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乳糖诱导角质细胞生长因子-2在大肠杆菌中的表达
目的:研究用乳糖替代IPTG作为诱导剂进行角质细胞生长因子-2(KGF-2)基因重组蛋白的表达,探讨工程化生产的可能性.方法:分别比较乳糖诱导浓度、诱导时机、诱导时间及诱导温度对重组表达产物的影响,并以IPTG诱导作为对照,确定较为优化的乳糖诱导条件.结果:对于重组目的产物,乳糖作为诱导剂也可以起到良好效果,以乳糖为诱导剂的A_(600)值较IPTG高,诱导产物的表达量与IPTG诱导产物相当.以终浓度为10 g·L~(-1)乳糖在33℃下诱导6 h,可以达到良好的诱导效果,并且具有较好的可溶性和促细胞生长活性.结论:乳糖可替代IPTG诱导角质细胞生长因子基因表达,并取得良好效果,为工程化生产提供了良好的实验依据.
关键词： 角质细胞生长因子-2 乳糖诱导 IPTG -
不同诱导剂对工程菌发酵及重组蛋白表达的影响
目的观察不同诱导剂对工程菌发酵及HSP-MUC1重组蛋白表达的影响,从而选取佳诱导表达条件.方法分别用IPTG和乳糖作为诱导剂,发酵表达HSP-MUCI重组蛋白质,并对重组蛋白质表达量和性状进行分析.结果用IPTG诱导发酵的菌体经普通匀浆法即可将细菌破碎;而用乳糖发酵的菌体经普通匀浆法不能破菌,通过延长发酵时间也能达到与IPTG诱导相同的表达量.结论乳糖可以作为基因工程重组蛋白的理想诱导剂.
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生物活性肽Lunasin的原核表达和分离纯化
目的:利用基因工程的方法在大肠杆菌中表达并纯化生物活性肽Lunasin.方法:将合成的Lunasin基因插入原核表达载体pET-32a(+)的多克隆位点Nde I和Xho I之间,然后将重组载体转化入大肠杆菌BL21(DE3)中,利用IPTG诱导表达蛋白,经SDS-PAGE和Western Blot鉴定蛋白的表达.然后利用亲和层析技术将含有6x His标签的蛋白分离纯化、脱盐、冻干.结果:①鉴定结果表明在6kDa位置出现目的条带Lunasin重组蛋白.②亲和层析在100mM咪唑时得到了洗脱的重组蛋白.结论:在大肠杆菌BL21(DE3)中成功表达并且纯化出了生物活性肽Lunasin.
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乳糖诱导胸腺融合肽Tα1-TP5在大肠杆菌中的表达
目的 研究用乳糖替代异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)作为诱导剂诱导胸腺融合肽Tα1-TP5表达,并优化诱导表达条件.方法 在摇瓶发酵条件下,以乳糖作为诱导剂,SDS-PAGE电泳和AlphaEase凝胶电泳图像分析系统研究培养基组成、诱导剂浓度、诱导时机、诱导时间、诱导温度和诱导方式等条件对目的肽Tα1 -TP5表达量的影响,并与IPTG诱导结果相比较.结果 选用TB培养基,在菌体对数生长的中后期加入终浓度为1 g/L的乳糖,37℃诱导6h,GST-Tα1 -TP5融合蛋白的表达量约占菌体总蛋白的35％,且主要以可溶形式表达,与IPTG的诱导结果相同.分批流加乳糖4次和一次性加入乳糖诱导,融合蛋白表达量无明显差异.结论 乳糖可以替代IPTG诱导胸腺融合肽Tα1-TP5的表达.
关键词： 胸腺融合肽Tα1 -TP5 乳糖 IPTG 表达 诱导 -
质粒pGH/BL21在大肠杆菌中表达条件的研究
目的寻找质粒pGH/BL21在大肠杆菌中的佳表达条件.方法当它在大肠杆菌中表达时,考查不同IPTG诱导浓度及不同的诱导时间对表达产物的影响,表达产物的量以SDS-PAGE电泳方法分析.结果该基因的佳表达条件为:IPTG诱导浓度1.0 mmol/L,诱导时间4 h.结论 IPTG对不同的基因在不同的表达体系中需不同的诱导条件,只有找到它的佳诱导条件才能保证终产物的大产率.
