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5-氮杂-2'-脱氧胞苷诱导肝癌细胞HepG2 RUNX3基因表达及增强药物敏感性
UNX3(PEBP2aC/CBFK3/AML2)为新近克隆的一种候选抑癌基因,该基因在人类多种肿瘤中存在甲基化异常,而抑癌基因启动子及其CpG岛胞嘧啶高甲基化可导致基因表达失活.
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健择治疗恶性肿瘤的护理
健择(GEM)即注射用吉西他滨,是一种人工合成的嘧啶核苷类似物,其结构类似于脱氧胞苷和阿糖胞苷,是一种新的细胞周期特异性抗代谢类药,主要作用于DNA合成期的肿瘤细胞,使DNA断裂,细胞死亡[1],它抗癌谱广,疗效好,临床主要用于非小细胞肺癌和胰腺癌的治疗,与DDP联用有协同作用[2];但健择的毒副反应较大,常常引起病人对治疗的恐惧,我科应用健择治疗晚期恶性肿瘤14例,通过仔细的观察和护理,保证了治疗的顺利进行,未发生任何并发症,取得满意效果,现报道如下.
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5-氮-2'脱氧胞苷对人卵巢癌细胞RUNX3基因启动子区甲基化状态的影响
目的 研究抑癌基因RUNX3启动子区在人卵巢癌细胞系(3AO、SKOV3)及正常卵巢细胞系(NOEC)中的甲基化状态,以及5-氮-2'脱氧胞苷(5-aza-2'deoxycytidine)对人卵巢癌细胞3AO及SKOV3增殖与凋亡及RUNX3 mRNA表达的影响,探讨RUNX3基因甲基化与卵巢癌发生及发展的关系.方法 用甲基化特异性PCR(MSP)法检测经特异性甲基转移酶抑制剂5-氮-2'脱氧胞苷处理前后卵巢癌细胞3AO、SKOV3以及NOEC中RUNX3基因启动子区的甲基化状态;并用0.5、5、50 μmol/L 5-氮-2'脱氧胞苷处理人卵巢癌细胞株3AO及SKOV3共3 d,继续常规培养5 d后,采用四唑盐(MTT)比色观察细胞经药物处理前后的生长活性,以半定量RT PCR检测细胞经药物处理前后抑癌基因RUNX3 mRNA 的表达,应用流式细胞仪进行细胞凋亡率的检测.结果 正常卵巢细胞中未见RUNX3启动子甲基化,卵巢癌细胞3AO及SKOV3均发现RUNX3启动子甲基化现象;卵巢癌细胞3AO、SKOV3均可见RUNX3 mRNA表达,但与正常卵巢细胞比较表达较弱,经药物处理癌细胞后其RUNX3 mRNA的表达较前明显增强,且其表达强度与5-氮-2'脱氧胞苷的浓度存在剂量依赖关系;与加药前比较,5-氮-2'脱氧胞苷在0.5、5、50 μmol/L浓度时均能明显抑制肿瘤细胞生长,随5-氮-2'脱氧胞苷浓度增加,细胞生长速率下降,加药前细胞凋亡率SKOV3为 (2.71±0.81)%;3AO为(3.23±0.68)%,经5-氮-2'脱氧胞苷0.5、5、50 μmol/L处理细胞后,细胞凋亡率SKOV3为(2.71±0.81)%、(15.43±1.33)%、(25.55±1.61)%;3AO为(10.66±2.09)%、(16.51±1.42)%、(25.46±1.55)%.与加药前比较,差异均有统计学意义(P<0.01),且凋亡率与5-氮-2'脱氧胞苷浓度呈剂量依赖关系(F=138.7;142.3,均P<0.05).结论 特异性甲基转移酶抑制剂5-氮-2'脱氧胞苷可逆转、恢复并增强人卵巢癌细胞系3AO及SKOV3中RUNX3基因表达,抑制癌细胞生长及诱导部分癌细胞凋亡.
