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心肌梗死左室组织中ErbB受体mRNA表达的变化
目的:检测在心肌梗死的左室组织中ErbB受体mRNA表达的变化,探讨其可能机制.方法:用180 g左右雄性SD大鼠3只,开胸结扎其前降支,造成前壁心肌梗死,然后关胸继续饲养.1个月后取出心肌梗死心脏的左室组织,对照组取出相同大小正常SD大鼠的左室组织,提取mRNA,做实时定量PCR.体外实验培养新生SD大鼠的心室肌细胞,培养5 d后缺氧缺血清24 h,分别提取正常心肌细胞和缺氧缺血清心肌细胞的mRNA,做实时定量PCR.结杲:在心肌梗死的左室组织中,ErbB2和ErbB4的mRNA表达明显下调,而ErbB3的mRNA表达无显著变化.体外培养的心肌细胞在缺氧缺血清下,能使ErbB2和ErbB4的mRNA表达明显下调,但ErbB3的mRNA表达无变化.结论:在心肌梗死的左室组织中,ErbB2和ErbB4受体mRNA的表达下调,这可能与心肌细胞的缺氧、营养不足和缺乏某些细胞因子的作用有关.
关键词： 心肌梗死/病理生理学 心肌/细胞学 ErbB受体 实时定量PCR -
阿霉素对实验兔心肌细胞内游离钙和肌浆网Ca2+-ATP酶活性的影响
目的:探讨治疗剂量阿霉素(ADR)对心脏血流动力学及心肌肌浆网Ca2+-ATP酶活性的影响.方法:实验兔每周静脉注射ADR(2 mg/kg)1次,共8周.以健康同龄兔静脉注射等量生理盐水为对照组.停药3周后多普勒测定降主动脉血流量,以代表心输出量(CO).左颈总动脉和左心室插管测定血压(BP),平均动脉压(MAP),左心室收缩压(LVSP),左心室舒张末压(LVEDP).应用荧光分光光度计测定心肌细胞内游离钙(MyoCa2+)浓度,无机磷酸根法测定心肌肌浆网(SR)Ca2+-ATP酶活性.结果:阿霉素组CO、BP、MAP、LVSP均较对照组低,而LVEDP则明显增高.阿霉素组使MyoCa2+浓度显著增高,同时SR Ca2+-ATP酶活性明显低于对照组.结论:治疗剂量阿霉素可使心脏功能下降,心肌细胞内钙超载及SR Ca2+-ATP酶活性降低.
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一氧化氮介导白细胞介素-2对离体大鼠心室乳头肌和培养心肌细胞的抑制作用
目的:研究白细胞介素-2的离体心肌/细胞作用及其机制.方法:采用离体灌流右心室乳头肌和培养乳鼠心肌细胞模型,观察重组人白细胞介素-2(hrIL-2)对乳头肌平均大收缩力、收缩间期、舒张间期和培养心肌细胞搏动频率的影响.结果:①hrIL-2浓度依赖性地降低离体大鼠心室乳头肌的收缩力,高浓度hrIL-2缩短收缩间期,延长舒张间期;②hrIL-2减少离体培养乳鼠心肌细胞的搏动频率;③L-NAME预处理完全取消hrIL-2对离体大鼠心室乳头肌收缩力和乳鼠心肌细胞搏动频率的作用;④热失活的hrIL-2失去对离体乳头肌和培养心肌细胞的抑制作用.结论:IL-2对离体心肌/细胞的抑制作用由一氧化氮介导.
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Junctophilin 1 在小鼠胚胎干细胞定向分化心肌细胞及大鼠胚胎心肌发生中的表征
目的:评价膜连接蛋白Junctophilin 1 (JP1)亚型在哺乳动物心肌发生过程中,基因转录和蛋白表达特征,为心肌发育生物学及心脏再生医学相关生命现象本质提供实验依据.方法:小鼠胚胎于( embryonic stem,ES)细胞相继制成单细胞悬液和悬滴,收集拟胚体转至培养皿中悬浮分化培养.每隔2d收集细胞供分子生物学评价,并于心肌分化成熟期(第17天),免疫荧光成像原位检测JP1与心肌小节蛋白α-Actinin和Troponin-T是否呈共表达,流式细胞术定量确认JP1阳染率.另以大鼠胎心为研究对象,大鼠受精后第14天起,每隔2d取胎心直至分娩新生鼠,供RT-PCR和免疫印迹实验用.结果:ES细胞分化过程中,JP1在基因转录层面全程表达,至第11天达高峰.蛋白层面呈一过性表达,在第9天达高峰,此后迅速下降,至分化培养第15天消失,分化成熟期未见表达.大鼠胎心表达趋势与ES细胞分化过程基本一致,但JP1蛋白表达持续在出生后.在分化终端,流式细胞术显示JP2和肌小节蛋白双染率达16.59％,而未见JP1阳染细胞.结论:JP1基因在小鼠ES细胞定向分化心肌细胞全程均有转录,但JP1仅在分化早期有一过性表达.大鼠胎心JP1表达趋势与ES细胞分化过程基本相一致.