关键词： 猪生长激素 包涵体 IPTG SDS-PAGE电泳 -
乳糖诱导对幽门螺杆菌UreB、HpaA和大肠杆菌LTKA63、LTB重组蛋白表达的影响
目的:探讨乳糖诱导幽门螺杆菌尿素酶B亚单位(ureB)、黏附因子(hpaA)和大肠杆菌肠毒素B亚单位(ltB)、A亚单位突变体63(ltKA63)重组基因表达的效果及佳表达条件.方法:采用BIO-RAD凝胶图象分析系统测定表达的目的重组蛋白产量.采用SDS-PAGE检测不同乳糖浓度、诱导时间和温度对不同生长阶段工程菌重组蛋白表达量的影响,并与异丙基硫代半乳糖苷(isopropyl-β-D-thiogalactoside,IPTG)比较.结果:乳糖较IPTG更为有效地诱导rHpaA、rUreB、rLTB、rLTKA63的表达.37℃诱导的目的重组蛋白表达量明显高于28℃.rHpaA表达的佳条件为起始菌液OD600值0.8、50 g/L乳糖,诱导4 h;rUreB和rLTB均为起始菌液OD600值1.2、100 g/L乳糖,诱导5 h;rLTKA63为起始菌液OD600值0.8、100 g/L乳糖,诱导4 h.结论:乳糖较IPTG更有效地诱导上述重组基因表达目的蛋白,且无毒和廉价,为幽门螺杆菌基因工程疫苗工业化生产奠定了有利的基础.
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双基因共表达载体的诱导表达优化及质粒稳定性
考察IPTG及乳糖对含pTrx-AEP的BL21(DE3)诱导情况,SDS-PAGE分析两种蛋白的表达情况并结合菌浓变化,探讨乳糖替代IPTG的可行性,并在有选择性压力情况下传代,考察pTrx-AEP质粒稳定性,质粒突变率维持在一个极低的水平,传代对蛋白表达的影响不显著.
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人自剪切TRAIL胞外段融合蛋白表达条件的优化
目的:在已构建肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL) 胞膜外段融合蛋白的原核表达载体基础上,进行表达条件优化,使其高表达为进一步研究其活性奠定基础.方法: 将前期构建的PCS/TRAIL 111-281原核表达载体转入大肠埃希菌BL21中,15% SDS-PAGE比较分析不同诱导剂浓度、诱导温度和诱导时间对融合蛋白表达量的影响.结果: 在诱导温度15℃,加入0.2 mmol/L 诱导剂(isopropy-β-D-thiogalactoside,IPTG)、诱导过夜时可以获得较高的可溶性融合蛋白表达量.结论: 诱导剂浓度、诱导温度、诱导时间对融合蛋白表达量有较大的影响.
关键词： 肿瘤坏死因子相关诱导凋亡配体 融合蛋白质类 表达条件 IPTG -
非分型流感嗜血杆菌Haps蛋白表达量影响因素的探索
目的优化非分型流感嗜血杆菌HapS蛋白质片段表达与分泌量的条件.方法用BHI液体培养基培养非分型流感嗜血杆菌(NTHi),观察不同培养时间对NTHi培养液光吸收值的影响和HapS蛋白质片段分泌量的变化;NTHi在BHI培养液中培养18 h后,加入IPTG诱导不同时间,观察其对HapS蛋白质片段分泌量的影响.结果增加NTHi在BHI中的培养时间,培养液的光吸收值呈下降趋势,其培养上清提取的蛋白质样品经SDS-PAGE电泳没有显示出HapS蛋白质片段(110KD)的条带;加入IPTG诱导80min后,提取的蛋白质样品经SDS-PAGE电泳后,显示出有明显的110KD的条带.结论增加培养时间不能增加NTHi的细菌总数和HapS蛋白质片段的表达与分泌量,而IPTG能诱导NTHi细菌hap基因的表达,明显增加HapS蛋白质片段的分泌量.
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乳糖代替IPTG诱导重组人胸腺肽α1在大肠杆菌中的表达
研究以乳糖代替IPTG作为诱导剂诱导重组人胸腺肽α1表达的可行性,对乳糖诱导的时机、乳糖浓度、诱导持续时间以及其它诱导条件进行研究,确定了乳糖诱导的佳条件.结果表明,乳糖能有效地诱导重组人胸腺肽α1的表达,并且目的蛋白的表达量略高于IPTG的诱导量.
