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miR-200a在外阴鳞癌组织中的表达及临床意义
目的:分析外阴鳞癌(vulvar squamous cell carcinoma,VSCC)组织中微小RNA-200a(miR-200a)的表达及其临床意义.方法:通过RT-PCR检测外阴鳞癌组织25例、外阴上皮内非瘤样病变组织30例(其中包括外阴增生性营养不良15例、外阴萎缩性营养不良15例)以及正常外阴组织10例中miR-200a的表达.结果:miR-200a在外阴鳞癌组织中的相对表达量为(1.162±0.421),低于外阴上皮内非瘤样病变组织(2.723±1.151)及正常外阴皮肤组织(4.341 ±1.507) (P＜0.05),但在外阴上皮内非瘤样病变组织及正常外阴组织间表达量无明显差异.在不同临床分期、不同组织学分级的外阴鳞癌组织中miR-200a表达量有统计学差异(P＜0.05).结论:miR-200a在外阴鳞癌组织中的表达下调,提示其可能在外阴鳞癌的发生发展中起到抑癌基因的作用.
关键词： 微小RNA-200a 外阴鳞癌 RT-PCR -
微小RNA-200a在肝癌中的表达及其功能
目的 观察miR-200a在肝癌细胞HepG2和正常肝细胞QSG-7701中的表达,以及对肝癌细胞株HepG2增殖、凋亡、周期和侵袭能力的影响.方法 运用荧光定量PCR检测肝癌细胞HepG2和正常肝细胞QSG-7701中的miR-200a的表达量.运用MTT法、流式细胞仪和Transwell试验分析miR-200a对细胞增殖、周期、凋亡和侵袭能力的影响.结果 肝癌细胞HepG2中miR-200a表达水平为正常肝细胞4.79倍,癌细胞中miR-200a表达明显高于正常细胞(P＜0.01).在72 h浓度为150 nmol/L时,miR-200a对肝癌细胞增殖的促进作用明显,促进率为38.40％.与空对照组和负对照组比较,G0/G1期细胞未见明显增多(57.13±0.02)％,S期无明显减少(26.55±0.8)％,早期凋亡细胞比例未见明显升高(0.5±0.06)％(P＞0.05).Transwell实验结果显示100 nmol/L miR-200a mimics实验组相对穿出小室膜肿瘤细胞数为(0.348+0.005 657),与空对照组(0.296±0.006 364),负对照组(0.287±0.005 364)差异明显(P＜0.05).结论 miR-200a在肝癌细胞株中异常表达,癌细胞中的表达明显高于正常细胞,miR-200a对肝癌细胞株的增殖和侵袭能力有着明显的促进作用,其在肿瘤发生发展中可能担任着原癌基因的角色.
关键词： 肝肿瘤 微小RNA-200a 细胞增殖 侵袭 -
微小RNA-200a对人脑胶质瘤细胞恶性生物学行为的影响
目的 探讨微小RNA(miRNA,miR)-200a对胶质瘤细胞U251增殖、凋亡、迁移、细胞周期的影响及作用机制.方法 利用脂质体瞬时转染法将miR-200a模拟物(miR-200a组)和无义序列(Mock组)转染至体外常规培养人脑胶质瘤细胞株U251,同时设立Blank组(Blank组).转染48 h后实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)检测3组细胞miR-200a的表达;细胞计数盒8(CCK-8)法检测检测3组细胞增殖能力;划痕实验检测各组细胞迁移能力;流式细胞术检测细胞凋亡和细胞周期,Western blot检测各组细胞锌指E-盒结合同源异形盒1(ZEBl)和细胞周期蛋白D1(Cyclin Dl)蛋白的表达.结果 转染后48 h,与Mock组和Blank组比较,miR-200a组细胞中miR-200a相对表达量增高(分别为17.51±0.89,1.46±0.33,1.66±0.13),差异有统计学意义(P=0.000、0.000);miR-200a组细胞在转染12 h后增殖率开始降低,差异有统计学意义(P=0.028、0.010);miR-200a组细胞凋亡率增加(P=0.001、0.001),G0/G1期细胞比例增加(P=0.011、0.013),S期细胞比例明显降低(P=0.024、0.008);miR-200a组细胞迁移能力明显下降(P=0.031、0.030),Western blotting结果显示调控上皮-间充质转化(EMT)的主要分子ZEB1(P=0.042、0.034)及调控细胞周期进程的分子Cyclin D1表达均明显下调,差异有统计学意义(P=0.020、0.013).结论 上调miR-200a的表达可以促进胶质瘤细胞凋亡,阻滞其细胞周期进程,抑制其迁移能力.
