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乌头类生物碱对bcl-2基因表达的影响
目的 研究鸟头类生物碱对大鼠视网膜神经细胞细胞增殖周期和bcl-2基因表达的影响,探讨乌头类中药神经毒性的作用机制.方法 体外培养大鼠视网膜神经细胞,分别以0.5%的乌头碱、新乌头碱和次乌头碱作用细胞5min后,流式细胞仪检测.结果 与阴性对照组比较,乌头碱作用组G2/M期细胞比例从2.3%增加到19.5%,细胞增殖活动被抑制;而bcl-2基因表达量显著增加,表达荧光均值从0.78增加到1.45.新乌头碱和次乌头碱作用组结果与乌头碱类似.结论 在本试验条件下,bcl-2基因可能在乌头类生物碱的神经毒性作用机制中具有重要意义.
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银杏叶提取物对视网膜神经细胞活性的影响
目的 测定银杏叶提取物(EGb761)对SD大鼠视网膜神经细胞活性的影响,初步探讨Egb 761对大鼠视网膜神经细胞作用机理.方法 建立体外培养大鼠视网膜神经细胞,用MTT法检测不同浓度Egb 761对视网膜神经细胞活性的影响.结果 Egb 761对视网膜神经细胞有显著的保护作用,且随浓度的增加,保护作用加大.结论 Egb 761有较好的保护视网膜神经细胞的作用.
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糖网1号方对糖尿病大鼠视网膜神经细胞的保护作用
目的:观察糖网1号方对糖尿病大鼠视网膜神经细胞的保护作用.方法:25只SD大鼠随机分为正常组、治疗组、对照组各6只,模型组7只,链脲佐菌素腹腔注射诱导实验性糖尿病大鼠模型,治疗组和对照组分别给予糖网1号方和多贝斯干预治疗,实验周期9个月,通过光镜和电镜观察大鼠视网膜各层的形态和超微结构变化.结果:与模型组和对照组比较,治疗组大鼠视网膜各层排列较整齐,部分神经节细胞发生核固缩,内、外丛状层排列较完整、紧密,感光细胞外节空泡样改变明显减轻.结论:实验性糖尿病大鼠的视网膜神经细胞发生明显的病理性损害,糖网1号方对糖尿病大鼠视网膜神经细胞具有一定的保护作用.
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灯盏花中单体成分对体外培养大鼠视网膜神经细胞的影响
目的:考察咖啡酸、东莨菪内酯、野黄芩苷对体外培养视网膜神经细胞存活的影响,探讨灯盏花中具视神经保护作用的有效成分.方法:采用胰酶消化法将18只出生2～3 d的乳鼠视网膜制成细胞悬液,接种于经多聚鸟氨酸(HA)和层粘连蛋白(LN)包被的96孔板中.于培养3 d后,分别加入PBS液及不同含量的咖啡酸、东莨菪内酯、野黄芩苷溶液继续培养2 d,采用MTT比色法测量其存活细胞的吸收值,同时对部分细胞行Nissel体染色检查. 结果:Nissel体染色检查结果表明,培养5 d的存活细胞大部分均为神经细胞.与空白对照组比较,咖啡酸含量在3.9～1 000 μg·mL-1、东莨菪内酯、野黄芩苷含量在250～1 000 μg·mL-1时,其吸收值均明显增加(P<0.05,P<0.01),且有一定的量效关系.结论:咖啡酸、东莨菪内酯、野黄芩苷三者均能促进体外培养的视网膜神经细胞存活,且咖啡酸活性强.
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高糖抑制体外培养Mnüer细胞生长
Müller细胞作为视网膜的重要组成部分,除了对视网膜神经细胞有支持和营养作用外,还在视网膜神经递质、钾离子、pH值的调节以及神经细胞的信号传递等方面发挥重要的作用,其改变不但可以引起视网膜血管病变,还能导致神经元的功能障碍[1].
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NF-E2相关因子2对视网膜细胞保护作用的研究进展
核转录因子NF-E2相关因子2(Nrf2)介导的抗氧化还原通路在细胞氧化应激损伤过程中起到重要的保护作用.在氧化应激的刺激下,Nrf2可以启动多种细胞保护性基因的表达从而维持细胞稳态.因此,在治疗氧化应激损伤的疾病时,药物诱导Nrf2通路表达上调成为了一个新的研究方向.我们主要从视网膜神经细胞和视网膜血管内皮细胞两个方面总结了Nrf2在视网膜病变中的细胞保护作用的相关研究进展.
