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低氧预处理在大鼠的心肌细胞上的早期效应与晚期效应的比较
目的:明确离体条件下低氧预处理对心肌细胞有早期和晚期保护作用.方法:将培养的大鼠心肌细胞分为持续低氧组、低氧预处理早期效应组、低氧预处理晚期效应组.结果:心肌细胞经持续低氧后三组LDH差异有显著性(P<0.01).结论:离体条件低氧预处理具有早期及晚期保护作用且其早期比晚期效应强.
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体外培养脂肪干细胞向心肌细胞诱导的实验研究
目的:研究诱导体外培养脂肪干细胞(ADSCs)向心肌细胞分化的方法.方法:培养原代脂肪干细胞经CD34、CD44、CD105抗体标记鉴定后,进行5-aza诱导培养.通过鉴定心肌细胞特异性抗原横纹肌肌动蛋白及心肌特异性肌钙蛋白T检测细胞分化情况.结果:ADSCs高表达间充质干细胞特异抗原CD44、CD105,不表达CD34;表达HLA-I抗原,不表达HLA-Ⅱ抗原.经5-aza诱导后,细胞形态变为类似于心肌样细胞.免疫细胞化学检测横纹肌肌动蛋白及心肌特异性肌钙蛋白T呈阳性,流式细胞仪显示心肌细胞特异性抗原阳性细胞为94%.结论:脂肪干细胞具有向心肌细胞分化的可能,在组织工程学及干细胞移植领域有着良好的应用前景.
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骨髓干细胞移植与心肌再生的研究进展
缺血性心脏病是一种严重危害人类健康的重大疾病之一,其防治是全球首要卫生健康问题.尽管目前冠心病的介入(PCI)治疗及血管搭桥手术取得了长足的进展,但术后再狭窄仍成为首要解决的问题,而缺乏手术适应证、冠状动脉弥漫性病变及疾病终末期合并心衰等原因又限制了这些方法的推广使用.
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体外诱导人骨髓间充质干细胞转化为心肌样细胞的基因表达
目的:观察5-氮胞苷(5-aza)在体外诱导人骨髓间充质干细胞转化为心肌样细胞的心钠素(ANP)、脑钠素(BNP)、α-骨骼肌动蛋白(α-skeletal actin)、肌球蛋白轻链-2v(MLC-2v)、锌指结构转录因子(GATA-4)和心脏特异同源转录因子(Nkx2.5)基因表达.方法:取非血液疾病的5例胸科手术患者术中已切除掉的肋骨,抽取骨髓.利用淋巴细胞分离液行密度梯度离心法和差异贴壁法进行分离、提纯骨髓问充质干细胞,并进行培养扩增.用流式细胞仪对第2代的骨髓间充质干细胞细胞表面抗原进行测定.应用10 μmol/L 5-aza对第2代的骨髓间充质干细胞诱导24h,于诱导后1,2,3及4周,用反转录.聚合酶链反应检测ANP、BNP、α-skeletal actin、MLC-2v、GATA-4和Nkx2.5基因表达.结果:3份第2代骨髓间充质干细胞样本重复测定,表达CD29,CD44,不表达CD34,CD45.以5-aza诱导培养24 h后,骨髓间充质干细胞形态和排列方式发生明显变化,诱导1周后,细胞体积增大,多呈长梭行,平行排列;诱导2周后,细胞变为短柱状,突起位于2端,相邻细胞的突起紧密接触;诱导3周后,短柱状细胞的突起相互连接,部分细胞可见类肌管样结构;诱导4周后,细胞体积变小,可见由几个细胞连接形成的多核肌管样结构.诱导组细胞ANP、BNP、α-skeletal aetin、MLC-2v、GATA-4和Nkx2.5的聚合酶链反应产物凝胶电泳呈阳性,对照组为阴性,诱导组基因表达量均随着时间延长逐渐增加.结论:5-aza可诱导骨髓间充质于细胞向心肌样细胞转化,其处于祖心肌细胞和分化的心肌细胞之间,并可能具有心肌细胞的功能.