关键词： 胶质瘤 微小RNA-200a 细胞凋亡 细胞周期 细胞迁移 -
抑制微小RNA-200a表达对胰腺癌上皮-间充质转化过程的影响
目的 观察微小RNA (miR)-200a在胰腺癌干细胞中的表达,探讨miR-200a在胰腺癌上皮-间充质转化(EMT)过程中的作用.方法 采用流式分析法从胰腺癌细胞株PANC-1中分选出C D24+ CD44+上皮特异性抗原(ESA)+三阳性的胰腺癌干细胞(PCSCs),通过逆转录实时定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测PCSCs中miR-200a的表达,通过miR-200a inhibitor转染PANC-1细胞抑制其表达水平,检测miR-200a表达与EMT相关性.结果 PCSCs显示EMT表型,并且其miR-200a的表达(1.0000 ±0.353 0)显著低于PANC-1细胞中miR-200a表达(0.237 1 ±0.107 1).PCSCs呈现EMT相关表型.转染miR-200a inhibitor后PANC-1细胞EMT特征基因的表达发生了改变,N-钙黏蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)和转录抑制因子锌指E-盒结合同源异形盒(ZEB1) mRNA的表达显著升高,而E-钙黏蛋白(E-cadherin)的表达显著降低.miR-200a抑制组、PANC-1对照组以及转染无意义序列组E-cadherin表达分别为0.356 0±0.201 0、1.000 0±0.150 0和1.100 0±0.200 0;N-cadherin表达分另别为2.890 0±0.225 0、1.000 0±0.260 0和0.850 0±0.240 0;ZEB1表达为3.840 0±0.480 0、1.000 0±0.160 0和0.9400 ±0.1400;Vimentin表达分别为3.7500±0.4100、0.9186±0.2100和1.2000±0.1800.PANC-1细胞形态明显向间质细胞形态发生转变.同时,抑制miR-200a表达显著提高了PANC-1的侵袭和迁移能力,分别比对照组升高3.4和2.8倍.结论 miR-200a可能参与胰腺癌EMT过程的调节.
关键词： 胰腺癌 肿瘤干细胞 微小RNA-200a 上皮-间充质转化 -
微小RNA-200a在肝癌患者血清及癌组织中的表达及其与预后的关系
目的 探讨肝癌患者血清及癌组织中微小RNA(miRNA,miR)-200a表达及与预后的关系.方法 选取郑州人民医院及郑州大学附属肿瘤医院肝胆外科行手术治疗的肝细胞肝癌患者95例,利用实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)技术检测肝癌患者血清及肿瘤组织中miR-200a表达,并分析miR-200a表达与临床病理特征及患者预后的关系.结果 肝癌患者血清中miR-200a相对表达量为4.57±1.36,低于对照组的5.98±0.62,差异有统计学意义(P＜0.05);肝癌患者正常肝组织、癌旁组织及肝癌组织中miR-200a表达量分别为2.67 ±0.31、1.73±0.15和0.68 ±0.11,差异有统计学意义(P＜0.05),两两比较,miR-200a表达量:肝癌组织＜癌旁组织＜正常肝组织,差异均有统计学意义(P＜0.05);肝癌患者血清中miR-200a表达量与甲胎蛋白(AFP)水平、分化程度、是否转移、TNM分期有关(P＜0.05),肝癌患者肝癌组织中miR-200a表达量与分化程度和是否转移有关(P＜0.05);高表达组5年累积生存率为63.7％,低表达组5年累积生存率为41.9％,高表达组患者术后生存明显好于低表达组患者(x2 =4.711,P＜0.05).结论 miR-200a在肝癌患者血清和肝癌组织中均呈低表达,是重要的抑癌基因,与肿瘤恶性程度密切相关,并可影响患者预后.
关键词： 癌 肝细胞 微小RNA-200a 血清 预后 -
人微小RNA-200a的生物学功能及其在结肠癌中的意义
目的 探讨人微小RNA(miR)-200a的生物学功能及其在结肠癌中的意义.方法 采用miRWalk在线工具筛选miR-200a靶基因,使用DAVID、京都基因和基因组百科全书数据库和STRING分别进行靶基因功能分析、信号通路分析和蛋白互作网络分析.从癌症基因组图谱(TCGA)数据库中下载结肠癌的临床数据和测序数据,包括453个癌组织样本和8个正常肠黏膜组织样本,对比癌组织和正常组织miR-200a表达水平,分析miR-200a与结肠癌患者临床病理参数、生存时间的关系.结果 共筛选出200个靶基因,这些靶基因参与的主要生物过程为氧化应激反应,主要参与的细胞成分为细胞外泌体,分子功能为SH2域结合,主要参与的信号通路为miR在肿瘤中的信号通路.蛋白互作网络显示PH区域富含亮氨酸残基的蛋白磷酸酶1(PHLPP1)、富亮氨酸重复激酶2、沉默信息调节因子α相关酶1(SIRT1)、CT10调节酶(CRK)、E2F3为网络中的核心基因.结肠癌组织miR-200a表达水平高于正常组织(P<0.05);结肠癌临床分期Ⅲ+Ⅳ期者、远处转移者的miR-200a表达水平分别高于临床分期Ⅰ+Ⅱ期者、无远处转移者(P<0.05);miR-200a高表达的患者生存时间较低表达者短(P<0.05).结论 人miR-200a通过靶基因发挥多种生物学作用,其在结肠癌组织中高表达,可能与肿瘤的发生和发展有关,或可用于评估患者预后.
关键词： 结肠癌 微小RNA-200a 靶基因 生物信息学 生存分析 -
miR-200a与肝细胞癌增殖转移及预后关系的研究进展
目的 对近年来微小RNA (miR)-200a与肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)增殖转移及预后关系的研究进展进行综述.方法 系统查阅国内外相关文献,总结miR-200a在HCC中的表达情况,及其在HCC增殖、转移、预后等过程中的作用及相关机制.结果 miR-200a在HCC的组织、细胞及患者血清中的表达下调,正常表达或高表达的miR-200a对HCC细胞的增殖及侵袭转移具有显著的抑制作用,HCC患者癌组织和血清中miR-200a的差异性表达对HCC的诊断和预后判断具有一定的潜在价值.尽管目前有关miR-200a与HCC的研究取得了诸多进展,但只有少部分生物学功能得到鉴定,其相应的下游靶基因调控机制亦尚待进一步研究.结论 miR-200a不仅对HCC的增殖、侵袭和转移具有抑制作用,而且在HCC的早期诊断、预后判断等方面具有一定的临床应用价值.