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5-氮-2-脱氧胞苷调控胆管癌p53-Bax线粒体凋亡通路DNA甲基化诱导化疗敏感性的研究
目的 探讨甲基转移酶抑制剂5-氮-2-脱氧胞苷(DAC)对胆管癌细胞QBC939生长的影响及其机制.方法 应用MTT法检测DAC对QBC939细胞存活率的影响,流式细胞仪观察细胞生长周期及凋亡率的变化,光镜及透射电镜观察细胞形态学改变;甲基化聚合酶链式反应检测DAC作用前后p53-Bax凋亡通路DNA甲基化变化;观察经DAC作用后5-氟尿嘧啶(5-Fu)对胆管癌细胞体内、外生长的影响.结果 DAC对QBC939细胞生长有抑制作用,经DAC处理后,电镜下细胞退变,有较多凋亡小体形成;DAC处理后胆管癌细胞凋亡率约43.04%,而未经DAC处理胆管癌细胞凋亡率仅为4.31%;未经DAC作用前p53-Bax凋亡通路中p14、DAPK抑癌基因甲基化,经DAC作用后p14、DAPK抑癌基因脱甲基化;DAC处理后增强了5-Fu对胆管癌细胞的凋亡率,裸鼠体内成瘤率下降,肿瘤体积减小.结论 DAC对胆管癌QBC939细胞的生长具有抑制作用,DAC对胆管癌QBC939细胞p53-Bax线粒体凋亡通路DNA甲基化的影响使细胞凋亡功能得以恢复,增强5-Fu对胆管癌化疗的敏感性并抑制肿瘤生长.
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吉西他滨治疗胰腺癌的临床和实验研究进展
吉西他滨(Gemcitabine,化学名2-脱氧-2'2-盐酸二氟脱氧胞苷),是细胞周期特异性抗代谢药,属于新型抗嘧啶核苷酸代谢化疗药物.研究证实,Gemcitabine可以显著延长患者生存期和提高临床受益率,于1996年被美国FDA批准为抗胰腺癌一线药物,从此胰腺癌的化学治疗进入全新阶段.本?揪文就Gemcitabine的临床和实验研究进展做一综述.
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肺癌组织中DNA错配修复基因hMLH1及hMSH2启动子区异常甲基化的研究
DNA错配修复基因hMLH1及hMSH2启动子区(cpG岛)异常甲基化可导致抑癌基因失活,促进肿瘤发生[1].本研究中检测肺癌组织中hMLH1及hMSH2 CpG岛异常甲基化状态并分析特异性甲基化酶抑制剂5-氮-2'-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)对肺癌A549和PG细胞中hMLH1及hMSH2 mRNA表达的影响,探讨肺癌的发生机制,寻找新的治疗方法.
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骨髓增生异常综合征治疗进展
骨髓增生异常综合征( MDS)是一组需按患者临床特点、不同预后亚组、年龄和体能进行选择性治疗的异质性疾病.有关MDS的分类和预后积分系统近年来取得了一定进展[1],从而使药物治疗与方案设计获得了一定改善.2004年前,国际上从未认同任何一种用于治疗MDS的药物.之后4年内,有4种药物陆续经美国FDA批准上市,供MDS治疗使用:5-氮(杂)胞苷(5-AZGR)、5-氮-2'-脱氧胞苷(地西泰平)、来利度胺和治疗铁过载的新型口服铁螯合剂"地拉罗司分散片".
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Syk基因表达对乳腺癌生长、转移影响的动物实验
我们观察了DNA甲基转移酶抑制剂5-氮2′-脱氧胞苷(5-aza-CDR)对人乳腺癌裸鼠移植肿瘤生长和转移的作用,探讨其抗肿瘤效应.
