首页 > 文献资料
-
马链球菌兽疫亚种中国株的类M蛋白基因抗原表位片段的克隆与表达
目的构建马链球菌兽疫亚种(Streptococcus equi subsp.zooepidemicus)中国株的类M蛋白基因抗原表位片段的重组表达质粒(pET-Szp),并检测表达产物的免疫反应性.方法根据GenBank登录的马链球菌兽疫亚种纽约分离株w60类M蛋白基因序列设计和合成引物,以该菌中国分离株ATCC35246的基因组DNA为模板,扩增类M蛋白基因5'端第583～1068bp片段,并按正确的阅读框架定向克隆到表达载体pET-32a(+)中,将重组质粒转化大肠杆菌BL21株,用IPTG诱导表达,并通过SDS-PAGE和免疫印迹对表达蛋白进行初步分析.结果扩增出486bp的马链球菌兽疫亚种ATCC35246的类M蛋白基因片段,该基因在大肠杆菌表达系统中经诱导,得到分子量为50 000的表达产物,免疫印迹表明该产物具有特异的免疫反应性.结论成功构建了表达马链球菌兽疫亚种中国株类M蛋白片段的重组表达质粒,并实现在大肠杆菌中表达,为重组类M蛋白亚单位疫苗的研制奠定了基础.
-
检测两种猪源链球菌抗体间接ELISA方法的筛选与应用
目的建立检测马链球菌兽疫亚种(Streptococcus equi subsp zooepidemius,Sez)与猪链球菌2型(Streptococcus suis type 2,Ss2)抗体的间接ELISA方法.方法选用Sez与Ss2的全菌(WAC)、超声波抗原(UA)、英膜多糖(capsular polysaccharide,CPS)作为抗原,筛选优的检测两种抗体间接ELISA方法.结果 3种抗原检测60份免疫后的血清表明,Sez与Ss2的CPS抗体阳性率分别为98.3%、96.7%,WAC为91.7%、85%,UA均为88.3%,前者与后两者差异显著(P＜0.05).检测免疫前50份血清、免疫后156份血清、60份临床采集血样表明,10%猪免疫前呈现Sez与Ss2的CPS抗体阳性;免疫后CPS抗体阳性率均在90%以上,此结果与免疫保护率相一致;苏州与常州两个猪场的血清各30份,CPS抗体阳性率均在6.7%左右.结论 CPS-ELISA方法具有较好的稳定性、特异性、灵敏性,此方法在诊断和流行病学调查方面有价值.
-
马链球菌兽疫亚种毒力因子
马链球菌(Streptococcus equi)属于兰氏分菌的C群链球菌,包括马链球菌马亚种(Streptococcus.equi subsp.equi)、马链球菌兽疫亚种(S.equi subsp.zooepidemicus)和马链球菌类马亚种(S.equi subsp.equisimilis)其中兽疫亚种没有宿主专嗜性,容易发生变异,来源不同的菌株抗原性可能不同.该菌可通过消化道、外伤、手术、注射疫苗或治疗等途径感染多种动物,引发败血症、脑膜炎、心内膜炎、关节炎、乳腺炎等[1-3].人类因食用污染的食物或与发病动物密切接触后,亦可引发该菌感染[4-6].马链球菌兽疫亚种主要引起猪的链球菌病,曾在我国华南、西南和华东等地区广泛流行,至今仍给我国养猪业造成较大的危害.毒力因子(virulent factor)是指构成细菌毒力的物质.马链球菌兽疫亚具有类M蛋白、金属结合蛋白、链激酶、IgG结合蛋白、纤连蛋白、透明质酸荚膜等毒力因子,在该菌感染、侵袭以及抵抗机体吞噬的过程中,起着重要的作用.
-
马链球菌兽疫亚种10株国内猪源分离株对小鼠免疫效力的评价
目的 近年来马链球菌兽疫亚种引起的猪链球菌病在我国造成重大损失.为评价猪源兽疫亚种分离株的抗原变异,取国内10省市分离的10株猪源兽疫亚种分离株,分别制备灭活抗原,加入弗氏完全佐剂免疫12 w龄ICR小鼠,4 w后加入弗氏不完全佐剂进行再次免疫,再次免疫2 w后分别用5 LD50同源菌株和1.6×105 CFU ATCC35246株攻击.结果 表明,同源菌株攻击,免疫保护率均在90%以上;而以ATCC35246攻击的异源菌免疫小鼠,免疫保护率为80%～100%.可见我国不同地区的猪源马链球菌兽疫亚种分离株的抗原性差异不大,单一菌株制备的疫苗具有应用前景.