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白芍总苷对柯萨奇B3病毒感染大鼠原代心肌细胞的血清药理学干预
目的 探讨白芍总苷(TGP)对柯萨奇B3病毒(CVB3)感染大鼠原代心肌细胞有无保护作用.方法 取SD乳鼠心室肌制备大鼠原代心肌细胞,培养72 h后,用不同剂量的TGP含药血清干预100 TCID50 CVB3感染心肌细胞,对比分析干扰素组、双黄连组、正常对照组.观察细胞病变,24 h后测定细胞上清液中的cTnI、CK、LDH以及用MTT法检测细胞存活率.结果 TGP高剂量组可减轻心肌细胞病变,减少cTnI、CK、LDH的释放.结论 TGP对CVB3感染大鼠原代心肌细胞有保护作用.
关键词： 白芍/治疗应用 皂苷类/药理学 柯萨奇病毒感染/中药疗法 心肌/细胞学 -
体外诱导人骨髓间充质干细胞向心肌细胞分化
目的探索在体外诱导人骨髓间充质干细胞(hMSC)向心肌细胞分化的方法.方法以5-杂氮胞苷(5-Aza)对hMSC诱导,利用结蛋白抗体、房性利钠肽抗体以及闰盘蛋白抗体进行免疫组化染色,并进行超薄切片透射电镜观察.结果经反复多次传代后,细胞形态及抗原表达无改变,始终保持未分化状态和稳定扩增.利用5-Aza对其诱导后第2周始,免疫组化染色发现细胞结蛋白、闰盘蛋白以及房性利钠肽表达均为阳性,不同浓度5-Aza诱导组之间差异无显著性.电镜观察发现这些细胞具有心肌细胞的特点.结论在体外利用5-Aza可以诱导hMSC向心肌细胞分化.
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延迟超速起搏预适应对兔在体心肌细胞超微结构的保护效应
目的观察延迟超速起搏预适应对缺血再灌注兔在体的心室肌细胞超微结构的保护作用.方法 48只兔随机分为对照组(C组)、缺血再灌注组(IR组)、超速起搏预适应组(PP组)和延迟保护作用组(DP组),观察超速起搏后(500 min-1)缺血再灌注期心室肌的超微机构变化.结果较之IR组,PP组和DP组的心室肌细胞超微结构损伤明显减轻(主要表现为线粒体及肌节的保护作用).结论超速起搏预适应延迟相能明显减轻缺血再灌注时心室肌的超微结构损伤.
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心肌营养素-1的研究进展
心肌营养素-1(CT-1)是一种新近发现的细胞因子,属于IL-6家族.人CT-1 mRNA编码203个氨基酸,以gp130和LIFR为受体.CT-1通过JAK/STAT3信号转导途径诱导心肌肥大,p24/p44 MAPK途径保护心肌.CT-1也能维持神经元存活,并有IL-6样生物学功能.