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异丙酚和异氟醚对大鼠心室肌细胞L-型钙离子通道的影响
目的:研究联合使用异丙酚和异氟醚对大鼠心室肌细胞膜L-型钙离子通道的影响,阐明异丙酚和异氟醚在离子通道水平上对心肌细胞抑制的药理作用机制.方法:采用急性酶解法获得SD大鼠的单个心室肌细胞,在保持膜片钳钳夹电位-40 mV,波宽为250 ms的条件下,利用全细胞膜片钳技术,观察不同浓度的异丙酚、异氟醚及其二药复合应用时对心肌细胞钙离子通道电流的影响.结果:用含有1μmol/L四已铵的台氏液灌流时,可记录到具有电压和时间依赖性内向的钙电流;加入1μmol/L维拉帕米时,该电流被迅速消除.12μmol/L、25μmol/L异丙酚和7×102μmol/L、1.1×103μmol/L异氟醚对钙电流无显著性影响(P＞0.05);50μmol/L、250μmol/L异丙酚和2.2×103μmol/L、4.4×103μmol/L异氟醚对钙电流有显著性影响(P＜0.05);25μmol/L异丙酚和1.1×l03μmol/L异氟醚复合剂、125μmol/L异丙酚和2.2×103μmol/L异氟醚复合剂对钙电流有显著性影响(P＜0.05).结论:异丙酚、异氟醚及其两药复合应用时对心肌产生负性肌力作用有浓度依赖性,其机制与其抑制钙离子通道电流有关.
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Calpain-2活性升高促进模拟失重大鼠恢复期心肌细胞凋亡
目的 长期失重/模拟失重恢复初期因心血管功能失调而使循环系统儿茶酚胺浓度代偿性增加,在心肌β-肾上腺素受体敏感性增强的基础上,高浓度儿茶酚胺可能导致心肌细胞凋亡率增加,为保障航天员航天飞行返回地面后的健康,亟待探明心肌细胞凋亡的机制.方法 采用尾部悬吊大鼠模型在地面模拟失重.结果 本研究发现模拟失重4周大鼠心肌钙蛋白酶Calpain-2活性增加,抑制Calpains活性可防止模拟失重大鼠恢复初期发生心肌细胞凋亡.同时证实β-肾上腺素受体激动剂异丙肾上腺素(ISO)可诱导模拟失重大鼠心肌细胞凋亡,ISO刺激会进一步激活Calpain-2,终导致心肌细胞凋亡增加.结论 这些结果表明:ISO是引起模拟失重大鼠恢复期心肌细胞凋亡的原因之一,Calpain-2参与了模拟失重大鼠恢复初期心肌细胞凋亡过程.
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交流干扰滤波器对心肌细胞动作电位信号的影响
目的分析交流干扰滤波器对心肌细胞动作电位信号的影响.方法将心肌细胞动作电位经玻璃微电极、微电极放大器、微分器、A/D转换器输入微型计算机.在使用和不使用交流干扰滤波器两种情况下,对心肌细胞动作电位波形进行比较分析.结果使用交流干扰滤波器,将使动作电位波形严重失真,0期上升时间延长,大上升速度减小.结论心肌细胞动作电位波形中含有50 Hz信号成分,信号放大通路中不能使用交流干扰滤波器.