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5氮2脱氧胞苷与三苯氧胺协同抗雌激素受体α阴性乳腺癌的体外实验研究
目的观察5氮2脱氧胞苷(5-aza-CdR)对雌激素受体α(ERα)阴性人类乳腺癌细胞株MDA-MB-231和MDA-MB-435ERα基因诱导表达作用;5-aza-CdR联合三苯氧胺(TAM)对ERα阴性乳腺癌细胞的体外抑制作用.方法应用甲基化特异性PCR(MSP)检测MDA-MB-231和MDA-MB-435细胞和20例ERα阴性乳腺癌组织ERα基因核心启动子区CpG岛甲基化情况;5-aza-CdR处理MDA-MB-231和MDA-MB-435细胞,逆转录PCR(RT-PCR)检测ERαmRNA表达;5-aza-CdR、TAM分别或联合作用于MDA-MB-231和MDA-MB-435细胞,MTT比色法分析细胞生长抑制作用,流式细胞仪测定细胞周期分布和凋亡率.结果适当浓度的5-aza-CdR能诱导MDA-MB-231和MDA-MB-435细胞表达ERαmRNA,抑制细胞生长、阻滞细胞周期于G0/G1期,诱导细胞凋亡;TAM对MDA-MB-231和MDA-MB-435细胞生长、细胞周期无影响;而两药联合时能显著抑制细胞生长,诱导细胞凋亡,凋亡率分别为48.8%和53.1%.结论 5-aza-CdR能诱导ERα阴性乳腺癌表达ERαmRNA,恢复ERα阴性乳腺癌细胞对TAM的敏感性,联合TAM能协同抑制ERα阴性乳腺癌细胞生长,诱导细胞凋亡,从而为ERα阴性乳腺癌开辟新的内分泌治疗途径提供实验依据.
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吉西他滨对人子宫颈癌HeLa细胞的放射增敏作用及其机理研究
目的研究低浓度[即处理24 h时的10%药物致死剂量,24 h IC10]吉西他滨对人宫颈癌HeLa细胞的放射增敏作用及其机理.方法采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法筛选吉西他滨增敏实验的浓度(即24 h IC10);以该浓度吉西他滨处理HeLa细胞4、8、12及24 h,弃药后立刻行60Coγ射线照射(4、6、8 Gy),计数细胞存活分数,计算增敏比;同时采用流式细胞仪分析细胞周期分布和凋亡效应,蛋白印迹杂交法分析p53、bcl-2及bax蛋白表达量的变化.结果吉西他滨的24 h IC10为0.01 μmol/L,该浓度吉西他滨分别处理细胞4、8、12及24 h,弃药后立刻照射,增敏比分别为1.19、1.35、1.72、1.93.流式细胞仪分析显示,S期细胞比例随吉西他滨处理时间延长而逐渐升高(P＜0.01),其中处理24 h时,S期细胞占51.8%.吉西他滨处理后照射,凋亡细胞比例占21.6%,同时,凋亡相关基因p53、bcl-2及bax蛋白的表达量,与单纯吉西他滨处理及单纯照射相比无明显变化(P＞0.05).结论低浓度吉西他滨对HeLa细胞具有放射增敏作用,其增敏比随吉西他滨处理时间延长而增加.增敏机理与细胞S期阻滞密切相关,而与引发细胞凋亡关系不明显.
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卵巢上皮性癌组织中p16INK4A基因表达缺陷的意义及其与甲基化的关系
目的研究抑癌基因p16INK4A在卵巢上皮性癌(卵巢癌)组织及细胞系中的表达变化,分析其表达变化与甲基化的关系.方法选取7种卵巢癌细胞系、18份卵巢癌组织和10份正常卵巢组织为研究对象.采用甲基化特异性PCR方法检测p16INK4A基因甲基化状态;RT-PCR技术检测p16INK4A基因的mRNA表达;蛋白印迹(western blot)法检测P16INK4A蛋白的表达.5-杂氮-2'-脱氧胞苷对p16INK4A基因甲基化的卵巢癌细胞进行去甲基化处理,再次进行p16INK4A基因的mRNA和蛋白表达的检测,以及p16INK4A基因甲基化的分析.