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人胎盘胎儿侧间充质干细胞无血清培养上清对肺脏上皮细胞氧化应激的保护作用
背景:前期研究证实人胎盘胎儿侧间充质干细胞培养上清具有一定的清除活性氧自由基的能力,且本身具有一定的抗氧化酶活性.目的:探究人胎盘胎儿侧间充质干细胞在无血清培养条件下所得上清对氧化应激损伤的肺脏上皮细胞的保护作用及其作用机制.方法:分别使用不同浓度的过氧化氢(200,400,500,600,800μmol/L)对肺脏上皮细胞A549细胞系进行6,12,24 h的氧化刺激,通过CCK-8法对肺脏上皮细胞存活率进行检测,得出存活率为50%时的过氧化氢浓度作为氧化损伤模型的适条件.用Hochest33258染色及Western Blot对模型有效性进行验证.采用无血清培养基培养胎盘胎儿侧间充质干细胞,收集P3代细胞培养上清将其作用于氧化损伤的肺脏上皮细胞,培养24 h,即上清组.同时设立损伤组(仅进行氧化损伤)和维生素C组(培养基中添加100μmol/L的维生素C).利用流式细胞术对各组细胞凋亡情况进行检测以及Western Blot检测凋亡相关蛋白及氧化应激经典信号通路Nrf2-Keap1-ARE信号通路相关蛋白的表达.结果与结论:①CCK-8法检测得出,采用600μmol/L的过氧化氢对肺脏上皮细胞进行24 h的氧化刺激,A549细胞存活率为(56.41±3.31)%.Hochest33258染色及Western Blot证实模型的可靠性;②流式细胞术结果显示维生素C组和上清组氧化损伤细胞的凋亡率与损伤组细胞相比有不同程度的降低,其中上清组与损伤组相比差异有统计学意义(P<0.05);③Western Blot对凋亡相关蛋白的检测显示,与损伤组对比,维生素C组和上清组凋亡促进基因Bax蛋白表达减弱,凋亡抑制基因Bcl-2蛋白表达增强,且差异有统计学意义(P<0.05).Nrf2-Keap1-ARE信号通路相关蛋白显示与损伤组对比,维生素C组和上清组Nrf2蛋白表达增强,Keap1分子表达减弱且差异有统计学意义(P<0.05);④上述结果提示,实验成功构建了肺脏上皮细胞损伤模型,且人胎盘胎儿侧间充质干细胞培养上清具有一定的抗氧化能力,能够起到减弱氧化损伤,抑制细胞凋亡的作用,其作用机制可能与激活Nrf2-Keap1-ARE信号通路有关.
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依达拉奉干预脊髓损伤模型大鼠Ⅰ型和Ⅳ型胶原蛋白的表达
背景:依达拉奉是一种有效的氧自由基清除剂,有研究报道其可以有效改善脊髓损伤后肢体运动功能,但是其对损伤组织修复的作用机制尚不明确.目的:通过观察脊髓损伤后大鼠肢体功能评分的变化及Ⅰ型胶原蛋白和Ⅳ型胶原蛋白表达情况,探讨依达拉奉促进脊髓损伤大鼠肢体功能恢复的机制.方法:将36只大鼠随机分为3组,每组12只:假手术组不损伤脊髓,仅去除椎板后缝合+生理盐水腹腔注射;模型组去除椎板后行NYU脊髓打击器建立脊髓损伤模型+腹腔注射生理盐水;依达拉奉组:去除椎板后行NYU脊髓打击器建立脊髓损伤模型+腹腔注射依达拉奉.造模后第1天开始进行药物干预,持续7 d.干预后1,3,5及7 d对各组大鼠进行Basso Beattie Bresnahan(BBB)肢体功能评分;干预后第7天,处死大鼠,取出脊髓,尼式染色观察脊髓神经元细胞的形态;免疫组化法和Western blot检测Ⅰ型和Ⅳ型胶原蛋白表达情况.结果与结论:①与模型组相比,干预第5天后,依达拉奉组的BBB评分显著升高(P < 0.05);②尼式染色显示假手术组脊髓灰白质界限清晰,神经细胞胞质内可见较大且明显的核仁;依达拉奉组,细胞形态较为完整,细胞水肿较轻,瘀血面积较小;模型组神经元细胞空洞较多且大,细胞核肿胀,甚至出现核仁消失的情况;③Western blot 和免疫组化实验结果显示依达拉奉组的Ⅰ型胶原蛋白和Ⅳ型胶原蛋白表达水平显著高于模型组多(P < 0.05);④结果提示,依达拉奉对脊髓损伤后大鼠的肢体功能障碍有显著改善作用,可能与增加Ⅰ型胶原蛋白和Ⅳ型胶原蛋白的表达有关.
