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可溶性PD-1在类风湿关节炎患者表达差异的研究
目的 分析可溶性PD-1(sPD-1)在类风湿关节炎(RA)患者中表达的差异性.方法 将103例RA患者分为试验A组46例(慢性缓解期RA患者)和试验B组57例(急性活动期RA患者),另取50例健康志愿者为对照组.用酶联免疫吸附法检测sPD-1水平,用流式细胞术检测可溶性OX40配体(sOX40)水平.结果 试验A组、试验B组和对照组的sPD-1分别为(39.02±4.80),(50.01±6.38)和(19.97±1.31) ng·mL-1,sOX40分别为(6.18±1.84)％,(7.94±2.17)％和(4.02±0.83)％,试验A组和试验B组的上述指标比较,差异均有统计学意义(均P ＜0.05).结论 RA患者外周血sPD-1表达水平和患者临床症状、临床分期有关.
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类风湿关节炎患者血清IL-37和可溶性PD-1分子的表达水平及临床意义
目的:通过研究类风湿关节炎(RA)患者血清IL-37和可溶性PD-1分子的表达水平,初步探讨其与RA的相关性以及临床意义.方法:收集RA患者及对照组人群的外周血,然后采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测30例RA患者(RA标准评分≥6)和30名健康对照组血清中IL-37、sPD-1的表达水平,结合分析两组人群外周血IL-18、IL-6和IL-18BP三种细胞因子的表达,并通过Pearson相关分析其相关性.结果:经ELISA检测发现,RA组患者外周血中IL-37和sPD-1以及其他几种炎症相关细胞因子IL-18、IL-18BP、IL-6的表达水平均高于健康对照组(P<0.05);且IL-37与细胞因子IL-18、IL-18BP、IL-6均呈正相关,sPD-1仅与细胞因子IL-6呈正相关,IL-37、sPD-1均与患者病情程度评分呈正相关.结论:IL-37、sPD-1在RA患者中表达水平升高,且与其他炎性细胞因子及疾病严重程度具有相关性,两者在RA的进展中可能发挥着重要的调控作用,为今后RA治疗提供新的依据.
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可溶性PD-1酶联检测试剂盒的研制及其应用
目的:建立人的可溶性PD-1(sPD-1)酶标检测试剂盒并探讨其检测的临床意义.方法:在已成功获得两株识别位点不同的鼠抗人PD-1分子单克隆抗体(1F2和5F10)的基础上,采用该室制备的鼠抗人PD-1分子单克隆抗体(1F2)作为包被抗体,应用本室制备的单抗5F10经生物素(biotin)标记后作为检测抗体,建立双单抗夹心的人sPD-1酶标检测方法,并对健康供血员、甲亢、血液病患者的血清中sPD-1的含量进行了检测.结果:成功研制了人sPD-1酶联检测试剂盒,其灵敏度为200.00pg/ml.该试剂盒4℃放置1个月,离散度(CV%)＜±5.17,回收率为95%～115%,提示该检测试剂盒具有良好的灵敏度、稳定性和准确性.用该试剂盒测得血清中sPD-1的正常值为1.103±0.240 ng/ml,再生障碍性贫血患者血清中sPD-1的含量明显高于正常对照组,而甲亢和器官移植病人血清中sPD-1的含量和正常值相比没有显著差异(P＜0.05).结论:成功研制了检测人sPD-1酶标检测试剂盒,并首次发现再生障碍性贫血患者血清中sPD-1的含量较高,该试剂盒在临床病人sPD-1的检测中具有潜在的应有价值.
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sPD-1过表达增强衰老肿瘤细胞疫苗抗小鼠乳腺癌作用
目的 探讨可溶性PD-1(sPD-1)过表达后对衰老肿瘤细胞疫苗(STCV)抗小鼠乳腺癌的增强作用.方法 干扰素γ(IFN-γ)刺激小鼠乳腺癌细胞4T1,流式细胞术检测PD-L1表达;sPD-1过表达慢病毒感染4T1,显微镜观察增强绿色荧光蛋白表达情况;CCK8实验比较4T1、4T1/sPD-1增殖活力;qRT-PCR、Western blot从mRNA、蛋白质水平验证sPD-1表达;干扰素γ预处理4T1细胞,添加4T1/sPD-1培养上清,孵育后流式细胞术检测PD-1阳性细胞比例;X射线照射联合Veliparib处理4T1、4T1/sPD-1细胞,衰老相关β-半乳糖苷酶(SA-β-gal)染色,观察蓝染细胞比例;Balb/c小鼠右后腿皮下种植4T1,左后腿注射PBS、4T1 STCV、4T1/sPD-1 STCV,观察各组小鼠成瘤率.结果 IFN-γ能导致4T1细胞PD-L1上调(P<0.001),且浓度越高,PD-L1表达上调越明显,高达(84.80±1.03)％;病毒感染4T1细胞后,显微镜下可见绿色荧光;CCK8实验中4T1、4T1/sPD-1细胞增殖曲线无明显差异(P>0.05);4T1/sPD-1细胞在mRNA和蛋白质上均可检测到sPD-1表达产物,4T1细胞则均未能检测到;干扰素γ预处理的4T1细胞,PD-1阳性比例(6.893±0.271)％,添加4T1/sPD-1细胞培养液处理后,PD-1阳性细胞比例升高达(55.450±0.555)％(P<0.001);4T1、4T1/sPD-1在联合处理后,镜下见大量蓝染变形的衰老细胞;小鼠荷瘤实验中,预防肿瘤发生实验,PBS组所有小鼠出现肿瘤生长,4T1 STCV组有28.787％小鼠未发生肿瘤,4T1/sPD-1 STCV组近55.556％小鼠未发现肿瘤发生;治疗肿瘤实验中,观察期内PBS组小鼠均发生肿瘤,4T1 STCV、4T1/sPD-1 STCV组无瘤小鼠比例分别为11.111％和38.89％.结论 衰老肿瘤细胞疫苗对小鼠乳腺癌具有防治作用,且sPD-1过表达后能够增强衰老肿瘤细胞疫苗的抗肿瘤作用.