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TLR3基因在脓毒症心肌损伤中的作用及其机制
【目的】探讨T L R3基因在脓毒症心肌损伤中的作用及其机制。【方法】选择6周雄性野生型小鼠（野生型组）和TLR3基因敲除小鼠（基因敲除组），两组均采用盲肠结扎穿孔术（cecal ligation and puncture ，CLP）制作小鼠脓毒症模型，采用12 M Hz线阵超声探头评价两组建模前后心功能指标：心率（ HR）、左室舒／缩末期内径（LVEDD ，LVESD），左室前／后壁舒张末厚度（ Awd ，Pwd）、左心室收缩期前、后壁厚度（ Aws ，Pws）、左室短轴缩短率（ FS％）。两组建模48 h后动脉采血及分离左心室心肌，检测小鼠血清肌钙蛋白I（cTnI）和心肌匀浆上清液中肿瘤坏死因子‐α（TNF‐α）、内皮素‐1（ET‐1）浓度。【结果】野生型组小鼠建模后心功能明显变差，表现为左室舒、缩末期内径（L V EDD ，L V ESD ）显著增大（ P ＜0．05），FS％显著降低（ P ＜0．05）。建模后野生型组小鼠的TNF‐α和ET‐1因子在心肌浓度明显升高，且与血清cTnI 呈正相关，与 TLR3基因敲除组小鼠比较有统计学差异（ P ＜0．05）。【结论】TLR3基因是脓毒症心功能损伤的因素之一，其机制可能与炎症因子浸润心肌细胞有关。
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缺氧预处理诱导的乳鼠心肌细胞miRNA表达谱的变化
目的 分析大鼠乳鼠心肌细胞经历缺氧预处理后miRNA的表达谱变化，探索其缺氧预处理机制和治疗靶点。方法 大鼠乳鼠心肌细胞原代培养，经过缺氧预处理和缺氧复氧损伤后检验心肌细胞存活率和乳酸脱氢酶浓度，miRNA芯片技术检测正常心肌和缺氧预处理心肌细胞miRNA表达谱差异，实时定量PCR验证结果的可信性，分析明显差异表达的miRNA的生物学功能。结果 心肌细胞存活率和乳酸脱氢酶浓度结果证实缺氧预处理模型制备成功。miRNA芯片技术结果表明，与正常对照组心肌细胞相比，缺氧预处理心肌细胞中有6个miRNA表达上调，有5个表达下调，其中一部分miRNA的生物学功能与心血管功能相关。结论 缺氧预处理可导致大鼠乳鼠心肌细胞microRNA表达谱发生变化，其可能是缺氧复氧损伤潜在的治疗靶点。
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骨髓间充质干细胞的生物学特性及其向心肌样细胞的分化
目的 体外分离培养大鼠骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs),分析其生物学特性;5-氮胞苷(5-Azacytidine, 5-aza)定向诱导其向心肌细胞分化.方法 采用体外密度梯度离心法分离培养大鼠骨髓单个核细胞,流式细胞仪检测细胞表面标志;用含有5-aza(10 μmol/L)目的培养液培养第二代MSCs 24 h,诱导其向心肌细胞分化;诱导4周后采用免疫荧光技术检测心肌细胞特异性标志物Connexin 43和TroponinⅠ目的表达.结果 体外分离培养目的细胞形态主要为纺锤形和长梭形,细胞表面抗原CD29、CD44表达为阳性,CD34、CD45表达为阴性;经5-aza诱导后细胞表达心肌细胞特异蛋白Connexin 43和TroponinⅠ.结论 MSCs是存在于骨髓中目的多能干细胞,体外经5-aza诱导可以定向分化为心肌样细胞.MSCs为心血管疾病目的治疗提供了种子细胞.
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吡格列酮调控大鼠心脏成纤维细胞增殖的研究
[目的]观察胰岛素增敏剂盐酸吡格列酮(PIO)对培养的Wistar大鼠心脏成纤维细胞(CFs)增殖的抑制作用,探讨其与一氧化氮合酶-一氧化氮(NOS-NO)系统活性的关系.[方法]采用胶原酶消化法培养Wistar大鼠的CFs,四氮唑蓝(MTT)比色法测定CFs的增殖情况,硝酸还原酶法测定CFs培养上清NO含量,分光光度计法测定CFs培养上清NOS活性.[结果]①CFs的吸光值(A490值)随着PIO干预浓度的增加和作用时间的延长而减低,呈浓度和时间依赖性.②不同浓度的PIO干预48 h后,CFs培养上清NO含量与NOS活性均较对照组明显升高(P＜0.01).③5×10-6 mol/L的PIO干预24 h、48 h、72 h后,CFs培养上清NO含量和NOS活性均较对照组明显升高(P＜0.01).[结论]盐酸吡格列酮能够抑制大鼠心脏成纤维细胞的增殖,具有浓度和时间依赖性,其效应可能与NOS-NO系统活性上调有关.