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兔冠状动脉结扎1h缺血区心肌细胞快钠通道电流的变化
目的探讨在急性心肌缺血时快钠通道电流的变化及其在室性心律失常发生中的作用.方法以开胸冠状动脉结扎法制备兔急性心肌缺血模型,1 h后处死动物分离心室肌细胞,采用全细胞膜片钳记录技术观察缺血区心外膜心室肌细胞快钠通道电流 (sodium current, INa)的变化,以正常心肌INa为对照,同时设假手术对照组.结果急性冠状动脉结扎1 h兔缺血区心室肌细胞快钠电流受到抑制,电流密度-电压关系曲线上移,其峰值电流密度由对照组的(-45.50±5.33)pA/pF(n=12 cells)下降为冠状动脉结扎后1 h组的(-20.03±4.43)pA/pF(n=10 cells),峰值电流密度较对照组下降了55.98%(P<0.001);其失活曲线左移,半数大失活电位对照组为(-76.2±5.3)mV(n=10 cells),冠状动脉结扎后1 h组为(-100.0±5.6)mV(n=6 cells),与对照组比较显著减小(P<0.001),失活速度加快;冠状动脉结扎后1 h组INa恢复速度明显减慢,恢复时程延长,和对照组比较P<0.001.结论冠状动脉结扎后1 h缺血区心室肌细胞快钠通道受抑制,细胞兴奋性及传导速度下降,可能为急性心肌梗死后室性心律失常发生的机制之一.
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人胎肺间充质干细胞分离培养条件及向心肌细胞诱导分化的可能关联
目的:观察分离培养得到人胎肺间充质干细胞的条件,并分析诱导其转分化为心肌细胞的可能性及其相关因素.方法:实验于2003-01/2005-12在西北农林科技大学陕西省干细胞工程技术研究中心完成.取10周龄人工流产胎儿肺组织,0.25%胰蛋白酶消化,经培养得到人胎肺间充质干细胞.观察细胞形态及增殖,测细胞生长曲线.将人胎肺间充质干细胞以1.8×104/孔接种于明胶预处理的24孔板中.加Dulbecco修正Eagle's基础培养液培养24 h后弃去培养液,磷酸盐缓冲液(-)洗两三次.每14孔为1组,分别加入Dulbecco修正Eagle's基础培养液和先进的Dulbecco修正Eagle's(分别添加2%、5%、8%和10%新生牛血清)5种不同的培养液,其后方法同上,每天选任意两孔计数,求平均值.用流式细胞仪对所分离第8代细胞进行以下细胞表面标志检测:CD45、CD11a、CD14、CD90、CD34、CD71、CD25、CD105、CD117、CD166和CD44.人胎肺间充质干细胞向心肌细胞诱导分化:将第12代人胎肺间充质干细胞以500个/孔接种于明胶预处理的24孔板中.每6孔为1组,分别在Dulbecco修正Eagle's基础培养液中添加0、5、10、20μmol/L 5-氮胞苷,每组中每2孔为一诱导时间段,分别诱导培养24,48,72 h后换成Dulbecco修正Eagle's基础培养液,以后每3 d换液1次.观察细胞在各组中变化情况,诱导12 d后固定进行糖元染色和α平滑肌肌动蛋白免疫组化染色.结果:成功分离了人胎肺间充质干细胞,细胞已扩增至26代,流式细胞仪检测CD25、CD105、CD166和CD44表达阳性;CD71(39.1%)和CD117(29.8%)弱阳性.Dulbecco修正Eagle's培养液比先进的Dulbecco修正Eagle's培养液更适合于这类细胞生长.经10 μmol/L 5-氮胞苷诱导48 h后,糖元染色、心肌α平滑肌肌动蛋白免疫组化染色阳性细胞率达60%以上.结论:①人胎肺间充质干细胞在Dulbecco修正Eagle's基础培养液中能够大量扩增.②并表达CD25,CD105,CD166和CD44等细胞表面标志.③10 μmol/L 5-氮胞苷诱导48 h对该细胞向心肌细胞分化有明显促进作用.