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视网膜神经细胞有序发生的研究现状
在发育神经生物学领域，视网膜神经细胞的发生是研究热点之一。先天性视网膜病变的发病机制、视网膜移植供体材料选择与病种相关性研究均与视网膜神经细胞的发生有密切关系。本文分别阐述视网膜神经细胞发生时间的判定方法、不同动物视网膜神经细胞发生的时空顺序及其共同规律，着重介绍视网膜神经节细胞的发生规律，并对神经细胞有序发生的分子机制作一综述。
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石斛散对人视网膜神经细胞钙离子变化的影响
目的 通过观察石斛散对人视网膜神经细胞内钙离子持续升高导致的细胞凋亡的保护作用,探讨其在治疗视网膜变性类疾病方面的作用及机制,为临床治疗同类疾病提供药理学依据.设计实验性研究.研究对象体外培养的人眼视网膜神经细胞.方法 利用体外培养的贴壁、伸展以及生长良好人视网膜神经细胞,用Fluo3/AM标记,通过激光共焦扫描显微镜动态观察和记录石斛散和维拉帕米对细胞内钙离子水平以及谷氨酸引起的钙超载的影响.主要指标细胞内钙离子水平(荧光强度).结果 加入谷氨酸后,荧光强度较原基础值增加88%;而石斛散可使荧光强度降低14.8%;维拉帕米降低幅度为57.3%.对先用谷氨酸干预的细胞,石斛散不能降低胞内钙离子水平,但预先用石斛散干预的细胞,谷氨酸升高胞内钙离子30%,与未干预组比较有统计学差异(P=0.000).结论 石斛散具有降低体外培养人视网膜神经细胞内钙离子的作用,同时可以抵抗谷氨酸损伤细胞后引起的胞内钙离子升高,提示其具有抵抗钙超载,抑制视网膜细胞凋亡的作用.(眼科,2006,15:408-410)
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成年人视网膜神经细胞体外培养的实验研究
目的 建立成年人视网膜神经细胞的体外培养体系,研究细胞体外生长特性和结构特点.设计实验性研究.研究对象体外培养的成年人视网膜神经细胞.方法 以成年人视网膜为研究对象,进行体外细胞培养;取培养7～10天的细胞行免疫组织化学鉴定;取培养10天的细胞行扫描电镜超微形态学检查.主要指标细胞形态,结构.结果 在适宜的条件下,成年人视网膜神经细胞可以在体外培养并表现特有的结构特点和生长特性,免疫组化鉴定显示大部分细胞神经元特异性烯醇化酶(NSE)阳性,说明所培养细胞大部分为神经细胞.扫描电镜下观察贴壁伸展生长细胞主要为感光细胞、双极细胞、水平细胞等神经细胞和少量胶质细胞.结论 在适宜的培养条件下,成年人视网膜神经细胞可以在体外进行培养并且表现出良好的生长活性.(眼科,2006,15:404-407)
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巨噬细胞调理液促进培养鼠视网膜神经细胞存活
目的 观察巨噬细胞调理液(MCM)能否促进培养大鼠视网膜神经细胞(RN)的存活和生长,以探讨其损伤后的修复问题.方法 将生后2～3天Sprague-Dawley大鼠视网膜组织经胰蛋白酶消化后进行培养,并设对照组.用MTT比色法测量存活细胞的OD值.结果 培养在鼠尾胶原上的RN生长良好,且部分细胞伸出突起.培养1、3、5天,MCM促RN存活率分别为40.7%、39.9%和51.2%.结论 巨噬细胞能分泌某些促进RN存活和生长的营养因子.
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钙拮抗剂对体外培养大鼠视网膜神经细胞存活的影响
青光眼是以视盘呈典型凹陷及视网膜神经节细胞死亡为特征的眼病,目前青光眼的治疗局限于降低眼压,而对视网膜神经细胞(retinal neuron,RN)的保护尚缺乏有效药物.钙通道阻滞药(CCBs)在青光眼治疗方面具有抑制或延缓青光眼视神经损害进展的作用.由此,以维拉帕米和尼莫地平为代表来探讨其对视网膜神经细胞存活的影响,以明确CCBs起视神经保护作用的机制,为开发青光眼视神经保护剂提供依据.
