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活动性结核病人PBMCs中转录因子PLZF的表达降低与iNKT细胞的减少相关
目的:比较活动性结核病人和健康人外周血单个核细胞(PBMCs)中转录因子PLZF (Promyelocytic leukemia zinc finger)的表达和iNKT细胞含量的差异,研究活动性结核病人PBMCs中PLZF的表达与iNKT细胞含量的相关性.方法:采集活动性结核病人和健康人新鲜的抗凝血,淋巴细胞分离液分离PBMCs.每个样本的PBMCs分两份,一份细胞用Trizol法提取总RNA,荧光定量PCR检测PLZF mRNA的相对表达量;另一份细胞用特异性抗体标记iNKT细胞,流式细胞仪检测iNKT细胞的含量.统计学软件分析两组样本PLZF的表达和iNKT细胞含量的差异,以及PLZF的表达与iNKT细胞含量的相关性.结果:活动性结核病人PMBCs中PLZF的表达和iNKT细胞含量均显著低于健康对照(P值分别为0.010 2和0.001 2),PLZF的表达与iNKT细胞的含量成正相关(r=0.480 4,P=0.027 5).结论:活动性结核病人PLZF的表达降低与iNKT细胞百分含量的减少相关.
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PLZF结构功能的研究进展
PLZF发现于少见的t(11;17)导致的早幼粒细胞白血病,形成的PLZF-RARa和RARa-PLZF导致发生早幼粒细胞白血病.PLZF基因敲除小鼠表现为后肢骨骼的形态缺陷及部分前肢骨骼缺陷,PLZF还与神经发育有密切的关系.这些表明PLZF在胚胎发育中起十分重要的作用.随着研究的逐渐深入,发现PLZF与许多重要的基因都有相互作用,例如HOX、PML、BCL-6、GATA家族及细胞周期调控基因等,这些基因与发育及肿瘤的发生息息相关.因此围绕PLZF基因的研究将有助于阐明机体的发育、造血机制.
关键词： PLZF BTB/POZ结构域 APL -
大鼠pEGFP-N1-PLZF真核表达载体的构建和意义
目的 构建真核表达载体pEGFP-N1-PLZF,为基因水平研究早幼粒细胞白血病锌指蛋白(PLZF)在精原干细胞增殖和分化中的调控机制提供理论参考.方法 参考分子克隆技术,采用RT-PCR的方法从大鼠睾丸组织中扩增PLZF,将该基因连接克隆到含有增强型绿色荧光蛋白(EGFP)报告基因的真核表达载体pEGFP-N1上,以构建重组质粒pEGFP-N1-PLZF.结果 实验从大鼠睾丸组织中提取总RNA,以RT-PCR方法获取编码PLZF基因的全序列cDNA.构建PLZF的c DNA真核表达质粒时将能发出绿色荧光的EGFP报告基因融合在PLZF基因,并经酶切后DNA电泳鉴定及DNA测序证实结果.结论 构建重组质粒pEGFP-N1-PLZF成功,实验中将能发出绿色荧光的EGFP报告基因融合在PLZF基因的3'端.提高PLZF在真核细胞中的表达,而且不影响其目的 蛋白的结构和功能,对研究PLZF调控精原干细胞增殖和分化机制具有重要的意义.
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辐射致雄性小鼠不育症模型的建立及生精细胞损伤的初步分析
目的：构建辐射致雄性小鼠不育症模型，并对模型小鼠的生精细胞损伤进行初步分析。方法：不育症模型构建：65只雄性C57BL/6小鼠随机分为7组，正常对照组(A组)及6组60Co γ照射组，后者包括B组(12 Gy)、C组(6+6 Gy)、D组(10 Gy)、E组(6+4 Gy)、F组(8 Gy)、G组(4+4 Gy)。观察分析小鼠死亡情况(24w)及30、50、70 d受孕率。生精细胞损伤分析：72只雄鼠随机分为4组：正常对照组、6+4 Gy组、4+4 Gy组、6 Gy组。30、50、70 d观察睾丸组织切片(HE染色)并评估其生精功能( Johnsen评分)；对PLZF阳性标记的精原干细胞(免疫组化法)计数。结果：A、E、F、G组生存时间较长，B、C组生存时间较短。30、50、70 d，D、E组受孕率均为0%。各照射组Johnsen评分均低于对照组(P<0.05)；6+4 Gy组的PLZF阳性细胞计数呈逐渐上升趋势，但均明显低于对照组(P<0.05)。结论：6+4 Gy的60Co-γ射线照射7周龄的C57BL/6雄性小鼠，可以构建不育症模型。模型小鼠的PLZF标记的精原干细胞计数虽然低于对照组，但并非完全消失，提示不育症的原因并非精原干细胞的完全消亡。
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PLZF与白血病研究进展
急性早幼粒细胞白血病(APL)具有特征性染色体易位(chromosomal translocation)-t(15;17)(q22;q21),形成融合基因PML-RARα,所编码的蛋白在APL发病及诱导分化治疗的分子机制中占有重要地位.近年来进一步研究发现部分APL患者的染色体易位位于t(11;17)(q23;q21),11q23区域为一个新的锌指基因,即早幼粒细胞白血病锌指基因(promyelocytic leukemia zincfinger gene,PLZF)[1],所致融合基因为PLZF-RARα或RARα-PLZF,目前仅见于1%～2%的APL患者,但因其与t(15;17)APL患者相比对全反式视黄酸(all-trans retinoic acid,ATRA)反应较差,且具有独特的临床表型,故深入研究有助于完善APL的具体发病机制,结合近期针对PLZF的研究进展,现综述如下.