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大鼠成纤维细胞生长因子2分子克隆及其真核表达载体的构建
目的:实验旨在克隆大鼠成纤维细胞生长因子2CDS区基因全长,并将其于真核表达载体PIRES2-EGFP相连接,构建成纤维细胞生长因子2的真核表达载体.方法:实验于2007-03/06在苏州大学生物技术研究所完成.①实验材料:克隆载体PMD18-T-vector(takara):真核表达载体PIRES2-EGFP由苏州大学第一附属医院消化科叶建新博士惠赠:大肠杆菌TOP10购自英俊公司:清洁级新生一两天SD大鼠2只.②实验过程及评估:体外分离培养新生SD大鼠心室肌细胞.Trizol法抽提心室肌细胞总mRNA,采用反转录-聚合酶链反应的方法反转录获得总的cDNA,聚合酶链反应的方法扩增成纤维细胞生长因子2基因的CDS区片断全长.将扩增出来的基因片断和克隆载体PMD18-T-vector连接,转化TOP10感受态细菌,阳性克隆经电泳,质粒聚合酶链反应和酶切等鉴定正确后送去测序确认.测序正确后抽重组质粒,bgl Ⅱ和pst Ⅰ同时双酶切PMD18-T-FGF-2和PIRES2-EGFP,将切下的目的基因片段和线性PIRES2-EGFP空质粒载体在T4DNA连接酶作用下进行连接,构建其真核表达载体.结果:①成功培养出了形态典型的SD大鼠的心室肌细胞.②所获的大鼠成纤维细胞生长因子2DNA序列与GeneBank中收录的大鼠成纤维细胞生长因子2序列完全一致.③PIRES2-EGFP-bFGF真核表达载体的构建测序表明,成纤维生长因子2成功插入真核表达载体PIRES2-EGFP之中.结论:实验成功克隆了大鼠成纤维细胞生长因子2基因全长,并构建了其真核表达载体.为转基因细胞制备和移植治疗心肌梗死奠定基础.
关键词： 成纤维细胞生长因子2 心肌/细胞学 载体构建 大鼠 组织构建 -
离体大鼠心室肌细胞瞬时外向钾电流与利多卡因的影响
目的:研究利多卡因对大鼠心室肌瞬时外向钾电流的影响,探讨利多卡因抗心律失常是否与影响瞬时外向钾电流有关.方法:酶消化法急性分离大鼠心室肌细胞,采用全细胞膜片钳技术,记录不同浓度利多卡因对大鼠心室肌细胞瞬时外向钾电流的影响并做出量效曲线,求得其半数抑制浓度.结果:钳制电压-80 mV,刺激电压+70 mV条件下,临床相关浓度的利多卡因10 μmol/L使瞬时外向钾电流的电流幅值降低(17.9±6.4)%(t=7.986,P＜0.01),冲洗后,瞬时外向钾电流能够完全恢复.10,50,100,500,1 000,5 000 μmol/L的利多卡因抑制瞬时外向钾电流呈浓度依赖性,电流抑制率分别为(17.9±6.4)%,(25.2±4.4)%,(30.6±8.6)%,(53.2±4.5)%,(71.8±8.9)%,(94.1±2.2)%,其半数抑制浓度为672 μmol/L.结论:利多卡因可以明显阻滞大鼠心室肌的瞬时外向钾电流.
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D-半乳糖对幼鼠心肌细胞拟衰老作用的实验
目的:观察可诱导成纤维细胞、神经元细胞衰老的D-半乳糖对心肌细胞拟衰老的诱导作用.方法:实验于2001-09/2002-09在解放军总医院老年心血管病研究所分子生物学实验室进行,常规培养心肌细胞.分别用4,8,10,12,16g/L的D-葡萄糖和D-半乳糖作用于幼鼠心肌细胞,倒置显微镜观察心肌细胞跳动的频率、形态,用噻唑兰检测不同浓度D-半乳糖对心肌细胞活力的影响.苏木素-伊红染色观察心肌细胞形态,鉴定细胞衰老的生物学标志β-半乳糖苷酶观察细胞衰老情况.结果:①倒置显微镜下观察到D-半乳糖诱导的心肌细胞体积增大、扁平,跳动频率减缓,后期细胞代谢也减缓.②苏木素伊红染色结果显示,年轻心肌细胞胞浆红染,着色均匀,D-半乳糖诱导的心肌细胞胞体增大,形状扁平,胞浆区域增大,可见颗粒增多,着色不均.③D-半乳糖诱导心肌细胞90%出现β-半乳糖苷酶染色阳性,比例大大高于对照组心肌细胞.结论:D-半乳糖诱导幼鼠心肌细胞后,细胞出现老化形态及特点,提示D-半乳糖可诱导体外培养的心肌细胞老化,从而复制细胞衰老.