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过氧化氢刺激视网膜神经细胞凋亡的MAPK/AP1信号通路参与机制
目的 本文对过氧化氢刺激视网膜神经细胞凋亡的MAPK/AP1信号通路参与机制进行研究,为相关治疗提供参考.方法 分离培养大鼠视网膜神经细胞至生长状态良好:细胞随机分为3组:对照组(control,n=9)、过氧化氢处理组(Hyd Per,n=9)、MAPK信号通路抑制剂PD98059组(PD98059,n=9).各组细胞给予相应处理后分析各组视网膜神经细胞中细胞凋亡蛋白及MAPK/AP1信号通路蛋白的表达.结果 与对照组相比,过氧化氢刺激后视网膜神经细胞Bcl2的表达明显降低(P<0.01),而Bax、Caspase6、Ras、Raf、MEK、ERK1/2及c-fos及c-jun的表达明显增强(P<0.01),DHE染色后细胞的荧光强度明显增强,且PD98059处理后上述异常明显恢复(P<0.01).结论 过氧化氢刺激视网膜神经细胞发生明显的细胞凋亡,且此过程与MAPK/AP1信号通路的过度活化有关.
关键词： 过氧化氢 视网膜神经细胞 细胞凋亡 MAPK/AP1信号通路 荧光强度 -
枸杞多糖对糖基化终产物及视网膜神经细胞的影响
目的 探讨枸杞多糖(LBP)对糖基化终产物(AGEs)的形成及其致视网膜神经细胞损伤的影响.方法 快速构建体外非酶糖基化系统,并以此为对照组,设立不同浓度的枸杞多糖干预组,于孵育过程中不同时间点取样,检测各组AGEs总含量、4-呋喃-2-糠酰-1-氢-咪唑(FFI)含量和果糖胺含量.构建兔视网膜神经细胞损伤模型,分别用不同浓度的枸杞多糖进行干预,检测各组细胞生长情况、增殖抑制情况和血管内皮生长因子受体2(VEGFR-2)及胰岛素样生长因子Ⅰ(IGF-1)的表达情况.结果 枸杞多糖干预各组AGEs总含量和FFI含量较对照组明显降低(P＜0.05),增长速率也明显低于对照组(P＜0.05)；果糖胺含量明显低于对照组(P＜0.05),且能延迟峰浓度出现时间.枸杞多糖能明显下调VEGFR-2的表达(P＜0.05)、抑制IGF-1的分泌(P＜0.05).结论 枸杞多糖能够明显降低体外非酶糖基化产物的含量,拮抗AGEs对神经细胞的损伤作用,保护视网膜神经细胞.
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盐酸金刚烷胺对兔急性高眼压视网膜神经节细胞损伤的保护作用
随着对青光跟发病机制的深入研究,谷氨酸对视网膜神经细胞(RGC)的毒性作用已逐步被认识.Onley[1]证实了谷氨酸对新生小鼠RGC毒性作用并称之为"兴奋性毒性".体外实验也证实了谷氨酸对RGC的毒性作用[2].在青光眼发病过程中,高眼压和缺血会使眼内谷氨酸的浓度增加,并且和眼压呈正相关[3].
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脑源性神经营养因子在视网膜神经细胞bcl-2蛋白动态表达中的作用
目的 探讨脑源性神经营养因子在视网膜神经细胞bcl-2蛋白动态表达中的作用.方法 选择新生小牛视网膜神经细胞进行传代培养,当传至第2代时随机分为观察组及对照组,两组神经细胞个数相同,观察组在接种后的第3天加入脑源性神经营养因子(浓度为50μg/L),对照组不加入任何营养因子.分别于给药后的第2、4、6天应用Western blotting法检测两组视网膜神经细胞中bcl-2蛋白的表达情况.结果 观察组给药后第2天bcl-2蛋白表达灰度值为0.451±0.049、给药后第4天bcl-2蛋白表达灰度值为0.376±0.043、体外培养1个月神经元细胞存活数为13.10±1.35、NSE阳性表达细胞数10.53±1.12,均显著高于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05)；给药后第6天bcl-2蛋白表达灰度值为0.291±0.037,与对照组比较,差异无统计学意义(P＞0.05).结论 在短时间内,脑源性神经营养因子对视网膜神经细胞bcl-2蛋白的表达具有促进作用,能够在一定意义上保护视网膜神经元细胞.
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糖网明对糖尿病大鼠视网膜神经细胞凋亡及其Fas、FasL表达的影响
目的:探讨凋亡相关基因Fas、FasL在早期糖尿病大鼠视网膜神经组织中的表达及糖网明的抗凋亡作用.方法:四氧嘧啶腹腔注射复制糖尿病大鼠模型,实验分为正常组、模型组、糖网明治疗组,给药处理90天后处死大鼠,制备视网膜切片进行免疫组化染色,检测Fas、FasL表达,并用原位末端标记法(TUNEL)标记大鼠视网膜凋亡细胞.结果:与正常组大鼠相比,糖尿病大鼠Fas、FasL两基因的蛋白阳性反应增强,视网膜神经细胞凋亡数量显著升高,糖网明干预组的改变明显减轻.结论:糖网明可抑制凋亡相关基因Fas、FasL的表达,抗视网膜神经细胞凋亡,对早期糖尿病视网膜病变具有良好的防治作用.
