道Ca,1.2和钙调蛋白激酶Ⅱ的表达变化可能与无镁诱导体外培养大鼠海马神经元自发异常放电的基础病理机制相关.
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吗啡对培养的尾核神经元电压门控性钙通道的影响
目的探讨尾核神经元在吗啡镇痛中的离子机制. 方法采用膜片钳全细胞记录模式观察了22例尾核神经元电压门控性钙通道在吗啡给药前后的电流变化. 结果观测的22例细胞中,9例(40.9% )细胞加入吗啡后,IC a由 1185.43pA±184.2pA增加到1424.8pA±259.5pA,与给药前相比增加了20.21%,其差异经配对t检验,具有显著性意义(P＜0.05 ).7例(31.8%)细胞加入吗啡后,I Ca 由1350.3pA±203.7pA减少到1050.6p A±179.6pA,降低22.2%,其差异具有显著性意义 ( P＜0.05).吗啡作用可被纳洛酮翻转.6例细胞(27.2%)未观察到明显改变. 结论吗啡不仅可在整体情况下,经不同核团神经元之间的联系对尾核神经元的电活动进行调节, 同时,也可直接作用于单个尾核神经元而发挥作用.
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慢性坐骨神经嵌压伤模型小鼠Cav3.2对Egr2表达的影响
目的 探讨慢性坐骨神经嵌压伤(CCI)模型小鼠背根神经节(DRG)电压门控性钙通道3.2(Cav3.2)变化对早期生长反应蛋白2(Egr2)表达的影响.方法 80只C57BL/6小鼠随机分为四组:阴性对照(A)组、CCI模型(B)组、米贝地尔干预(C)组和细胞外调节蛋白激酶(ERK)抑制剂U0126干预(D)组.B、C、D组行坐骨神经嵌压手术建立CCI模型.行为学检测机械痛觉和热痛觉,Western blot测定DRG中Cav3.2、总ERK、磷酸化ERK(pERK)和Egr2蛋白水平,RT-PCR测定DRG中Egr2基因水平.结果 与A组相比,B组手术后出现机械痛觉超敏和热痛觉过敏(P＜0.05).C、D组机械痛觉和热痛觉均较B组不同程度缓解(P＜0.05).Cav3.2、pERK和Egr2蛋白表达呈时间依赖改变.与A组相比,C组pERK蛋白水平下降(P＜0.05),C、D组Egr2蛋白和基因水平下降(P＜0.05).结论 在CCI模型小鼠的慢性坐骨神经损伤中,ERK信号通路可能是Cav3.2钙通道调控Egr2蛋白和基因表达的重要途径之一.
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遗传性癫痫大鼠海马组织Ca2+/CaV1.2/CaM/CaMKⅡ信号通路的异常变化
目的 研究遗传性癫痫大鼠 (tremor,TRM) 海马组织电压门控性L型钙离子通道α1C亚单位 (CaV1.2)、钙调蛋白 (CaM)、钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ (CaMKⅡ) 和细胞内钙离子浓度 ([Ca2+]i) 的变化情况.方法应用Western blot法与免疫荧光双标法检测TRM海马CA1、CA3和DG区CaV1.2、CaM和磷酸化CaMKⅡ (p-CaMKⅡ) 的蛋白表达及分布;激光共聚焦显微镜检测TRM海马组织中[Ca2+]i.结果与正常Wistar大鼠相比,TRM海马组织中CaV1.2和CaM的蛋白表达明显升高 (P<0.01),而p-CaMKⅡ的蛋白表达明显下降 (P<0.01);免疫荧光双标法结果显示:CaV1.2、CaM、p-CaMKⅡ在CA1、CA3区的锥体细胞和DG区的颗粒细胞群表达丰富,同时CaV1.2与CaM、p-CaMKⅡ与CaM在海马各区域均存在共定位;激光共聚焦显微镜检测TRM海马细胞[Ca2+]i明显增强 (P<0.01).结论 Ca2+/ CaV1.2/CaM/CaMKⅡ通路的异常变化可能参与遗传性癫痫大鼠的癫痫发生与发展.