检测5-杂氮-2'-脱氧胞苷处理前后卵巢癌细胞的生长情况;并将处理前后的细胞接种于裸鼠,观测肿瘤的体积、重量.结果3种卵巢癌细胞系(Anglne、SW626和OVCAR3细胞)、6份卵巢癌组织中存在p16INK4A基因甲基化,卵巢癌细胞和卵巢癌组织中的甲基化率分别为3/7和33％(6/18).卵巢癌细胞系、卵巢癌组织和正常卵巢组织中,p16INK4A基因的mRNA相对含量的平均值分别为0.34±0.11、0.81±0.13、1.52±0.12,蛋白相对含量的平均值分别为0.56±0.14、1.32±0.12、2.09±0.11,卵巢癌细胞系、卵巢癌组织分别与正常卵巢组织相比,差异均有统计学意义(P＜0.05).有甲基化表现的卵巢癌细胞和组织中p16INK4A基因的mRNA和蛋白表达均下降.5-杂氮-2'-脱氧胞苷处理能使p16INK4A基因甲基化的卵巢癌细胞中的p16INK4A基因的mRNA和蛋白重新表达或表达增高.与去甲基化处理前比较,去甲基化处理后Anglne、SW626和OVCAR3细胞的生长速度均减慢;接种去甲基化处理的OVCAR3细胞的裸鼠中,肿瘤体积和重量明显减小,分别为(0.243±0.022)cm3、(0.035±0.004)g.结论p16INK4A基因的表达下降或缺失在卵巢癌的发生中起重要作用,DNA甲基化是其表达缺陷的原因,去甲基化处理可以恢复p16INK4A基因的表达并抑制卵巢癌细胞的增殖.
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卵巢上皮性癌细胞中E钙黏素基因的甲基化状态及去甲基化的意义
目的 研究卵巢上皮性癌(卵巢癌)细胞中E钙黏素(E-cad)基因启动子区5'二核苷酸胞嘧啶(5'CpG)岛的甲基化状态,观察DNA甲基转移酶抑制剂--5-杂氮脱氧胞苷(5-Aza-CdR)去甲基化后对卵巢癌细胞的生长、侵袭以及E-cad蛋白表达的影响.方法 采用甲基化特异性PCR(MSP)技术检测卵巢癌细胞系ES-2、3AO及SKOV3细胞中E-cad基因启动子区5'CpG岛的甲基化状态.以不同浓度(分别为0.1、110、10.0μmoL/L)的5-Aza-CdR处理卵巢癌细胞后,电镜下观察细胞形态的变化,四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测细胞生长情况,蛋白印迹法检测细胞中E-cad蛋白表达的变化,体外侵袭实验检测细胞侵袭能力的变化.结果 MSP技术检测显示,ES-2及SKOV3细胞中E-cad基因启动子区5'CpG岛呈高度甲基化状态和非甲基化状态,3AO细胞中E-cad基因启动子区5'CpG岛仪呈非甲基化状态.经不同浓度(分别为0.1、1.0、10.0 μmol/L)的5-Aza-CdR处理后,ES-2及SKOV3细胞的体积变小,皱缩,核/质比例缩小,核分裂象减少,随着药物浓度的增高,此种趋势逐渐明显;ES-2和SKOV3细胞中E-cad蛋白相对表达水平分别为0.274、0.320、0.398和0.415、0.507、0.638,均明显高于对照细胞(分别为0.131和0.342,P＜0.01);ES-2和SKOV3细胞穿膜细胞数分别为(88.8±2.5)、(60.7±2.4)、(36.1±3.0)个和(88.2±2.1)、(60.5±2.2)、(36.2±3.0)个,均明显低于对照细胞[分别为(121.9±2.3)、(97.6±2.7)个,P＜0.01].结论 启动子区5'CpG岛的高度甲基化是卵巢癌细胞中E-cad基因异常表达的重要机制之一,5-Aza-CdR能通过降低E-cad基因启动子区5'cpG岛的甲基化而恢复其在卵巢癌细胞中的表达,抑制卵巢癌细胞的增殖和侵袭.
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中～大剂量阿糖胞苷治疗儿童急性白血病等的毒副作用及防治
阿糖胞苷(Cytarabine,Ara-C)是脱氧胞苷阿拉伯糖核苷的类似物,Ara-C在急性白血病和淋巴瘤的治疗中起重要作用.
