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Ⅰ型单纯疱疹病毒单克隆抗体的制备及其应用
目的：：制备并筛选HSV-1单抗,建立定量检测HSV-1病毒颗粒抗原的双抗体夹心ELISA方法,用于HSV-1病毒颗粒的质控。方法：以HSV-1免疫BALB/c小鼠制备单克隆抗体,以筛选的中和单克隆抗体1F6为捕捉抗体,HRP标记的2B1为检测抗体,构建定量检测HSV-1病毒颗粒抗原的双抗体夹心ELISA方法,并对本方法的特异性、灵敏度、精密度、准确性和线性等性能进行验证。用本方法定量检测的病毒量与病毒滴度作回归分析。结果：构建的双抗体夹心定量检测HSV-1病毒颗粒抗原的ELISA方法,线性范围为0．125~2μg/ml,相关系数为R2=0．9955,定量限度为0．125μg/ml,试剂的变异系数CV<10%,抗原回收率介于85．6%~107．1%之间。与HSV-1以外的其他样本无交叉反应。本方法检测与病毒感染滴度具有很好的相关性。结论：成功构建了定量检测HSV-1含量的ELISA方法,为HSV-1病毒颗粒抗原定量检测提供快速手段。
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1型单纯疱疹病毒抗体与阿尔茨海默病的关联研究
目的 探讨老年人群1型单纯疱疹病毒(HSV-1)感染与阿尔茨海默病(AD)的关联性.方法 共入组AD患者101例,男74例,女27例,年龄77~93岁.正常对照组107例,男81 例,女26例,年龄71~89岁.采用认知障碍简明评价量表(Cog-12)、简易智力状态检查量表(MMSE)、蒙特利尔认知评估量表(MoCA)等进行认知功能评分.应用ELISA 法测定HSV-1抗体、血浆Tau 蛋白.结果 两组间年龄、性别构成的差异无统计学意义.AD组HSV-1抗体阳性率为79.2%,对照组为58.0%,AD组明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05).回归分析显示HSV-1抗体阳性、糖尿病、高胆固醇血症等是AD患病的危险因素.结论 HSV-1感染是AD患病可能的危险因素之一;外周血浆Tau蛋白水平与AD患病无明显关联.
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基于CRISPRCas/9基因编辑技术在HSV-1病毒感染疾病治疗中的应用sgRNA序列的设计
CRISPR-Cas9基因编辑技术是基于细菌或古细菌CRISPR介导的获得性免疫系统衍生而来,由一段RNA通过碱基互补配对识别DNA,指导Cas9核酸酶切割识别的双链DNA,进而对目的 DNA编辑.病毒通过特异的受体侵染细胞[1],其基因组在细胞内发生复制、转录、翻译等过程完成其生活周期.基因治疗是病毒感染疾病治疗的新趋势,因此,基因编辑技术在病毒感染疾病治疗中具有重大意义.我们主要从CRISPR-Cas9作用机制以及在HSV-1病毒感染疾病治疗中的应用等方面进行了阐述.
关键词： CRISPRCas/9系统 基因编辑 HSV-1病毒 -
通过CRISPR Cas/9系统敲除ICP227蛋白基因抑制单纯孢疹病毒HSV-1的复制
CRISPR-Cas9基因编辑技术是基于细菌或古细菌CRISPR介导的获得性免疫系统衍生而来,由一段RNA通过碱基互补配对识别DNA,指导Cas9核酸酶切割识别的双链DNA,诱发同源重组或非同源末端链接,进而实现在目的 DNA上进行编辑.病毒通过特异的受体侵染细胞[1],其基因组在细胞内发生复制、转录、翻译等过程完成其生活周期,某些DNA病毒或逆转录病毒基因组会整合到宿主基因组中.基因治疗是病毒感染疾病治疗的新趋势,因此,基因编辑技术在持续感染的病毒或潜伏感染病毒疾病治疗中具有重大的潜在意义.本文我们利用CRISPR-Cas9敲除HSV-1病毒复制过程中重要基因,从而抑制病毒的复制,对病毒感染的治疗中有重要意义.
关键词： CRISPRCas/9系统 ICP27蛋白 HSV-1病毒
