首页 > 文献资料
-
复合干扰素-α治疗慢性丙型肝炎
近慢性丙型肝炎的治疗策略发生了变化.2001年12月复合IFN-α(rIFN-α con1)与利巴韦林(ribavirin)+ IFNα-2b(intron A)联用疗法得到认可,同时,2002年2月又放宽了对现存IFN-α制剂使用时间的限制.本文主要以其中的rIFN-α con1的临床研究成果来探讨该药物的适应证及今后的研究重点.
-
疏水层析在去除复合干扰素聚集体中的应用
干扰素(interferon,IFN)是一种具有广泛生物活性的调节蛋白质,临床上主要用于抑制病毒的增殖.重组复合干扰素(consensus interferon,cIFN)是一种完全由人工设计的重组干扰素,是通过对14种天然亚型IFN序列的扫描,利用重组DNA技术,将这些亚型IFN蛋白质结构中每一位点上常见的氨基酸序列排列成一复合序列,再通过基因重组技术在大肠埃希菌中进行表达.
-
重组人复合干扰素的定点诱变及PEG化修饰
目的 将复合干扰素(consensus interferon,cIFN)76位点丙氨酸(Ala)突变为半胱氨酸(Cys),以期获得一种高效和可供聚乙二醇马来酰亚胺(PEG-MAL)定点修饰的IFN突变体分子.方法 采用同源序列对比、空间结构模拟并结合IFNα与受体结合的特点设计突变位点.通过基因工程方法获得cIFNm76工程菌,IPTG诱导表达,所得包涵体经变复性、DEAE阴离子及CM阳离子两步交换层析纯化后,采用SDS-PAGE和高效液相色谱法(HPLC)检测cIFNm76的纯度;细胞病变抑制法检测其体外抗病毒活性;REFLEXTMⅢ基质辅助激光解吸附电离飞行时间质谱法(MALDI-TOF-MS)测定其相对分子质量;SDS-PAGE分析cIFNm76与PEG-MAL的交联反应;并进行N-末端、C-末端序列测定及紫外光谱扫描.结果 cIFNm76以包涵体形式存在,表达量占菌体总蛋白的30％以上,纯度大于95％,比活性约为1.08×108 IU/mg,N-末端、C-末端氨基酸序列与理论一致,相对分子质量经MALDI-TOF-MS测定为19 500,紫外特征吸收波长为280 nm,与PEG-MAL成功交联.结论 成功获得一种高效和可供PEG-MAL定点修饰的cIFNm76,解决了现有PEG定点修饰技术存在的问题.
-
对治疗无应答的慢性丙型肝炎处理研究进展
近10年来慢性丙型肝炎(CHC)的治疗取得了较大的进展,从初的单用α干扰素治疗发展为α干扰素与利巴韦林联合治疗,到近几年来提倡采用聚乙二醇化(Peg)干扰素α-2a或2b加上利巴韦林治疗,使得持久病毒应答率(SVR)有了很大的提高.目前认为Peg干扰素α-2a或2b联合利巴韦林治疗是有效的抗丙型肝炎病毒(HCV)的治疗方案,其次是普通α干扰素或复合干扰素与利巴韦林联合疗法,效果均优于单用α干扰素.
-
聚乙二醇化重组复合干扰素对小鼠免疫功能的影响研究
目的 研究聚乙二醇化重组复合干扰素(PEG-IFNcon)对小鼠免疫功能的影响.方法 以重组复合干扰素(IFNcon,商品名:干复津)为对照,分别采用鸡红细胞吞噬法和四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法测定巨嗜细胞吞噬功能和淋巴细胞增殖作用,以3H-TdR掺入法测定刀豆蛋白A(Con A)诱导的淋巴细胞增殖活动.结果 PEG-IFNcon能提高小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能,显著改善环磷酰胺所致的小鼠淋巴细胞功能降低作用,在50～150 μg/mL剂量范围内亦能增强小鼠Con A诱导的淋巴细胞增殖反应.结论 PEG-IFNcon可显著增强小鼠免疫功能.