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急性白血病患儿胞苷脱氨酶单核苷酸多态性研究
胞苷脱氨酶(cytidine deaminase,CDA)是嘧啶解救途径中的一种酶,催化胞苷和脱氧胞苷不可逆水解脱氨形成相应的尿嘧啶術生物.
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泽菲联合奥沙利铂治疗复发性或难治性非霍奇金淋巴瘤的临床观察
目的:观察泽菲(盐酸吉西他滨,gemcitabine)联合奥沙利铂(oxaliplatin,L-OHP)和地塞米松(DXM)对复发性或难治性进展型非霍奇金淋巴瘤(non-Hodgkin's lymphoma, NHL)的疗效和毒副反应.方法: 泽菲1 000 mg/m2,静脉滴入,d1、d8;L-OHP 85 mg/m2,静脉滴入,d1、d8;DXM 40 mg/d,静脉推注,d1～d4.以3～4周为1个化疗周期.20例复发性或难治性进展型非霍奇金淋巴瘤患者,治疗≥3个周期.结果:20例患者中,15例获得缓解,占75.0%.其中完全缓解(CR)7例,部分缓解(PR)8例.7例具有B类症状的患者中,4例症状消失,2例明显改善,1例无改善.化疗毒副反应主要为轻度的胃肠道反应,少数患者出现轻度的骨髓抑制,如白细胞及血小板减少.结论:泽菲联合L-OHP和DXM对复发性或难治性进展型NHL有较好的近期疗效,能明显改善患者症状,且大部分患者可以承受其毒性,是一个值得进一步验证的补救性化疗方案.
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NP与GP方案治疗晚期非小细胞肺癌68例疗效分析
为了评价NP和GP方案治疗晚期非小细胞肺癌的疗效和不良反应.将1999年12月2日～2004年5月2日收治的68例非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)患者随机分为两组,分别应用NP和GP方案治疗.NP方案:长春瑞滨(NVB)25 mg/m2,d1、d8;顺铂(DDP)50 mg,d3～d5.GP方案:健择(Gemcitabine)1 000 mg/m2,d1、d8;DDP 50 mg,d3～d5,两种方案均21 d为1个周期,至少治疗2个周期.结果为NP组35例,无CR,PR 17例(48.6%),SD 13例(37.1%),PD 5例(14.3%),总有效率为48.6%(17/35),临床受益率85.7%(30/35).GP组33例,CR 1例(3.0%),PR 14例(42.4%),SD 13例(39.4%),PD 5例(15.2%),总有效率为45.5%(15/33),临床受益率84.8%(28/33).NP组和GP组中位进展时间分别为3.2和3.3个月,初治优于复治(NP组60% vs 33%,GP组52.6% vs 35.7%).剂量限制性毒性主要为骨髓抑制,NP组和GP组白细胞及血小板下降的发生率分别为80%、22.9%和51.5%、51.5%.NP组静脉炎及胃肠道反应较GP组重(31.4% vs 6.1%和57.1% vs 45.5%).初步研究结果提示,NP和GP方案治疗晚期NSCLC均安全有效,疗效相当,不良反应均可耐受.
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NP和GP方案治疗晚期非小细胞肺癌疗效分析
目的:评价NP和GP两组化疗方案治疗晚期非小细胞肺癌(non-small cell lungcancer,NSCLC)的疗效和不良反应.方法:将有明确的病理学和(或)细胞学诊断的63例晚期NSCLC患者分为两组,NP组33例,国产长春瑞滨(盖诺,NVB)25 mg/m2,静脉推注,d1、d8;顺铂(DDP)80～90 mg/m2,静脉滴入,d1;GP组30例,吉西他滨(健择,GEM)1.25 g/m2,静脉滴入,d1、d8;DDP 80～90 mg/m2,静脉滴入,d1.两组同时配合水化利尿,每21 d为1个周期,化疗3个周期后评价疗效,化疗期间记录不良反应.结果:NP与GP方案的有效率分别为36.3%和40.0%,中位生存时间分别为12.2和12.0个月,1年生存率分别为47.2%和43.5%,2年生存率分别为21.1%和17.8%.不良反应主要为血液学毒性和恶心、呕吐.结论:NP和GP两组化疗方案在治疗晚期NSCLC的近期疗效、中位生存期、1年和2年生存率方面相近,化疗不良反应可耐受.