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血管内皮细胞相关生长因子在高血压不同阶段心肌细胞和血管内皮细胞中的分布特征
目的:观察血管内皮细胞生长因子、碱性成纤维生长因子在高血压不同阶段心肌细胞和血管内皮细胞的分布变化.方法:实验于2001-10/2002-06在承德医学院附属医院中心实验室完成.选用遗传性盐敏感型高血压大鼠(DahlS)和遗传性盐抵抗型高血压大鼠(DahlR),在5周龄投与8%食盐饲料,分别在10,11,12周时取材,制作心肌组织切片.应用免疫组织化学方法观察血管内皮细胞生长因子和碱性成纤维生长因子在心肌组织中的表达变化情况,计算单位面积心肌组织血管内皮细胞生长因子和碱性成纤维生长因子的阳性细胞数和血管内皮细胞的阳性表达.结果:血管内皮细胞生长因子和碱性成纤维生长因子免疫细胞在DahlS和DahlR组大鼠的心肌细胞及血管内皮细胞中均有表达,DahlS组血管内皮细胞生长因子和碱性成纤维生长因子阳性细胞数均较同时期DahlR组增多(P＜0.01).DahlS组自10周起至12周心肌细胞血管内皮细胞生长因子和碱性成纤维生长因子阳性细胞数逐渐增多(P＜0.01).DahlR组在高血压不同时期血管内皮细胞生长因子和碱性成纤维生长因子无显著性变化(P＞0.05).心肌组织的血管内皮细胞的表达强度,DahlS组血管内皮细胞生长因子和碱性成纤维生长因子均由(+)到(++),且均可见组织内毛细血管增多.DahlR组无变化.结论:血管内皮细胞生长因子和碱性成纤维生长因子在心肌细胞和心肌细胞间的血管上均有表达,并随高血压的病程延长呈上升趋势.
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大鼠心脏成纤维细胞向心肌细胞分化的可行性研究
目的:通过观察5-氮胞苷诱导的体外培养大鼠心脏成纤维细胞(cardiacfibroblasts,CFs)中心肌特异性β肌球蛋白重链(β-myosin heavy chain,β-MHC)的表达,研究CFs向心肌细胞分化的可行性.方法:实验选用SD大鼠的乳鼠10只.胰酶消化、差速贴壁法体外分离腚培养大鼠CFs,分治疗组和对照组,前者用不同浓度5-氮胞苷(2.50,5,7.5,10.0,15.0,20 0 μmol/L)诱导,24 h后正常培养,以免疫组化、反转录多聚链合酶反应(RT-PCR)方法测定两组CFs β-MHC、连接蛋白43的表达. 结果:正常培养大鼠CFs呈梭形均匀生长,不表达β MHC和连接蛋白43.经5-氮胞苷诱导后,CFs体积缩小呈克隆样生长,表达β-MHC、连接蛋白43,以10 μmol/L浓度时明显.结论:5-氮胞苷诱导体外培养大鼠CFs表达心肌特异性β-MHC,与诱导浓度相关,提示可诱导大鼠CFs向心肌样细胞分化.
