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天麻DNA转化马铃薯遗传稳定性研究
目的观察天麻DNA转化马铃薯的遗传稳定性.方法①紫外分光光度法扫描观察转基因马铃薯图谱变化,扫描波长为200～300nm.②SDS-PAGE电泳观察转基因马铃薯蛋白质表达情况.结果转基因马铃薯5～7子代的扫描图谱和电泳图谱与马铃薯的图谱均有明显差异.结论转基因马铃薯子代含有天麻的某些成分,并且遗传性状比较稳定.
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骨髓间充质干细胞移植治疗心血管疾病的临床研究新进展
自2001年骨髓干细胞被首次用于治疗心肌梗死以来，干细胞移植治疗心血管疾病的临床研究已历经了10余年。近年来，BMSC因其可塑性、遗传稳定性和免疫耐受性而成为用于心肌修复较为理想的细胞。本文主要对BMSC移植治疗心血管疾病的临床研究的现状和进展加以综述。
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乙型脑炎病毒E264位点回复突变对疫苗安全性的影响
目的 通过反向遗传学技术,构建乙型脑炎病毒减毒疫苗株SA14-14-2囊膜蛋白(envelope protein,E蛋白)第264位氨基酸的回复突变株,并分析该位点突变对疫苗株小鼠毒力的影响.方法 通过融合PCR扩增含基因组第1769核苷酸位点回复突变的基因片段(T→G),替换SA14-14-2相应区域,使得编码E264位点的氨基酸位点由SA14-14-2的组氨酸(H)回复突变成强毒株SA14的谷氨酰胺(Q),将该回复突变株命名为rJEV264(H→Q),通过测定蚀斑大小和一步生长曲线,分析rJEV264的增殖特征;通过测定该突变株的昆明种小鼠脑内神经毒力、皮下感染入脑能力、腹腔感染入脑能力,分析E264位点回复突变后对小鼠毒力的影响.结果 成功构建了回复突变株rJEV264,该突变株蚀斑大小与SA14-14-2相似,在PHK细胞上的增殖特征与SA14-14-2没有明显差异.rJEV264对小鼠有可检测的脑内神经毒力,毒力为5.51 lgPFU/LD50,但无论是皮下注射还是腹腔注射,都没有使小鼠发病.结论 在分子水平证明了E264位点是影响乙脑减毒活疫苗安全性的关键位点之一,E264位点的回复突变增强了SA14-14-2的小鼠脑内神经毒力,但没有增强小鼠神经侵袭力.
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乙型脑炎减毒活疫苗生产株SA14-14-2全基因组序列测定及基因遗传稳定性
目的 对乙型脑炎减毒活疫苗生产株SA14-14-2株进行全基因组序列测定和分析,并观察该生产株在疫苗制备过程中的基因遗传稳定性.方法 根据DNA序列数据库(GenBank)公布的SA14-14-2株的序列,设计合成7对引物,提取疫苗生产株SA14-14-2及其工作种子批生产的3批原液、3批成品疫苗的病毒RNA,通过RT-PCR方法扩增SA14-14-2株的cDNA片段,分别克隆到pGEM-T载体, 转化至大肠埃希菌DH5α中, 挑取阳性菌落克隆、鉴定后测定全序列并对序列进行比较分析,观察毒株在传代的过程中病毒滴度的稳定性.结果 乙型脑炎减毒活疫苗生产株SA14-14-2株基因组全长10 976 bp,编码3 433个氨基酸.3批原液和3批成品疫苗的基因组全长为10 977 bp,比较分析发现,在3′端非编码区10 701处多一个G核苷酸的插入.与DNA序列数据库(Genbank)登录号为D90195的全长序列同源性分别是99.9%、99.9%、99.9%、99.9%、99.8%、99.9%、99.8%,其中E蛋白的同源性均为100%.SA14-14-2生产株的病毒滴度为7.22 lg PFU/mL,原液和成品疫苗的滴度分别为7.32、7.23、7.32、6.86、6.92、6.70 lg PFU/mL.结论 乙型脑炎减毒活疫苗生产株SA14-14-2基因稳定,具有良好的一致性,为乙型脑炎减毒活疫苗的质量的稳定性提供了可靠依据.