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茶黄素对大鼠心室肌细胞内游离钙浓度的影响
目的 研究茶黄素对大鼠心室肌细胞内游离钙浓度([Ca2+]i)的影响并探讨其可能机制.方法 用激光共聚焦显微镜探测细胞内游离钙浓度,结果用相对荧光强度((FI-FI0)/FI0,%;FI0:对照;FI:给药)表示.结果①茶黄素(10,20,40 μmol·L-1)对正常台氏液中心肌细胞内游离钙浓度没有影响,却可浓度依赖性地降低模拟缺血液中心室肌细胞[Ca2+]i的增加.②预先应用L型钙通道开放剂Bay k8644,可大部分取消茶黄素(20 μmol·L-1) 在模拟缺血液中的作用.③茶黄素( 20 μmol·L-1)能明显抑制无钙台氏液中由低浓度ryanodine引起的[Ca2+]i增加.④当细胞外液钙浓度由1 mmol·L-1增加到10 mmol·L-1而诱发心室肌细胞钙超载时,部分心室肌细胞产生可传播的钙波,茶黄素(20 μmol·L-1 )可降低钙波发生的频率和持续时间,终阻断钙波并降低[Ca2+]i.结论 茶黄素可抑制电压门控性钙通道的外钙内流和减少肌浆网的内钙释放从而降低[Ca2+]i.
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T型钙通道生理病理学功能及其分子调节机制
T型钙通道是钙通道家族中重要的一员,又名低电压激活钙通道.T型钙通道不仅有重要的生理学意义,同时在病理状态下如癫痫,自闭症,高血压,心脏病,疼痛和癌症等也有很重要的作用.因此,了解T型钙通道的功能调节有重要意义.目前对T型钙通道的分子调节机制虽然有了相当的了解,但仍有许多不明之处.现对T型钙通道的生理病理学功能及其已发现的分子调节机制进行综述.
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大鼠耳蜗L-型电压门控钙通道亚型的表达
目的:研究大鼠耳蜗毛细胞电压门控性钙通道(VGCC)mRNA的表达及其意义.方法:利用RTPCR和原位杂交技术检测了L-型VGCC的4种亚单位在大鼠耳蜗毛细胞的表达.结果:以耳蜗基底膜中提取的总RNA为模板可以检测到α1C和α1D钙通道的表达,原位杂交显示内、外毛细胞被特异性的探针标记.结论:耳蜗Corti器表达的VGCC主要是α1C和α1D亚型.
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L型电压门控钙通道α1D亚基在内耳毛细胞的分布及在听力中的作用
目的 探讨L型电压门控钙通道α1D亚基在内耳毛细胞的分布及在听力中的作用.方法 应用免疫细胞化学荧光标记观察L型电压门控钙通道α1D亚基在牛蛙毛细胞上的分布;利用听性脑干反应(ABR)检测携带不同L型电压门控钙通道α1D基因型(α1D+/+、α1D+/-和α1D-/-)小鼠的听力.结果 L型电压门控钙通道α1D亚基主要密集分布于毛细胞侧膜和顶膜,在毛细胞的胞核区域和纤毛丛处没有阳性荧光染色.三种α1D基因型小鼠的ABR检测结果显示,α1D+/+野生型小鼠的短声反应阈正常,为34.8±5.7 dB SPL;α1D+/-杂合子小鼠反应阈高于同窝生α1D+/+野生型小鼠,为54.4±12.4 dB SPL;α1D-/-小鼠呈现全聋,ABR在100 dB SPL时仍无反应.结论 L型电压门控钙通道的α1D亚基分布在牛蛙毛细胞的侧膜和顶膜,在内耳的听觉生理中具有重要作用.L型电压门控钙通道α1D亚基缺失或是数量的减少均可以影响小鼠听力.
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电压门控性钾、钙、钠离子通道的结构及分类
电压门控性钾、钙和钠离子通道在生命科学研究领域中受到越来越多的关注.近,国际药理学联合会(IUPHAR)及美国药理学和临床治疗学会(ASPET)联合制定了新的电压门控性离子通道超家族分类方法,本文将对其中的电压门控性钾、钙和钠离子通道进行介绍.
