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可溶性PD-1酶联检测试剂盒的研制及其应用
目的:建立人的可溶性PD-1(sPD-1)酶标检测试剂盒并探讨其检测的临床意义.方法:在已成功获得两株识别位点不同的鼠抗人PD-1分子单克隆抗体(1F2和5F10)的基础上,采用该室制备的鼠抗人PD-1分子单克隆抗体(1F2)作为包被抗体,应用本室制备的单抗5F10经生物素(biotin)标记后作为检测抗体,建立双单抗夹心的人sPD-1酶标检测方法,并对健康供血员、甲亢、血液病患者的血清中sPD-1的含量进行了检测.结果:成功研制了人sPD-1酶联检测试剂盒,其灵敏度为200.00pg/ml.该试剂盒4℃放置1个月,离散度(CV%)＜±5.17,回收率为95%～115%,提示该检测试剂盒具有良好的灵敏度、稳定性和准确性.用该试剂盒测得血清中sPD-1的正常值为1.103±0.240 ng/ml,再生障碍性贫血患者血清中sPD-1的含量明显高于正常对照组,而甲亢和器官移植病人血清中sPD-1的含量和正常值相比没有显著差异(P＜0.05).结论:成功研制了检测人sPD-1酶标检测试剂盒,并首次发现再生障碍性贫血患者血清中sPD-1的含量较高,该试剂盒在临床病人sPD-1的检测中具有潜在的应有价值.
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定量检测PD-1单克隆抗体ELISA法的建立
目的 建立一种高特异、高灵敏、新型的定量检测食蟹猴血清中PD-1单克隆抗体质量浓度的ELISA方法.方法 用重组人PD-1作为抗原包被到96孔板上,加入系列浓度标准品(PD-1单克隆抗体)和稀释的食蟹猴血清,再加入稀释的猴血清吸附的羊抗人IgG-HRP(二抗),二抗与结合到抗原上的PD-1单克隆抗体特异性结合,加入底物显色剂,用硫酸终止,在450 nm下读数.结果 在40～0.625 ng/ml范围内,PD-1单克隆抗体质量浓度的对数值与吸光值呈S形曲线,方法灵敏度为0.625 ng/ml,TNF-α、rHSA、PEG-GH和受试品PD-1单克隆抗体均无交叉反应,方法的回收率为94.5％ ～98.0％,板内精密度波动在-4.1％～-0.1％,板间精密度波动在-5.0％～-1.0％.结论 本方法符合新生物制品临床前药代动力学研究指导原则的要求,可用于食蟹猴体内PD-1单克隆抗体的定量检测.