关键词： 糖尿病视网膜病变/中医药疗法 糖网明/治疗应用 视网膜神经细胞 细胞凋亡 大鼠 -
表皮生长因子诱导骨髓间充质干细胞向视网膜神经细胞分化的体外研究
目的:研究表皮生长因子诱导骨髓间充质干细胞向视网膜神经细胞分化的可能性.方法:体外培养骨髓间充质干细胞,利用流式细胞仪分析其细胞表型.采用含EGF的培养液诱导骨髓间充质干细胞向视网膜神经细胞分化,并利用免疫荧光法进行鉴定.结果:从骨髓中分离培养的细胞具有成纤维细胞样形态,贴壁生长,表型相对均一,表面标志为CD90、CD44、CD147阳性;而CD34、CD38、CD45、CD14、HLA-DR阴性.体外诱导后可以得到神经干细胞标志物nestin、神经胶质细胞标志物GFAP和视网膜光感受器细胞标志物Rhodopsin呈阳性表达的细胞.结论:从骨髓中分离培养得到的间充质干细胞具有向视网膜神经细胞分化的潜能.
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促红细胞生成素对谷氨酸作用的视网膜神经细胞的保护作用
目的 评价促红细胞生成素(Epo)对视网膜神经细胞的生存影响.方法 原代新生大鼠视网膜神经细胞体外混合培养;免疫细胞化学法检测培养细胞Epo和EpoR的表达;经与不同浓度Epo共同培养,用MTT比色法检测细胞存活,评价Epo对细胞存活的影响.经不同浓度Epo预培养12 h,再用谷氨酸刺激,MTT法检测细胞存活,观察Epo是否能抵抗谷氨酸兴奋毒性.结果 培养的神经样细胞表达Epo和EpoR;Epo不影响正常培养神经细胞的存活,但是能提高谷氨酸刺激后的神经细胞存活.结论 Epo能部分抵抗谷氨酸对混合培养视网膜神经细胞的兴奋毒性.
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发现夜盲症基因
加拿大卡尔加里大学和维多利亚大学研究人员经过13年的努力，发现了导致夜盲症的NYX变异基因。在卡尔加里大学执教的加拿大著名眼科专家托班*贝克汉森日前透露，他们对北美和欧洲有夜盲症遗传史的22个家庭进行分析后得出结论：NYX基因发生变异是导致他们患夜盲症的共同原因。研究人员发现，正常的NYX基因会产生一种蛋白质，作用是向视网膜神经细胞传送光变化的信号；当NYX基因发生变异后，它所产生的蛋白质便不再发挥正常功能，导致视网膜神经细胞夜间光传输信号紊乱，从而造成夜盲症。
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促红细胞生成素抗高糖体外培养大鼠视网膜神经细胞凋亡的NF-κB机制
目的 研究促红细胞生成素(EPO)抗高糖体外培养大鼠视网膜神经细胞凋亡的NF-κB机制.方法 胰酶消化法提取大鼠视网膜神经细胞进行原代培养,随机分为对照组、模型组及不同浓度EPO治疗组,培养48 h后TUNEL法测定细胞凋亡情况,免疫细胞化学法(SP法)测定NF-κB蛋白表达.结果 细胞凋亡检测显示模型组同对照组相比凋亡细胞明显增多(P<0.01),各EPO治疗组同模型组相比凋亡细胞明显减少(P<0.01);免疫细胞化学法见NF-κB蛋白在对照组仅有极少量表达,在模型组呈弱阳性表达,而各EPO治疗组较模型组表达明显增强(P<0.01).随着EPO浓度从5 kU·L-1增加到40 kU·L-1,视网膜神经细胞的凋亡明显减少,NF-κB蛋白的表达明显上升,呈一定浓度依赖性.结论 高糖状态是引发大鼠视网膜神经细胞发生凋亡的损伤性因素之一,EPO能抑制高糖引发的凋亡,发挥神经保护作用,其机制可能是通过上调NF-κB的表达来实现,这为临床早期糖尿病视网膜病变的治疗提供了理论依据.
