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雷帕霉素靶蛋白信号通路在食管癌细胞系中激活状态的研究
[目的]研究雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号传导通路在食管鳞癌细胞系EC9706和Eca109中的激活状态.[方法]采用细胞免疫组化检测mTOR及其下游靶分子(p70S6K)在两细胞系中的表达,并采用RT-PCR和Western blot方法分别从mRNA水平及蛋白水平测定此通路的活性.[结果]mTOR在两种细胞系中均有表达,且在EC9706中的表达水平明显高于Eca109,mTOR下游靶点(p706S6K)的磷酸化水平也是EC9706明显高.[结论]mTOR信号通路在两种细胞系中都是特异性激活.激活状态与细胞的分化程度有关,细胞分化程度越低,通路的激活水平越高.
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雷帕霉素靶蛋白和p70S6激酶及Lgr5蛋白在胃癌组织中的表达及相关性
目的 探讨雷帕霉素靶蛋白(mammalian target“rapamycin,mTOR)、p70S6激酶(p70S6 kinase,p70S6K)及Lgr5蛋白在胃癌组织中的表达及相关性.方法 采用免疫组织化学法检测132例胃癌患者手术切除的胃癌组织、癌旁组织标本和30例慢性非萎缩性胃炎患者胃镜下活检正常胃黏膜组织标本中mTOR、p70S6K和Lgr5蛋白表达,分析胃癌患者mTOR、p70S6K及Lgr5蛋白阳性表达率与临床病理特征的关系,对胃癌组织中Lgr5蛋白表达与mTOR、p70S6K蛋白表达的相关性进行分析.结果 胃癌组织mTOR、p70S6K和Lgr5蛋白阳性表达率分别为65.15％、61.36％、70.45％,癌旁组织分别为24.24％、22.73％、34.09％,均高于正常胃黏膜组织(10.00％、13.33％、6.67％),且胃癌组织mTOR、p70S6K和Lgr5蛋白阳性表达率高于癌旁组织,差异均有统计学意义(P＜0.05);不同性别,年龄≥50岁与＜50岁胃癌患者mTOR、p70S6K和Lgr5蛋白阳性表达率比较差异均无统计学意义(P＞0.05),肿瘤直径≥5 cm胃癌患者mTOR、p70S6K和Lgr5蛋白阳性表达率(72.73％、74.03％、80.52％)高于肿瘤直径＜5 cm者(54.55％、43.64％、56.36％),TNM分期Ⅰ+Ⅱ期者(50.98％、45.10％、54.92％)低于Ⅲ+Ⅳ期者(74.07％、72.84％、80.52％),组织学分级G1+G2期者(53.70％,50.00％,55.56％)低于G3 +G4期者(73.08％、69.23％,80.77％),淋巴结转移N0者(42.22％、44.44％、46.67％)低于N1+N2+N3者(77.01％、70.11％、82.76％),侵犯程度T1+T2期者(42.11％、42.11％、44.74％)低于T3 +T4期者(74.47％、69.15％、80.85％),差异均有统计学意义(P＜0.01);胃癌组织中Lgr5蛋白表达与mTOR、p70S6K蛋白表达呈正相关(r=0.579,P=0.004 6;r=0.502,P=0.007 1).结论 mTOR、p70S6K和Lgr5蛋白表达与胃癌肿瘤浸润程度、淋巴结转移、TNM分期、组织学分级密切相关,可作为评估胃癌患者预后的指标.
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EC9706和Eca109细胞中雷帕霉素靶蛋白信号通路激活状态观察
目的:观察低分化的食管鳞癌细胞EC9706和高分化的食管鳞癌细胞Eca109中雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号转导通路的激活状态.方法:采用细胞免疫组织化学方法检测EC9706和Eca109细胞中mTOR及其下游靶分子p70S6K的表达和定位,并采用RT-PCR和Western blot方法分别从mRNA及蛋白水平检测此通路的活性.结果:在2种细胞中mTOR均有表达,且在EC9706细胞中的表达水平高于Eca109(P＜0.05);EC9706细胞中mTOR下游靶点的磷酸化水平高于Eca109细胞(P＜0.05).结论:在2种食管鳞癌细胞中,mTOR信号通路均特异性激活;但激活状态与细胞的分化程度有关,细胞分化程度低者通路的激活水平较高.
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雷帕霉素对大鼠胆管缺血术后p70S6激酶含量的影响
目的 观察雷帕霉素对大鼠肝内胆管缺血后p70S6激酶(p70S6K)含量的影响.方法 将120只雄性SD大鼠随机分4组:A组为对照组(假手术组)28只,B组为假手术+雷帕霉素组28只；C组为缺血组32只,D组为缺血+雷帕霉素组32只.雷帕霉素按每天2.0 mg/kg胃内注入.各实验组于术后第1、3、7天分别处死6只大鼠,术后14d处死全部大鼠.切取肝脏组织,Western blot检测p70S6K含量.多个独立样本比较采用Kruskal-WallisH检验,两样本间的比较经秩转换处理后行one way ANOVA检验,两独立样本比较采用Mann-Whitney U检验.结果 缺血组p70S6K含量增加,术后7d达峰值(2.03±0.14),为对照组的4.43倍(P＜0.001)；雷帕霉素处理后,p70S6K含量虽有增加,但是峰值(1.03±0.07)仅为缺血组的50％ (P ＜0.01)；术后1、7、14 d,缺血+雷帕霉素组p70S6K含量明显低于缺血组(P ＜0.005).结论 雷帕霉素抑制胆管缺血后p70S6K表达,这可能是雷帕霉素抑制胆管缺血后代偿性增生的机制之一.
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mTOR/p70S6K信号通路与NIH3T3成纤维细胞增殖
[目的]探讨mTOR/p70S6K信号通路激活在成纤维细胞增殖中的作用. [方法]以mTOR基因转染小鼠NIH3T3成纤维细胞,用MTT法检测其是否增殖,用RT-PCR和Western印迹分析测定细胞mTOR、p70S6K mRNA与蛋白的表达. [结果]MTT法检测转染组细胞增殖能力增强;RT-PCR与Western印迹分析转染组中mTOR和p70S6K的mRNA与蛋白表达水平明显增加(P<0.01). [结论]mTOR/p70S6K信号通路激活可能介导成纤维细胞增殖.
