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连翘酯甙体外抗病毒作用的实验研究
1材料美国Waters公司2010系列高效液相色谱系统(HPLC)及Delta4000高压设备系统;日本岛津SHIMADZU十万分之一电子天平.连翘酯甙标准品:沈阳药科大学徐绥绪教授提供.丹麦TL3072超净工作台.日本MODEI304二氧化碳孵箱.日本Olympas显微镜.合胞病毒(RSV)、腺病毒3型(Ad3)、腺病毒7型(Ad7)、柯萨奇B组病毒3型(CB2)、柯萨奇B组病毒5型(CB5)、流感病毒甲3亚型(Fa3)、副流感病毒Ⅲ型(PF3).以上病毒由黑龙江省防疫站病毒研究所提供.对照药:双黄连粉针剂,哈尔滨中药二厂产,批号:970676.病毒灵片,安徽淮南市第三制药厂产,批号:102054.MEM培养基:日本制药株式会社产品.Hep-2细胞:按常规传代,细胞数调为1×105~6万/ml后,铺板.鸡红血球:取雄鸡静脉血,立即注入含等量Alsever氏液中混匀,4C保存.
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刺五加皂甙对肝癌细胞细胞动力学的影响
1. 材料与方法:刺五加皂甙(acan-thophopanaxenticosus,ASS)由白求恩医科大学化学教研室提供,1640培养液稀释抽提。人HepG2肝癌细胞株由空军广州医院肝病研究所提供。细胞周期动力学测定:将HepG2肝癌细胞置37℃二氧化碳孵箱培养,调节细胞浓度为1×109/L,分别加入含ASS和RA的1640完全培养液,ASS终浓度为1g/L、0.5g/L及0.25g/L,按上述浓度分为高浓度组、中浓度组及低浓度组,另设细胞空白对照组,每组测定3管。继续培养16h、24h和48h,收集细胞,流式细胞仪检测,记录细胞周期各时相的比例,计算凋亡细胞百分率。
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中药视神经保护有效成分筛选的方法学研究
目的:(1)建立大鼠视网膜神经细胞体外培养模型;(2)建立视网膜神经节细胞(RGCs)培养模型;(3)用噻唑兰比色法(MTT法)测试不同培养时间视网膜神经细胞及RGCs存活率;(4)绘制体外培养视网膜神经细胞和RGCs存活曲线.方法:(1)取出生72h内的SD乳鼠视网膜,制成细胞悬液,放于已包被多聚鸟氨酸和层粘连蛋白的培养皿中,加20%EMDM培养液、于5%二氧化碳孵箱中培养,分别于4小时,24小时,48小时,72小时观测细胞存活情况;(2)在混合培养的视网膜神经细胞中加入5'-溴-2'-脱氧脲苷(Brdu),并于4小时,24小时,48小时,72小时观测细胞存活情况;(3)利用羊抗鼠IgG和小鼠抗大鼠Thy1.1抗体纯化视网膜神经节细胞,分别于4小时,24小时,48小时,72小时观测细胞存活情况;(4)采用MTT法测定体外培养的视网膜混合细胞和RGCs在体外培养4小时,24小时,48小时的存活率,绘制细胞生长曲线.