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人可溶性PD-1在肝病患者血清中表达检测及临床意义
目的 利用自主研发的可溶性PD-1 (soluble PD-1,sPD-1)检测试剂盒,检测肝病患者外周血中sPD-1表达水平并分析其临床意义.方法 40例初诊HBV感染患者,其中单纯HBV+患者13例、合并肝硬化患者17例以及合并肝癌患者10例.同时收集16例性别年龄匹配的健康人作为对照组.利用自主研发的PD-1 ELISA试剂盒分析sPD-1表达水平,并结合临床资料分析sPD-1与临床参数的相关性以及在鉴别诊断中的价值.结果 HBV感染患者体内sPD-1水平显著高于健康对照组(P＜0.05);单纯性HBV感染组、合并肝硬化组以及合并肝癌组sPD-1水平(μg·L-1)分别为4.755±1.554、0.940 2±0.231 9和0.766 5±0.349 1.各肝病患者组之间sPD-1水平存在显著性差异(P＜0.01);且单纯HBV感染组sPD-1水平显著高于合并肝硬化(P＜0.05)以及合并肝癌组(P＜0.01);肝硬化组和肝癌组两者之间sPD-1水平不存在显著差异(P＞0.05).sPD-1水平与临床检验指标如T-BIL、D-BIL、I-BIL、AST以及ALT呈线性正相关,有统计学意义(P＜ 0.05);sPD-1与ALP、TP、H-ALB、UREA、Cr-s以及UA未见显著相关性(P＞0.05).ROC曲线分析发现,sPD-1在对健康照组与单纯乙肝患者鉴别中具有显著差异(P=0.002).结论 sPD-1在单纯HBV感染患者体内显著升高,并在疾病进程呈现动态变化.提示其在肝病进展中可能发挥着重要的调控作用.
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腹腔镜精准肝切除对原发性肝癌患者MMP、VEGF、sPD-1的影响
目的 探讨腹腔镜精准肝切除(laparoscope precise hepatectomy,LPH)对原发性肝癌(primary liver cancer,PLC)患者基质金属蛋白酶(MMP)、血管内皮生长因子(VEGF)、可溶性PD-1(sPD-1)的影响.方法 选取2014年1月至2016年12月于成都医学院第一附属医院行手术治疗的PLC患者120例为研究对象,按照随机数字表法分为试验组和对照组,各60例.对照组患者行非规则性肝切除,试验组患者行LPH.观察两组患者手术情况及术后恢复指标;两组患者术前、术后7 d MMP-2、MMP-9及VEGF、sPD-1水平;T细胞(T)、辅助性T细胞(Th)、抑制性T细胞(Ts)、细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)、自然杀伤细胞(NK)等免疫因子水平;术后并发症发生情况、术后1年复发情况等指标.结果 与对照组比较,试验组患者术中出血量、输血量、引流量、排气时间及住院时间均较少,肝门阻断时间、手术时间均较长,差异有统计学意义(P<0.05);术后7 d,两组患者MMP-2、MMP-9、VEGF指标比较,差异无统计学意义(P>0.05);术后7 d,试验组患者sPD-1水平高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);术后7 d,试验组患者T、Th、CIK、NK水平高于对照组,Ts水平低于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05);试验组患者术后并发症发生率为5.00％(3/60),低于对照组的18.33％(11/60),差异有统计学意义(P<0.05).试验组与对照组患者术后1年复发率(23.33％vs 28.33％)比较,差异无统计学意义(P>0.05).结论
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棘球蚴病患者血清中可溶性PD-1/PD-L1与相关细胞因子的水平变化
目的 检测包虫患者血清中可溶性程序性死亡分子1(sPD-1)及其配体sPD-L1,Th1型细胞因子IFN-γ、Th2型细胞因子IL-6以及Th17细胞因子IL-17的分泌水平,探讨它们在包虫病感染过程中的相关作用.方法 采用细胞因子磁珠阵列测定(CBA)法检测包虫患者血清中Th1、Th2、Th17细胞因子的分泌水平；ELISA检测可溶性PD-1、PD-L1的表达水平.结果 与健康对照组相比,棘球蚴病患者血清中可溶性PD-1的浓度略升高但低于sPD-L1,sPD-L1浓度升高明显,Th2、Th17细胞相关细胞因子的分泌水平明显升高(P＜0.01),而Th1细胞相关细胞因子分泌水平未见明显变化(P＞0.05).结论 棘球蚴病感染过程中存在Th1/Th2的表达失衡,而炎性细胞Th17细胞参与机体免疫调节.sPD-1与sPD-L1通过动态平衡参与机体免疫调控,促进棘球蚴免疫逃逸.