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血管紧张素Ⅱ受体1反义核酸抑制血管紧张素Ⅱ诱导心肌细胞心钠素合成
目的:探讨血管紧张素Ⅱ受体1反义寡核苷酸(AT1-AS-ODNs)对血管紧张素Ⅱ诱导心肌细胞心钠素合成的生物学效应.方法:实验于2004-07/2005-07在武汉大学人民医院心血管国家重点实验室进行.体外培养乳鼠心肌细胞,将其分为4组:①对照组:无血清Opti-MEM培养48 h.②血管紧张素Ⅱ组:无血清Opti-MEM培养24 h+10-6mo'l/L血管紧张素Ⅱ刺激24 h.③AT1-AS-ODNs组:200nmol/LAT1-AS-ODNs孵育24 h+10-6mol/L血管紧张素Ⅱ刺激24 h.④顺义序列组:200 nmol/L AT1-S-ODNs孵育24h+10-6 mol/L血管紧张素Ⅱ刺激24 h.显微荧光技术检测脂质体包裹的AT1-AS-ODNs在心肌细胞内分布;免疫沉淀法检测血管紧张素Ⅱ受体1,2蛋白表达水平;放射性免疫法检测心钠素(ANF)表达.结果:①在脂质体的包裹下,AT1-AS-ODNs成功转染心肌细胞,120 min转染效率为60%.②血管紧张素Ⅱ组血管紧张素Ⅱ受体1,2蛋白表达水平较对照组低25%,21%(P＜0.05),AT1R-AS-ODNs组血管紧张素Ⅱ受体1蛋白表达水平下调60.7%(P＜0.01),血管紧张素Ⅱ受体2蛋白表达水平无改变.③血管紧张素Ⅱ组心钠素表达明显高于对照组[(780+38),(430±23)μg/L,P＜0.01].AT1-AS-ODNs组心钠素表达为(589±19)μg/L,明显低于血管紧张素Ⅱ组(P＜0.01),顺义序列组与对照组相比差异不显著(P＞0.05).结论:AT1-AS-ODNs可成功转染心肌细胞,通过特异性抑制血管紧张素Ⅱ受体1蛋白表达,拮抗血管紧张素Ⅱ的生物学效应.
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热休克蛋白70对缺血再灌注未成熟心肌间质的保护作用
目的:观察热休克蛋白70在未成熟心肌中的表达及对缺血再灌注未成熟心肌间质的影响.方法:①实验于2001-12/2002-06在华中科技大学同济医学院药理实验室完成.选用出生14～21 d的健康新生长耳大白兔12只.随机将兔分为2组:对照组和实验组,每组6只.②对照组:腹腔注射生理盐水0.4 mL,注射后24 h取体外心脏,常规建立Langendorff体外心脏灌注模型,灌注15 min转为工作心15 min后停灌45 min,恢复灌注15 min改为工作心30min;实验组:腹腔注射重酒石酸去甲肾上腺素,24 h后取体外心脏,方法同对照组.③采用蛋白印迹法测定心肌细胞中热休克蛋白70含量.按公式计算羟脯氨酸含量(样本A值/标准A值×10×稀释倍数×1/组织质量).采用均相放射免疫竞争法直接测定血浆内皮素1水平.④计量资料差异比较采用t检验.结果:兔12只均进入结果分析.①实验组心肌细胞中热休克蛋白70含量(A值)明显高于对照组(P＜0.01).②实验组兔心肌羟脯氨酸含量明显高于对照组(P＜0.01),血清内皮素1水平明显低于对照组(P＜0.01).结论:腹腔注射重酒石酸去甲肾上腺素诱导未成熟大白兔心脏热休克蛋白70表达,在注射24 h后热休克蛋白70表达明显增多,热休克蛋白70可明显减轻未成熟心肌内皮素的释放和心肌胶原的降解.
