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人参皂苷Rg1经线粒体通路抗Aβ25-35致原代大鼠皮层神经元凋亡
目的:通过人参皂苷Rg1与原代培养大鼠皮层神经元预培养,评价抗β淀粉样肽(β-amy1oid peptide,Aβ)所致神经元损伤,并探讨Rg1的神经保护作用及相关分子机制.方法:原代神经元培养7d成熟后,分别以1、10、20 μmol/L Rg1处理24 h,加入Aβ毒性片段Aβ25.35 10 μmoL/L模拟阿尔茨海默病( Alzheimer's Disease,AD)脑组织局部微环境.孵育72 h后,光镜观察细胞形态学改变,评价Rg1是否具有神经保护作用及相关量效关系.采用JC-1染色,考察神经元线粒体膜电位(△Ψm)变化,并运用Western blot技术,检测凋亡相关蛋白的表达变化.结果:Aβ25-35作用72 h严重损伤原代皮层神经元,引起神经元碎裂和死亡.Rg1预处理能对抗Aβ25.35的细胞损伤作用,显著提高神经元存活率,并呈现剂量依赖性,其中Rg1(20 μmol/L)活性强.Aβ25.35处理24 h能降低神经元的线粒体△Ψ,m,下调Bcl-2/Bax的比值,引起细胞色素c从线粒体释放入胞浆,活化caspse3和caspase9,从而引起神经元凋亡.而Rg1预培养能保护原代神经元,减轻或避免上述损伤作用,且其抗凋亡效应可被雌激素受体(ER)拮抗剂ICI182,780和糖皮质激素受体(GR)拮抗剂RU486部分拮抗.结论:Rg1在1μmol/L至20 μmol/L浓度具有抗Aβ25-35损伤原代培养大鼠皮层神经元作用,该活性与抑制线粒体凋亡通路相关联.
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对羟基苯甲醛对脑缺血/再灌注损伤的保护作用研究
目的 探讨天麻酚性成分4-HBd对脑缺血/再灌注损伤的保护作用及机制.方法 复制大鼠脑缺血/再灌注损伤模型,各组动物脑缺血2 h,再灌注24 h,以神经病学评分、脑梗死体积评价4-HBd对脑缺血/再灌注损伤的保护作用;化学法(连二亚硫酸钠)复制原代皮层神经元OGD/Rep损伤模型,检测细胞存活率、MDA含量、SOD活性、NO释放量以及Bax、Bcl-2、caspase-3蛋白的表达,探讨其脑保护作用的可能机制.结果 4-HBd可降低MCAO/R模型大鼠的神经病学评分(P<0.05)、脑梗死体积(P<0.01),提高OGD/Rep损伤原代皮层神经元的细胞存活率(P<0.05)、SOD的活性(P<0.05),降低模型细胞MDA的含量(P<0.05)、NO的释放量(P<0.05),并能下调模型细胞Bax的表达水平(P<0.05)、上调Bcl-2的表达水平(P<0.05),下调Bax/Bcl-2的比值(P<0.05),终下调caspase-3的表达水平(P<0.05).结论 4-HBd对脑缺血/再灌注损伤有保护作用,其机制可能与提高SOD活性、降低MDA含量、减少NO释放、下调Bax蛋白表达、上调Bcl-2蛋白表达、下调caspase-3蛋白表达,进而对抗神经细胞凋亡有关.
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PTEN与磷酸化tau蛋白水平在Aβ25-35诱导的AD样细胞模型中的变化
目的 探讨在Aβ25-35诱导人神经母细胞瘤细胞系SH-SY5Y细胞和大鼠胎鼠皮层原代神经元细胞的过程中PTEN及磷酸化tau(Ser396)蛋白水平的变化.方法 40 μmol/L和20 μmol/L的Aβ25-35分别孵育SH-SY5Y细胞和大鼠原代皮层神经元,孵育后的不同时间点MTT法测定细胞活力,显微镜观察细胞形态的变化,免疫印迹法观测各时间点磷酸化tau(Ser396)蛋白水平来确定模型的建立;同时观察在此过程中PTEN蛋白水平的变化.结果 随着Aβ25-35孵育时间的延长,SH-SY5Y细胞和大鼠皮层原代神经元细胞逐渐出现细胞活力下降,细胞胞体变圆,突起回缩甚至消失,细胞间连接断裂等现象,细胞磷酸化tau(Ser396)蛋白水平于诱导后6 h升高,12～24 h达到高峰;PTEN蛋白水平于3 h左右开始升高,6～12 h达到高峰,后逐渐下降,48 h甚至低于正常对照组,且PTEN蛋白水平的升高先于磷酸化tau(Ser396)蛋白水平的升高.结论 PTEN与Aβ25-35诱导的阿尔茨海默病样细胞模型的发生发展可能具有一定的关联性,在其发生早期PTEN表达可能增强.