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氧化砷和维甲酸对PLZF-RARa阳性U937细胞的作用
目的:研究氧化砷(As2O3)和全反式维甲酸(ATRA)对PLZF-RARα阳性细胞的作用.方法:稳定转染PLZF-RARα基因的U937细胞(U937/PLZF)经As2O3、ATRA处理后,Wright-Giemsa染色观察细胞形态,MTT法检测细胞生长增殖状态,流式细胞术(FCM)检测细胞周期和细胞表面分化抗原CD11b、CD64、CD14等的表达变化,荧光免疫细胞化学染色检测融合蛋白表达,细胞化学染色和硝基蓝四氮唑(NBT)还原试验观察细胞功能分化情况.结果:U937/PLZF细胞在去除四环素条件培养后,PLZF-RARα表达明显增加.As2O3 (0.5 μmol/L)联合ATRA(1 μmol/L)使U937/PLZF细胞核质比缩小,核仁减少但未消失;生长增殖受抑;S期细胞减少;CD11b表达增高;PLZF-RARα蛋白表达减弱,分布以胞核弥漫细小颗粒为主.细胞化学染色和NBT反应变化不明显.结论:0.5 μmol/L As2O3联合1 μmol/L ATRA可使PLZF-RARα阳性U937细胞产生轻微的形态学分化趋势,尚不足以引起其发生功能分化.
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曲古菌素A和ATRA合用对PLZF-RARα转基因阳性发病鼠骨髓细胞的诱导分化作用
目的:研究组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古菌素A(trichostatin A,TSA)和ATRA对PLZF-RARα转基因发病鼠骨髓细胞的作用. 方法:分子克隆技术构建hCG-PLZF-RARα转基因构件. 显微注射建立仅在髓系细胞中表达PLZF-RARα的转基因小鼠模型. DNA-PCR,Southern blot,RT-PCR,免疫荧光,血象,骨髓象,脾细胞形态,病理等检测分析基因整合表达及发病情况. 取PLZF-RARα转基因发病鼠骨髓细胞体外培养,经TSA和ATRA作用一段时间后,Wright-Giemsa 染色观察细胞形态,流式细胞仪检测细胞周期、细胞表面分化抗原CD11b和CD117等的表达,荧光免疫细胞化学染色检测融合蛋白表达,硝基蓝四氮唑(NBT)还原试验观察细胞功能分化情况. 结果:TSA(30 μg/L)联合ATRA(1 μmol/L)使发病鼠骨髓细胞核质比缩小,幼稚细胞比例减少,细胞生长增殖受抑,S期细胞减少,PLZF蛋白的表达呈局部聚集的趋势,但NBF还原试验变化尚不明显. 结论:组蛋白去乙酰化酶抑制剂TSA联合ATRA可使PLZF-RARα转基因发病鼠骨髓细胞发生部分分化.
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组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古菌素A联合全反式维甲酸诱导PLZF-RARα阳性U937细胞分化
目的:研究组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古菌素A(TSA)和全反式维甲酸(ATRA)对PLZF-RARα阳性细胞的作用.方法:稳定转染PLZF-RARα基因的U937细胞(U937/PLZF)经TSA, ATRA作用一段时间后,Wright-Giemsa染色观察细胞形态,MTT法检测细胞生长和增殖状态,流式细胞仪检测细胞周期和细胞表面分化抗原CD11b,CD64,CD14等的表达,荧光免疫细胞化学染色检测融合蛋白表达,细胞化学染色和硝基蓝四氮唑(NBT)还原试验观察细胞功能分化情况.结果:U937/PLZF细胞在去除四环素条件培养后,PLZF-RARα表达明显增加.TSA (30 μg/L)联合ATRA (1 μmol/L)使U937/PLZF细胞核质比缩小,生长增殖受抑,S期细胞减少,CD11b表达增高,PLZF-RARα蛋白表达减弱,分布以胞核弥漫细小颗粒为主,细胞功能上的分化可能尚不成熟.结论:组蛋白去乙酰化酶抑制剂TSA联合ATRA可使U937/PLZF细胞发生部分分化.