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复方丹参与福辛普利联用影响高血压大鼠左室肥厚与心肌细胞的凋亡
目的:观察具有抗凝血、抗氧化、扩张冠状动脉等作用的复方丹参及其与福辛普利联用对自发性高血压大鼠左室肥厚及心肌细胞凋亡的影响.方法:实验于2003-02/2004-06在福建省高血压研究所完成.①选用48只8周龄雄性SPF级自发性高血压大鼠.按随机摸球法将大鼠分为6组:复方丹参小、大剂量组,福辛普利组,复方丹参小、大剂量+福辛普利组,对照组,每组8只.②复方丹参小、大剂量组:分别按300和450 mg/(kg·d)剂量灌胃复方丹参滴丸溶解液,该滴丸主要由丹参、三七、冰片组成(由天津天士力制药股份有限公司惠赠,生产批号:20010415,100粒/瓶);福辛普利组:按10 mg/(kg·d)剂量灌胃福辛普利(购自上海施贵宝医药公司,10mg/片)混悬液;复方丹参小、大剂量与福辛普利联用组:灌胃与前组相同剂量2种药物;对照组:灌胃蒸馏水,2mL/d.连续给药8周.③分别在药物干预前、药物干预4及8周后采用血压心率仪监测尾部动脉收缩压.④药物干预结束后,称心肌质量、左心室(含室间隔)湿重,计算左心室肥厚指数(左心室湿重/体质量).采用S-P免疫组化法检测心肌组织Bcl-2及Bax蛋白表达.免疫组化切片进行计算机图像分析,测定Bcl-2,Bax灰度值,计算Bcl-2与Bax灰度比值(灰度值越高表示相关蛋白表达越低).采用原位末端标记技术检测大鼠左心室细胞凋亡情况.计算每个高倍视野(×400)的平均凋亡率,即为心肌细胞凋亡率.用透射电子显微镜观察心肌超微结构.结果:自发性高血压大鼠48只均进入结果分析.①干预4周后,福辛普利及其与复方丹参联用组大鼠尾动脉压明显低于对照组(P＜0.01),复方丹参小、大剂量组与对照组比较,差异不明显(P＞0.05).干预8周后,复方丹参小、大剂量组大鼠尾动脉压明显低于对照组(P＜0.01),但效果不及福辛普利及其与复方丹参联用组(P＜0.01).复方丹参小、大剂量组和对照组大鼠尾动脉压明显高于福辛普利组(P＜0.01).对照组大鼠尾动脉压明显高于其他5组(P＜0.01),复方丹参大剂量+福辛普利组明显低于福辛普利组(P＜0.05).②对照组大鼠左室心肥厚指数明显高于其他5组(P＜0.01),复方丹参大剂量+福辛普利组明显低于福辛普利组(P＜0.05).③对照组大鼠心肌组织Bcl-2灰度值和Bcl-2/Bax及心肌细胞凋亡率明显高于其他5组(P＜0.05～0.01),Bax灰度值明显低于其他5组(P＜0.05～0.01).复方丹参小、大剂量+福辛普利组大鼠心肌组织Bcl-2灰度值和Bcl-2/Bax明显低于福辛普利组(P＜0.05～0.01),复方丹参小、大剂量+福辛普利组大鼠心肌组织Bax灰度值明显高于福辛普利组(P＜0.01).④治疗后大鼠心肌细胞肌丝排列紊乱与闰盘增多聚集现象明显减轻,肌溶灶与心肌细胞凋亡样改变未见;间质纤维化及毛细血管瘀血、内皮细胞水肿明显改善,并在两药联用时效果明显.结论:复方丹参可减轻自发性高血压大鼠左室肥厚,减少心肌细胞凋亡情况发生,同时可增强福辛普利抗左室肥厚与心肌细胞凋亡的效应.