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GP方案区域化疗与静脉化疗治疗进展期胰腺癌疗效的对比研究
目的:对比分析采用GP方案胰腺区域性动脉灌注与静脉化疗治疗晚期胰腺癌的临床疗效.方法:采用随机法将68例晚期胰腺癌分为胰腺区域性动脉灌注组36例和静脉化疗组32例,平均化疗2.5个周期.结果:胰腺区域性动脉灌注组有效率为25.0％,中位疾病进展时间为9个月,临床获益率为50.0％,中位生存期为12个月,6个月生存率为55.6％,9个月生存率为25.0％；静脉化疗组有效率为12.5％,中位进展时间为3个月,中位生存期为5.5个月,临床获益率为25.0％,6个月生存率为31.2％,9个月生存率为18.7％.胰腺区域性动脉灌注组有效率、临床获益率、中位进展时间、中位生存期及生存率均高于静脉化疗组,差异有统计学意义,P＜0.05.胰腺区域性动脉灌注组白细胞及血小板减少发生率分别为27.8％和25.0％,静脉化疗组分别为71.9％和56.3％.两组比较差异均有统计学意义,x2值分别为13.189和6.911,P值分别为0.000和0.009.结论:GP方案胰腺区域性动脉灌注是治疗进展期胰腺癌的有效方案,且毒副反应可耐受.
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5-氮杂-2’-脱氧胞苷对胃肠道间质瘤细胞GIST882生物学行为影响的研究
目的:研究甲基化抑制剂5-氮杂-2’-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)对人胃肠道间质瘤细胞GIST882生物学行为的影响,探讨其临床治疗胃肠道间质瘤的可能性.方法:MTT法和软琼脂集落形成实验检测5-Aza-CdR对GIST882细胞增殖的影响,划痕愈合及Transwell小室实验观察细胞体外迁徙侵袭能力的改变,流式细胞术检测5-Aza-CdR对细胞凋亡和细胞周期的影响,免疫细胞化学检测处理前后Caspase-9和Bcl-2蛋白表达的变化.结果:5-Aza-CdR呈浓度和时间依赖性抑制GIST882细胞增殖,并减弱GIST882细胞的迁移及侵袭能力,P＜0.05.药物作用48 h后,10 ng/mL时细胞凋亡率为(7.4±0.8)％,与对照组相比显著升高,P＜0.05；100ng/mL时G0/G1期细胞比例显著增加,细胞周期阻滞于G0/G1期.经5-Aza-CdR作用后,凋亡相关蛋白Caspase-9的表达增加,Bcl-2的表达降低,P＜0.05.结论:5-Aza-CdR能抑制胃肠道间质瘤GIST882细胞增殖,诱导其凋亡,具有一定的临床应用前景.
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吉西他滨联合卡培他滨治疗一线耐药乳腺癌的临床观察
为了观察吉西他滨(GEM)联合卡培他滨治疗蒽环类和(或)紫杉类耐药性晚期乳腺癌的疗效和毒副反应,2003-01-2006-03应用GEM联合卡培他滨治疗蒽环类和(或)紫杉类药物耐药的晚期乳腺癌38例,每例治疗2～6个周期,评价疗效并记录毒副反应.38例患者中,CR 4例(10.5%),PR 12例(31.6%),SD 14例(36.8%),PD 8例(21.1%),总有效率为42.1%(16/38),临床获益率为78.9%(30/38),中位疾病进展时间为8.5个月(2～59个月).1,2年生存率分别为60.5%和31.6%.主要毒副反应为骨髓抑剜、胃肠道反应和手足综合征,Ⅲ～Ⅳ度白细胞减少发生率较低,手足综合征和消化道反应以Ⅰ、Ⅱ度为主.初步研究结果提示,GEM联合卡培他滨对蒽环类物和(或)紫杉类耐药的转移性乳腺癌有较好疗效,且毒副反应可以耐受.中华肿瘤防治杂志,2008,15(23):1824-1825