关键词： 乙型脑炎减毒活疫苗 SA14-14-2株 全基因组序列 E蛋白 遗传稳定性 -
狂犬病病毒aG株全基因组序列测定及遗传稳定性分析
目的 探究狂犬病病毒(Rabies virus,RV)aG株全基因组序列特征及遗传稳定性.方法 严格按疫苗生产工艺进行传代,提取主种子批、工作种子批及疫苗原液病毒RNA,通过RT-PCR技术扩增全基因组各片段基因,然后分别将其克隆到pGEM-T载体中,并进行序列测定;采用DNAStar软件包对aG株与GenBank中4aGV参考株(JN234411)以及18株基因1型RV参考株进行同源性分析.结果 aG株全基因组由11 925个核苷酸组成,共编码3 600个氨基酸.疫苗原液与主种子批全基因组核苷酸和氨基酸同源性均为100％,而工作种子批与主种子批的核苷酸与氨基酸同源性分别为99.97％和99.92％;aG株与4aGV参考株全基因组核苷酸与推导的氨基酸同源性均为99.9％,其与18株基因1型参考株核苷酸与氨基酸序列同源性分别为84.2％ ～ 97.6％和93.7％ ～98.3％;aG株传代病毒与4aGV参考株全基因组氨基酸序列高度保守,且各主要功能区未发生变异.结论 狂犬病病毒aG株在实验室长期生产传代过程中,全基因组遗传特性稳定.
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轮状病毒的LLR疫苗株全基因组克隆及结构蛋白VP6基因遗传特征
目的 了解轮状病毒(RV)的LLR疫苗株全基因组基因和蛋白特征、完善关键基因遗传稳定性研究,为疫苗的质量控制和研发提供依据.方法 将LLR株毒种第38代在原代牛肾细胞上连续传至49代,提取第38、43、44、49代病毒RNA.通过RT-PCR方法扩增LLR株(38代)全基因组11个dsRNA片段和传代病毒VP6基因,分别将其克隆到pGEM-T载体中,进行序列测定与分析.结果 LLR株全基因组11条RNA,由18 498个核苷酸组成,共编码5 796个氨基酸;全基因组研究表明,所克隆的LLR株属于G10P[15]/NSP4[A]/SG Ⅰ基因型.LLR株VP6基因全长1 356 bp,含编码397个氨基酸的单一的开放读码框架(ORF).各代次病毒的VP6基因核苷酸与推导的氨基酸变化完全一致,与GenBank中LLR参考株(L11595)同源性分别为99.9％和99.7％.与16株SG Ⅰ亚群RV代表株之间,核苷酸与推导的氨基酸序列同源性分别为84.0％ ～ 99.7％和97.0％ ～ 99.2％;与不同亚群RV代表株之间,VP6基因核苷酸与推导的氨基酸同源性分别为77.7％ ～ 82.2％和92.2％ ～93.5％;LLR株各代病毒VP6基因核苷酸、氨基酸序列高度保守,各关键功能区未发生变异.结论 LLR疫苗株关键基因遗传特性稳定,为在分子水平保证LLR株毒种及其生产疫苗的安全性提供了依据;其全基因组克隆,为进一步研究RV生物学、免疫学和确定该病毒的分类学地位提供了科学依据.
关键词： 轮状病毒 兰州羔羊轮状病毒(LLR)株 基因组克隆 VP6基因 遗传稳定性 -
狂犬病病毒弱毒克隆株的毒力和免疫原性研究
目的 对狂犬病病毒CTN-181弱毒株经豚鼠颌下腺传代和空斑纯化而获得的3株弱毒株病毒(CTN-1-3,CTN-1-16和CTN-1-19)进行全面的致病性、免疫性研究和遗传稳定性研究.方法 分别对3株病毒用10、14和21日龄小鼠脑内接种,观察小鼠的发病死亡情况进行致病性研究;分别对3株病毒用3周龄小鼠进行肌内免疫和口腔免疫,测定小鼠中和抗体阳转率和中和抗体水平;将3株病毒在乳鼠脑内连续传代或豚鼠颌下腺传代,传代后病毒以小鼠脑内接种观察有无致病性进行遗传稳定性研究.结果 在致病性方面:3株病毒均对3周龄小白鼠脑内接种无致病性,其中CTN-1-3和CTN-1-19对14日龄乳鼠约半数存活,而CTN-1-16株则大部分死亡.对10日龄乳鼠只有CTN-1-3株不完全致死.在免疫性方面:3株病毒以≥5.5 lg PFU病毒肌内免疫或≥6.5 lg PFU口腔免疫的3周龄小鼠,30 d后的中和抗体阳转率均为100％,GMT分别为7.0～16.1 IU/ml和7.9～39.5 IU/ml.在遗传稳定性方面,3株病毒经1～3日龄乳鼠脑内连续传5代或豚鼠颌下腺传1代,传代增殖后的病毒滴度虽高达6.5或8.0 lg PFU/ml,对小鼠脑内接种仍保留无致病力的弱毒特性.结论 结果表明3株病毒的毒力已高度减弱,免疫效力良好,诱生的抗体水平很高,遗传稳定性十分稳定,是研发兽用狂犬病口服活疫苗和狂犬病暴露后人体免疫用减毒活疫苗的良好候选株.
