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荭草素抑制3T3-L1前脂肪细胞分化及其改善胰岛素抵抗的作用研究
目的 研究荭草素对3T3-L1前脂肪细胞分化及对脂肪细胞胰岛素抵抗的影响,并探讨其作用机制.方法 传统鸡尾酒法诱导分化3T3-L1前脂肪细胞,MTT法检测荭草素对前脂肪细胞活力的影响,油红O染色法检测脂质积累,酶法检测细胞内甘油三酯(triglyceride, TG)的含量.地塞米松诱导成熟的脂肪细胞,建立胰岛素抵抗模型,荧光标记2-脱氧葡萄糖(2-[N-(7-nitrobenz-2-oxa-1, 3-diaxol-4-yl) amino]-2-deoxyglucose,2-NBDG)摄入法观察脂肪细胞对葡萄糖的摄取能力;Western blot检测腺苷酸活化蛋白激酶(adenosine monophosphate activated protein kinase, AMPK)、乙酰辅酶A羧化酶(acetyl CoA carboxylase, ACC)的磷酸化水平及葡萄糖转运体4(glucose transporter type 4, GLUT4)的表达水平,免疫荧光法检测GLUT4的向膜转位能力.结果 荭草素可浓度依赖性地减少细胞脂滴的积累及细胞内TG的含量,但对细胞活力无明显的影响(P>0.05).胰岛素抵抗状态下,荭草素明显增加脂肪细胞对2-NBDG的摄取(P<0.05),明显上调AMPK、ACC的磷酸化水平(P<0.05),促进GLUT4的向膜转位及表达.结论 荭草素抑制前脂肪细胞的分化,同时,荭草素通过上调AMPK/GLUT4信号途径相关蛋白的表达,促进了细胞对葡萄糖的摄取,达到改善胰岛素抵抗的作用.
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脂联素对糖尿病大鼠的肾脏保护作用及其抗氧化机制探讨
目的 研究脂联素(ADPN)对糖尿病大鼠的肾脏保护作用及其相关的抗氧化机制.方法 采用高糖高脂饮食配合腹腔注射链脲佐菌素(STZ)的方法 复制2型糖尿病大鼠模型,可表达球形脂联素的pIRES2-EGFP-gAd质粒用脂质体介导经腹腔转染糖尿病大鼠模型体内.将32只Wistar大鼠随机分为正常对照组(NC组)、糖尿病模型组(DM组)、ADPN干扰组(DA组)和空载体转染组(DP),分别给予相应处理8周后,观察血糖、糖化血红蛋白(HbAlc)、24 h尿微量白蛋白排泄率(UAER)变化;留取肾组织切片观察光镜下的病理改变并测定肾组织ROS释放量的变化;免疫组化法和Western Blot测定内皮型一氧化氮合酶(eNOS)和磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶(p-AMPK)蛋白的表达.结果 与正常对照组比较,DM模型组大鼠UAER显著上升,肾组织ROS释放量增加(P<0.05),DM、DA、DP各组之间尿蛋白无明显差异(P>0.05).与DM组相比,DA组血糖和HbAlc有所下降,ROS释放明显减少(P<0.05).光镜下DM组大鼠大部分肾小球系膜区增宽,基质大量增生,节段性基底膜增厚、部分肾小管上皮细胞空泡变性、脱落,肾小球内细胞数显著增多、单个核细胞浸润明显,与DM组相比,脂联素干预组以上病变均有减轻.与对照组相比DM组肾组织eNOS水平下降.p-AMPK蛋白表达下调(P<0.05),脂联素干预组eNOS水平也有下降,但较DM组升高,p-AMPK蛋白表达亦高于DM组(P<0.05).结论 脂联素对糖尿病大鼠肾脏具有保护作用,其机制可能部分通过刺激AMPK磷酸化,抑制ROS产生,减轻氧化应激反应,上调糖尿病大鼠肾组织中eNOS的表达实现的.
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肝细胞肝癌AMPK磷酸化及其与预后的关系
目的 探讨磷酸化的腺苷酸活化蛋白激酶(p-AMPK)在人肝癌组织中的表达及其与肝癌预后的关系.方法 收集2013年5月至2015年5月第一作者进修医院(重庆医科大学附属第一医院)因肝癌行肝叶切除术,且术后病理明确为肝细胞肝癌的136例肝癌组织石蜡标本,采用免疫组织化学法检测p-AMPK的表达情况,通过Kaplan-Mei-er生存分析法、COX回归进行统计学分析.结果 136例肝癌石蜡标本中,91例(66.9%)患者肝癌组织中p-AMPK低表达,p-AMPK低表达的患者1、2、3年总体生存率分别为41.4%、25.8%、19.4%,低于p-AMPK高表达的患者(74.0%、51.6%、48.4%);p-AMPK低表达的患者1、3、5年无瘤生存率分别为28.0%、20.4%、17.5%,低于p-AMPK高表达的患者(52.7%、43.2%、43.2%),差异均有统计学意义(P<0.05).多因素COX回归分析显示,p-AMPK低表达是总体生存率及无瘤生存率的独立危险因素(HR 2.894,95%CI 1.702~4.922,P<0.05;HR 2.246,95%CI 1.381~3.652,P<0.05).结论 p-AMPK对肝癌细胞的生物学行为有重要影响,可作为判断肝癌预后的一个新指标.