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MAPK 与糖尿病心肌细胞凋亡关系的研究进展
随着生活水平的提高，糖尿病患者越来越多，据新全国流行病学调查，我国成年人糖尿病发病率已达11.6％，而心血管疾病是糖尿病患者的主要死亡原因。糖尿病性心肌病（ diabetic cardiomyopathy ， DCM）是指特发于糖尿病患者，除外冠心病、高血压等疾病，以心室舒张或收缩功能障碍及心脏结构改变为主要表现、终可进展为心力衰竭的一种疾病［1］。糖尿病性心肌病变与糖尿病特有的代谢异常有关，其发病机制尚不完全明确，目前认为是糖脂代谢紊乱、肾素-血管紧张素系统激活、炎症、氧化应激等多因素综合作用所致［2］。越来越多的研究证明，糖尿病心肌病存在心肌细胞凋亡［3-5］，而丝裂原活化蛋白激酶（ mitogen-activated protein kinases ， MAPK）通路与心肌细胞凋亡有关［6］。阻断MAPK通路或将是治疗糖尿病心肌病的新趋势。
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晚期糖基化终产物对心肌细胞细胞周期和凋亡的影响
目的探讨晚期糖基化终产物(advanced glycation end products,AGEs)对体外培养乳鼠心肌细胞细胞周期及凋亡的影响.方法体外培养3～5 d的乳鼠心肌细胞,用含1%或10%胎牛血清的DMEM培养基中继续培养24 h,应用流式细胞仪和原位末端标记技术观察不同浓度AGEs(50、100μg/ml)对心肌细胞刺激12、24、48 h后细胞周期分布、凋亡率及凋亡小体/凋亡细胞核分布的影响.结果AGEs对心肌细胞细胞周期分布无明显影响;在正常培养液培养时,心肌细胞的凋亡随着培养时间延长而增加,24、48 h与12h相比,凋亡小体/凋亡细胞核分别增加了0.55、1.23倍;AGEs可以明显增加心肌细胞的凋亡程度,并随着刺激时间、刺激浓度的增加而增加,50、100μg/ml AGEs组与对照组相比,凋亡小体/凋亡细胞核12、24、48 h分别增加了0.74和1.21、1.15和1.78、0.83和1.19倍.结论AGEs对心肌细胞细胞周期分布无影响,但可以通过增加心肌细胞凋亡率对心肌细胞造成损伤.
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自体心耳肌细胞移植对心功能的影响
目的 将急性分离的兔自体左心耳心肌细胞移植到自体梗死区心肌,以研究其对心功能的改善情况.方法 结扎成年兔的冠状动脉前降支,建立心肌梗死模型,4周后获取自体左心耳组织,急性消化分离为单细胞后分别将细胞悬液和培养液注射到移植组和未移植组梗死区内.4周后行超声心动图检查.结果 4周后移植组与未移植组兔子全部存活.超声心动图检查,至移植后第4周,移植组左室功能各项指标好于未移植组.结论 急性分离的自体左心耳心肌细胞移植到梗死区心肌内能够改善左室功能.
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缺血/再灌注对心肌细胞瞬间外向钾电流的影响
目的探讨在心肌缺血/再灌注后,瞬间外向钾电流(transient outside potassium current,Ito)的变化及其在室性心律失常发生中的作用.方法以常规方法制备大鼠心肌缺血/再灌注模型,以酶解法分离单个心室肌细胞,采用全细胞膜片钳记录技术观察缺血10 min和30 min后,再灌注组的心室肌细胞Ito的变化,以正常心肌的Ito为对照组.结果缺血/再灌注组心室肌细胞Ito电流密度电压关系曲线下移,+70 mV的Ito密度对照组为52.2±12.1pA/pF(n=11 cells),缺血10 min和30 min再灌注组分别为7.2±2.5 pA/pF(n=9 cells)和6.4±2.7 pA/pF(n=10cells),与对照组相比有显著性差异(P＜0.01).其失活曲线右移,半数大失活电位对照组为-60±14 mV(n=9cells),缺血10 min和30 min再灌注组分别为-58±12 mV(n=8 cells)和-50±12 mV(n=9 cells),与对照组比较,缺血30 min再灌注组显著减小(P＜0.05),而缺血10 min再灌注组变化不明显(P＞0.05).缺血10 min再灌注组Ito失活后再恢复过程较对照组显著减慢(P＜0.05),而缺血30 min再灌注组有恢复趋势.结论缺血/再灌注心室肌细胞瞬间外向钾电流受抑制,可能为缺血/再灌注性心律失常发生的机制之一.
