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心肌/生长和发育文献资料
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Junctophilin 1 在小鼠胚胎干细胞定向分化心肌细胞及大鼠胚胎心肌发生中的表征
目的:评价膜连接蛋白Junctophilin 1 (JP1)亚型在哺乳动物心肌发生过程中,基因转录和蛋白表达特征,为心肌发育生物学及心脏再生医学相关生命现象本质提供实验依据.方法:小鼠胚胎于( embryonic stem,ES)细胞相继制成单细胞悬液和悬滴,收集拟胚体转至培养皿中悬浮分化培养.每隔2d收集细胞供分子生物学评价,并于心肌分化成熟期(第17天),免疫荧光成像原位检测JP1与心肌小节蛋白α-Actinin和Troponin-T是否呈共表达,流式细胞术定量确认JP1阳染率.另以大鼠胎心为研究对象,大鼠受精后第14天起,每隔2d取胎心直至分娩新生鼠,供RT-PCR和免疫印迹实验用.结果:ES细胞分化过程中,JP1在基因转录层面全程表达,至第11天达高峰.蛋白层面呈一过性表达,在第9天达高峰,此后迅速下降,至分化培养第15天消失,分化成熟期未见表达.大鼠胎心表达趋势与ES细胞分化过程基本一致,但JP1蛋白表达持续在出生后.在分化终端,流式细胞术显示JP2和肌小节蛋白双染率达16.59％,而未见JP1阳染细胞.结论:JP1基因在小鼠ES细胞定向分化心肌细胞全程均有转录,但JP1仅在分化早期有一过性表达.大鼠胎心JP1表达趋势与ES细胞分化过程基本相一致.