关键词： 丹参/药理学 肥大 左心室/中西医结合疗法 心肌/细胞学 -
缺氧复合烧伤后血清诱导心肌细胞凋亡变化中p38激酶的作用
目的:观察缺氧复合烧伤血清作用条件下心肌细胞的凋亡变化,探讨p38激酶、caspase-3在其中的作用.方法:采用乳鼠心肌细胞原代培养,检测缺氧复合烧伤血清作用后心肌细胞p38激酶的磷酸化程度,对比观察使用SB203580抑制p38激酶前后,心肌细胞caspase-3活性、酶前体蛋白表达及心肌细胞凋亡率变化.结果:缺氧复合烧伤血清使心肌细胞p38激酶迅速、持续活化,使用SB203580可降低心肌细胞caspase-3活性、稳定caspase-3酶前体和减少心肌细胞凋亡.结论:p38激酶途径参与缺氧复合烧伤血清诱导的心肌细胞凋亡过程,促进caspase-3活化是其介导凋亡的重要机制.
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药物预适应对各部位心肌细胞缺氧再复氧的保护作用
目的:分析硝酸酯类药物预适应对不同部位的心肌细胞缺氧再复氧的保护作用. 方法:实验于2003-05/2005-09在泰山医学院中心实验室完成.取新生的Wistar大鼠100只,无菌取出心脏,培养不同部位的心肌细胞(心房、左心室、右心室),分为4组:①空白对照组:不作任何处理.②单纯缺氧/再复氧组:在含有体积分数为0.95的N2、0.03的CO2和0.02的O2混合气体的缺氧培养箱内孵育2 h,正常培养箱内孵育1 h.③L-精氨酸处理+缺氧/再复氧组:先用10 mmol/L L-精氨酸处理细胞2 h,然后进行缺氧再复氧.④缺氧预适应组:先将细胞缺氧15 min,再复氧15 min,循环4次,然后进行缺氧再复氧.观察各组细胞坏死率、细胞凋亡情况、培养液中乳酸脱氢酶浓度及细胞内游离钙离子浓度等.结果:①单纯缺氧/再复氧组不同部位的细胞坏死率、培养液中乳酸脱氢酶释放量及胞内钙离子浓度均显著高于空白对照组(P＜0.01),不同部位间比较差异无显著性意义(P＞0.05).②缺氧预适应组、L-精氨酸处理+缺氧/再复氧组不同部位的细胞坏死率、培养液中乳酸脱氢酶释放量及胞内钙离子浓度均显著低于单纯缺氧/再复氧组(P＜0.05).结论:L-精氨酸的预适应同经典的缺氧预适应一样,可以对缺氧再复氧损伤产生明显的保护作用,其可能是通过降低心肌细胞内钙离子的浓度来发挥作用的,而不同部位的心肌细胞产生药物预适应的能力无明显差别.
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心血管疾病移植治疗的理想材料:骨髓间质干细胞在体外不同心肌细胞微环境中的定向分化研究
目的:研究兔骨髓间质干细胞( mesenchymal stem cells,MSCs)在体外不同的仔鼠心肌细胞微环境中的定向分化情况,为心血管疾病细胞移植治疗提供基础. 方法:体外分离培养兔 MSCs,经 5-氮杂胞苷诱导后分别与正常的及经阿霉素预处理的乳鼠心肌细胞一起置于 Millicell装置中共培养(正常组和阿霉素组),分别在共培养后的第 14, 21, 28天,采用免疫细胞化学方法、反转录聚合酶链反应( RT-polymerase chain reaction; RT-PCR)鉴定,并用流式细胞仪检测横纹肌辅肌动蛋白阳性细胞所占百分比.取仅经 5-氮杂胞苷诱导的 MSCs作为对照组. 结果:14 d时仅正常组个别细胞横纹肌辅肌动蛋白、缝隙连接蛋白弱阳性; 21,28 d 3组均可见阳性细胞; RT-PCR方法示可表达纹状肌球蛋白.但正常组免疫荧光阳性的细胞比例较对照组和阿霉素组大. 结论:MSCs是骨髓来源的具有多向分化潜能的干细胞,在体外正常和病理性心肌细胞微环境均可分化为心肌样细胞,且微环境对其分化有促进作用. MSCs可能成为细胞移植治疗心血管疾病的又一种新的细胞来源.
