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胃癌患者HLA-I、B7-1、β2 m的表达
目的探讨HLA-I、β2m、B7-1分子在肿瘤发生、发展中的作用.方法流式细胞技术检测胃肿瘤细胞和外周血淋巴细胞HLA-I、β2m、B7-1分子的表达;放射免疫技术(RIA)检测血清中β2m的含量.结果①胃癌细胞表面HLA-I分子表达明显降低.②胃癌细胞表面B7-1分子表达明显降低或缺如.③β2m在肿瘤细胞上的表达明显增高;作相关分析发现,β2m与HLA-I的表达呈负相关关系(r=-0.470,P＜0.05).④在外周血淋巴细胞上各指标的表达情况,HLA-I表达丰富,胃癌患者与正常人之间无显著性差异;B7-1的表达微弱,胃癌患者的表达低于正常人;β2m的表达丰富,胃癌患者的表达高于正常人;⑤血清中β2m的含量,胃癌患者高于正常人,血清中β2m的含量与外周血淋巴细胞β2m表达有正相关关系(r=0.546,P＜0.05).结论肿瘤细胞低表达HLA-I和B7分子是肿瘤发生、发展的重要机制;β2m在肿瘤的诊断、治疗和预后判断有一定价值.
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小鼠β2m反义核酸重组荧光蛋白表达载体的构建及表达研究
本研究应用分子生物学技术,构建小鼠β2m反义核酸重组荧光蛋白表达载体pEGFP-β2mAN,经过酶切、PGR鉴定,以及序列分析证实克隆的正确性.然后用脂质体转染NIH3T3细胞,经过RT-PCR及Western blot检测,观察重组质粒对细胞β2m mRNA和蛋白表达的影响,同时在荧光显微镜下直接观察细胞转染的结果.结果证明pEGFP-β2mAN已成功导入NIH3T3细胞中,且有效表达,在荧光显微镜下可见梭形绿色荧光细胞;与同步转染的小鼠β2m正、反义核酸表达载体pcDNA3-β2mSN、pcDNA3-β2mAN的转染结果一起进行分析,转染pcDNA3-β2mSN细胞的β2m mRNA和蛋白表达水平升高,而转染pcD-NA3-β2mAN和pEGFP-β2mAN的细胞β2m mRNA和蛋白表达水平降低.小鼠β2m反义核酸重组荧光蛋白表达载体pEGFP-β2mAN的转染结果显示:它不但可以降低NIH3T3细胞β2m基因的表达,而且为观察脂质体转染效果提供了直观、即时的方法.
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肾病综合症血β2M和尿β2M检测的意义
目的探讨血、尿β2M检测在肾病综合症诊断、治疗及预后的意义.方法在肾病不同时期测定血、尿β2M的数值.结果肾病活动期血尿β2M值明显高于缓解期和正常对照值.结论血、尿β2M增高对肾病综合症的分期有意义,对肾病分型有一定参考价值.
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HBeAg与IL-18表达的关系对轻度慢性乙肝的影响及其临床意义
[目的]探讨HBeAg状态与IL-18表达的关系及其对轻度CHB患者的免疫应答功能、肝脏炎症程度的影响.[方法]检测轻度CHB患者血液中IL-18、HBVDNA、HBeAg、β2M、ALT等并作出统计分析. [结果]在轻度CHB患者中,HBeAg阴性患者IL-18、ALT水平明显升高(P<0.01,P<0.05),2者呈明显正相关(r=0.574、P<0.05),IL-18异常率较ALT异常率更高(X2=6.08,P<0.05).HBeAg阳性患者IL-18水平正常,IL-18异常率与ALT异常率比较无统计学差异(X2=2.487,P>0.05).HBeAg阴性患者HBV-DNA拷贝量明显低于HBeAg阳性患者(P<0.01). [结论]HBeAg与IL-18表达存在一定内在联系,且对宿主的免疫应答功能及免疫调节发挥了重要作用.血清IL-18可以作为评价HBeAg阴性CHB患者的肝脏炎症程度的血清学指标.
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两种β2m重组质粒的构建及其表达与纯化
目的获得大量有活性的人β2m重组蛋白,为构建HLA与抗原肽的复合体及HLA四聚体作准备.方法采用RT-PCR克隆法构建重组质粒,于BL21(DE3)菌中原核表达后,经金属螯合亲和层析纯化,BCA Protein Assay Kit测定蛋白含量,应用SDS-PAGE观察重组蛋白表达情况及Western blot分析重组抗原的活性.结果成功地构建了两种融合表达载体PET-22b/β2m及PET-28a/β2m,两者的表达量分别为5～10 mg/L,40～80 mg/L,纯度均为95%.结论通过比较,确定了β2m佳表达载体系统及表达条件,为研究轻链在原核系统中表达、纯化以及构建HLA复合体,探讨免疫识别机制奠定了基础.