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S100钙结合蛋白A6在胃癌组织中表达的意义
目的 探讨S100钙结合蛋白A6(S100A6)在胃癌旁正常组织、慢性胃炎、肠上皮化生和胃癌的组织标本中的表达,以及其与胃癌临床病理特征及预后的关系.方法 收集中国医科大学附属盛京医院2005年6月至2015年6月胃组织标本,其中胃黏膜肠上皮化生组织(24例)、胃癌(42例)及癌旁正常组织标本(42例).qRT-PCR法检测S100A6 mRNA在不同组织中表达;Western blot法检测S100A6蛋白的表达;采用Kaplan-Meier生存曲线用于区分和比较生存率;Cox比例风险模型用于多因素分析.结果 S100A6蛋白的表达按以下顺序逐渐增加:癌旁正常组织<慢性胃炎<肠上皮化生<胃癌.S100A6蛋白的表达与胃癌肿瘤大小、浸润深度、淋巴管和静脉侵犯、淋巴结转移、肿瘤TNM分期呈正相关.Kaplan-Meier生存曲线提示,高中度S100A6基因表达的患者累积生存率明显低于不表达的患者.Cox比例风险模型提示肿瘤的浸润深度、淋巴管及静脉浸润、淋巴结转移、TNM分期以及S100A6高表达均为胃癌患者预后的独立因素.结论 在胃炎、肠上皮化生、胃癌中S100A6蛋白的表达逐渐升高;S100A6高阳性表达是胃癌预后的独立影响因素.
关键词： S100钙结合蛋白A6 胃癌 免疫组化 RT-PCR WesternBlot法 -
HIV抗体初筛阳性标本的复检与确证结果分析
目的:探讨HIV抗体初筛阳性标本的复检与确证试验结果之间的关系.方法:对2011年1月至2017年10月HIV抗体初筛阳性标本按照《全国艾滋病检测技术规范(2009年、2015年修订版)》要求分别采用酶联免疫吸附试验(ELISA)和胶体硒法进行复检,复检任一方法阳性采用Western blot法进行确证,收集数据进行分析.结果:656份HIV抗体初筛阳性标本,622份复检阳性,初筛假阳性率为5.2％(34/656).其中受检者信息齐全的490份标本进行确证试验,确证阳性标本450份(91.8％),阴性11份(2.3％),不确定29份(5.9％).ELISA法复检阳性标本确证阳性率为92.9％(450/488),胶体硒法复检阳性标本确证阳性率为99.1％(450/454),差异有统计学意义(χ2=31.22,P<0.01);ELISA法中S/CO值>6组与3≤S/CO值≤6组和1≤S/CO值<3组的确证阳性率比较差异均有统计学意义(χ2=96.33、301.15,P<0.01);ELISA法S/CO值与确证阳性标本出现条带数量呈正相关,Gamma系数为0.788.结论:采用优先选择胶体硒法+ELISA法补充的模式进行复检可以大大提高检测效率,保证及时有效地发现HIV感染者.较高S/CO值的标本感染HIV的可能性较大,且病毒处于复制活跃期具有较强感染性的可能性也较大.
关键词： HIV抗体 筛查阳性 确证试验 WesternBlot法 -
热休克因子1及多种热休克蛋白在人良性脑膜瘤中的表达
目的 探讨人良性脑膜瘤细胞中热休克因子1(HSF1)及热休克蛋白(HSP)HSP27、HSP70和HSP90的表达.方法 应用免疫组化法和western blot法检测15例人脑膜瘤原代培养细胞中HSF1、HSP27、HSP70和HSP90蛋白的表达.结果 15例人脑膜瘤中,HSF1蛋白以单体形式存在(分子量为80 kD左右),阳性率为100%(15/15),HSP27、HSP70和HSP90阳性率分别为40%(6/15)、46.7%(7/15)和53.3%(8/15).结论 人良性脑膜瘤存在HSF1蛋白表达,而HSP27、HSP70和HSP90组成型表达水平低.
关键词： 脑膜瘤 热休克蛋白 热休克因子 WesternBlot法 免疫组织化学 -
端粒酶活性表达及p53异常在非小细胞肺癌中表达及临床意义
目的：研究端粒酶活性及p53异常在非小细胞肺癌(nonsmall cell lung cancer,NSCLC)中的表达及其相互关系。方法：用端粒重复扩增（telomeric repeat amplification protocol,TRAP）法检测NSCLC组织、癌旁非癌肺组织、肺良性病变组织端粒酶活性，用Westernblot印迹法检测NSCLC组织p53蛋白表达。结果：端粒酶活性表达率为：NSCLC93.02％(80/86)，癌旁非癌肺组织9.33％(7/75)，肺良性病变组织27.27％(3/11)，NSCLC组织端粒酶活性表达率显著高于癌旁非癌肺组织及肺良性病变，端粒酶活性表达率在不同组织类型、细胞分化、肿瘤大小、病理分期间差别不显著；NSCLCp53异常为51.42％（36／70），p53异常在Ⅰ、Ⅱ期与Ⅲ、Ⅳ期之间，Ⅰ级与Ⅱ、Ⅲ级之间差异有统计学意义；端粒酶活性表达与p53异常无显著关联（P>0.05）；结论：NSCLC标记物中，端粒酶活性表达较p53敏感，p53对NSCLC分期分级有帮助，端粒酶活性表达与p53异常在NSCLC发生发展中可能是两个独立的因素。
关键词： 肺肿瘤 端粒酶 端粒重复扩增法 P53 WesternBlot法