关键词： 聚乙二醇化复合干扰素 复合干扰素 巨嗜细胞吞噬 淋巴细胞增殖 免疫功能 -
重组复合干扰素基因工程菌发酵培养条件的研究
目的:研究表达重组复合干扰素(con-IFN)的工程菌E.coli DH5α(pBV220/con-IFN)的发酵条件.方法:在摇瓶实验中,采用正交设计法和均匀设计法确定较佳培养基组分;使用20 L发酵罐进行补料分批发酵实验,研究影响菌体生长和con-IFN表达的因素(如溶氧、补料、温度和诱导时间).结果:发酵培养基配方为蛋白胨10 g/L,酵母膏7.5 g/L,甘油0.5%,Na2HPO4·12H2O 20.13 g/L,KH2PO4 10.37 g/L,NaCl 9.31 g/L.确定了高密度发酵工艺,即优化的发酵培养基,初始pH 7.2,接种量5%,溶氧15%,先经35 ℃培养4 h,后降温至30 ℃培养2 h,再以42 ℃诱导7 h,诱导的同时补料酵母膏0.5%.在此条件下,发酵液可得15.2 g/L湿菌体,con-IFN的表达量占菌体总蛋白的49.60%,每毫升发酵液的抗病毒活性为9.69×108 IU.结论:获得了较满意的优化培养基配方和发酵条件,为下游纯化和进一步大规模生产奠定了基础.
-
干扰素治疗慢性乙型肝炎临床总结
目的 评价复合干扰素α(cIFNα)治疗慢性乙型肝炎(CHB)22例疗效.方法 对46例乙型肝炎患者随机分为两组,治疗组应用复合干扰素22例,对照组应用普通干扰素(IFNα-2b)24例,两组均按以下方法双盲治疗:前4周经皮下注射1次.后20周每周注射3次.研究分两个阶段:治疗周期为24周,停药后随访24周,治疗组CIFNα每次9μg,对照组IFNA-2 b每次3 MU.结果 治疗24周时,治疗组完全应答率、部分应答率和总应答率分别为31.8%、27.3%和59.1%,对照组分别为16.7%、12.5%和29.2%.两组相比治疗组抗病毒总应答率显著高于对照组(P＜0.05).结论 CJFNα治疗CHB在抗病毒应答率持续抗病毒应答率及诱导HBeAg/抗-Hbe血清转换方面均优于普通IFNα-2 b,并且安全性较好应推广应用.
-
复合干扰素在毕赤酵母中的分泌表达、纯化及活性分析
目的在毕赤酵母中高效分泌表达复合干扰素.方法根据毕赤酵母密码子偏性合成了复合干扰素基因,克隆至分泌型酵母表达载体pMEX9K,线性化后转化毕赤酵母GS115,筛选高表达菌株.诱导后的培养上清经过离子交换,疏水层析,凝胶过滤三步层析纯化,用细胞病变抑制法测定其活性,并结合lowry法蛋白定量计算其比活性.结果SDS-PAGE分析显示,重组蛋白以可溶性分子的形式存在于上清液中,经纯化后纯度达到96%,其N端氨基酸序列与理论值一致,比活与干复津相当.结论复合干扰素在毕赤酵母中获得高效分泌表达,为获得大量基因工程产品奠定了基础.
-
干扰素复治慢性丙型肝炎疗效预测指标的探讨
目的观察干扰素治疗复发及无应答慢性丙型肝炎时病毒动力学及丙氨酸氨基转移酶与疗效的关系. 方法选择32例干扰素治疗后复发或无应答的慢性丙型肝炎患者,用复合干扰素15 μg、每周3次皮下注射,疗程24周,检测治疗前、治疗中1、2、3 d和第1、4、8、12、24周及停药后随访6个月的丙型肝炎病毒RNA变化情况,判断治疗结束时应答率及随访6个月后持续应答率及其与治疗前后病毒水平动态变化的关系. 结果 31例患者完成治疗,持续应答与无应答及完全应答与无应答治疗前病毒载量有明显差异(P<0.05),获持续应答者中早期病毒血症的下降较非持续应答者明显(P<0.05),治疗12周时丙型肝炎病毒RNA阴转病例的治疗末应答及持续应答率显著高于阳性病例(P<0.05),治疗前基线丙氨酸氨基转移酶水平不影响应答情况(P>0.05). 结论复发或无应答的慢性丙型肝炎干扰素治疗中,基线病毒载量及治疗后早期病毒水平的动态变化可作为治疗效果的预测指标.