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红景天苷通过HIF-1途径对缺氧诱导心肌细胞凋亡的抑制作用
目的:研究红景天苷(Sal)抑制缺氧诱导的心肌细胞凋亡作用并探讨其可能的分子机制.方法: 将原代培养的心肌细胞分为6组:正常对照组、缺氧组、缺氧+不同剂量Sal预处理组(10,50,100 mg/L)和缺氧+10-7mol/L胰岛素组.比色法测定细胞存活率、细胞培养上清液乳酸脱氢酶(LDH),肌酸激酶(CK)活力;Hoechst 33258染色观察细胞形态学改变;细胞流式检测术、DNA-ladder测定细胞凋亡;免疫荧光染色、蛋白印迹检测HIF-1α表达.结果:与缺氧组比较,不同浓度Sal预处理组可增加细胞存活率(P<0.05);显峙嘌锨逡篖DH,CK活力(P<0.01);减少Hoechst染色阳性细胞(P<0.01);流式细胞仪、DNA-ladder检测凋亡细胞比率降低.缺氧可激活HIF-1α的表达并诱导其转位,100 g/L Sal可明显增加HIF-1α蛋白的表达(P<0.01).结论:Sal可抑制缺氧诱导的心肌细胞的凋亡,该抑制作用具有剂量依赖性,其分子机制可能与激活HIF-1α的表达,诱导其转位有关.
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体外分化小鼠胚胎干细胞及乳大鼠心室肌单个心肌细胞获取方法的建立
目的:探讨体外分化的小鼠胚胎干细胞及乳大鼠心室肌组织单个心肌细胞获取方法.方法:用胰酶、胶原酶溶液消化乳大鼠心室肌组织及小鼠胚胎干细胞源心肌细胞,获得细胞悬液经Percoll分离纯化后,再低密度接种富集的心肌细胞,通过光镜观察获得的单个跳动的心肌细胞,采用免疫组织化学和激光共聚焦方法鉴定心肌细胞.结果:乳大鼠心室肌组织及小鼠胚胎干细胞源心肌细胞用胰酶、Dispase酶消化,经Percoll分离纯化后,能获得纯的单个心肌细胞,光镜下单个心肌细胞收缩明显而有力.免疫组织化学和激光共聚焦观察发现单个心肌细胞中有肌原纤维束.结论:使用胰酶、Dispase酶消化后,经Percoll分离纯化可从体外分化小鼠胚胎干细胞及乳大鼠心室肌组织获得活性良好的单个心肌细胞.
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人心房肌Kv1.5钾通道稳定表达细胞系的建立
目的:建立稳定表达人心房肌细胞Kv1.5钾通道的细胞系. 方法:将编码人心房Kv1.5钾通道的hKv1.5基因转染HEK 293细胞,用1 g/L G418筛选2 wk后采用膜片钳方法筛选具有抗G418抗性的细胞克隆,电流记录模式为全细胞记录. 结果:hKv1.5通道基因被成功转入HEK 293细胞并稳定表达;稳定表达的hKv1.5电流是具有明显电压依赖性和超快激活特点的外向电流,其电流大小为(3.20±0.60)nA,其激活电压在-30 mV左右. 结论:成功构建稳定表达人心房Kv1.5钾通道蛋白的HEK 293细胞系,其电流特性与人心房肌IKur相似,可以作为体外研究人心房IKur的细胞模型.
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血管紧张素-(1-7)对血管加压素诱导心脏成纤维细胞增殖和胶原合成的影响
目的: 研究血管紧张素-(1-7)[Ang-(1-7)]对血管加压素(AVP)诱导心脏成纤维细胞(CFs)增殖和胶原合成的影响.方法:分离培养SD仔鼠CFs,四氮唑盐(MTT)比色法检测细胞增殖,流式细胞分析仪测定细胞周期,逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)测定CFsⅠ,Ⅲ型胶原mRNA的表达.结果: ① 0.1 μmol/L AVP作用24 h,CFs的MTT吸光度值(0.24±0.01)较无血清对照组(0.14±0.01)明显增加(P<0.01);0.001～1 μmol/L Ang-(1-7)和0.1 μmol/L AVP共同干预后吸光度值逐渐降低,分别为0.22±0.01,0.21±0.01,0.18±0.01和0.16±0.01,均显著低于AVP组(P<0.01).② AVP组CFs的S期百分率(14.00±0.94)和增殖指数(23.44±1.75)较对照组(5.40±0.67和10.82±2.40)明显增高(P<0.01);0.1 μmol/L Ang-(1-7)干预后S期百分率(8.52±0.70)和增殖指数(16.24±2.04)较AVP组降低(P<0.01).③ AVP刺激后CFs的Ⅰ,Ⅲ型胶原mRNA表达水平分别较对照组明显增高(P<0.01);给予0.001～1 μmol/L Ang-(1-7)和0.1 μmol/L AVP共同干预后,胶原表达水平浓度依赖性的下降,均显著低于AVP组(P<0.05).结论: Ang-(1-7)具有抑制CFs增殖和胶原合成的作用.
关键词： 血管紧张素-(1-7) 血管加压素 心肌/细胞学 成纤维细胞 胶原
